酶标A-蛋白的简易制备法

葡萄球菌A-蛋白(简称SPA),是从金黄色葡萄球菌细胞壁上分离出来的一种蛋白质。上海生物制品所供应的冻干纯品分子量约为40,000,其上有几个与IgG Fc段结合的位点,将它标上荧光色素或一定的酶,可作免疫组织化学或其他免疫学反应,代替第二抗体(但少数动物如马、牛、鸡等的IgG不能与SPA结合)。一般标记后均需用层析等办法,分离提纯酶标物而除去非标记物,手续较     

Experimental Study of Effect of Corticosterone on Primary Cultured Hippocampal Neurons and Their Ca^2＋／CaMK Ⅱ Expression

Summary: To explore the effect of different concentrations of corticosterone (CORT) on primary cultured hippocampal neurons and their Ca^2 /CaMK Ⅱ expression and possible mechanism, the changes of hippocampal neurons were observed in terms of morphology, activity of cells, cell death.concentrations of cytosolic free calcium, and the expression of CaMK Ⅱ by using MTT assay, flow cytometry, fluorescent labeling of Fura-2/AM and Western hlotting after 10^-7. 10^-8 and 10^-5 mol/L of CORT was added to culture medium. The evident effect of 10^-6 and 10^-5 mol/L of CORT on the morphology of hippocampal neuron was found. Compared with control neurons, the activity of the cells was markedly decreased and [Ca^2 ], increased in the neurons treated with 10^-6 and 10^-7mol/L of CORT. but no change was observed in the neuron treated with 10^-7 mol/L of CORT.The death was either by way of apoptosisor necrosis in the cells treated with 10^-4 and 10^-5mol/L of CORT respectively. The correlation analysis showed that a reverse correlation existed between [Ca^2 ];and the expression of CaMKⅡ. Either apoptosis or necrosis occurs in the hippocampal neurons treated with CORT. The increased hippocampal [Ca^2 ], is both the result of CORT impairing the hippocampal neurons and the cause of the apoptosis of hippocampal neurons and the decreased CaMKⅡ expression.     

海马内主要神经递质系统和递质释放的自身受体介导作用

海马在学习与记忆功能方面发挥着关键作用 ,因此 ,近2 0年来 ,在神经科学研究中它成为主要的对象之一 ,在此期间 ,积累了大量的神经化学资料。本文主要介绍在海马内发现的主要神经递质系统 ,包括谷氨酸 (Glu)能、(γ-氨基丁酸(GABA)能、乙酰胆碱 (ACh)能、去甲肾上腺素 (NA)能和 5 -羟色胺 (5 - HT)能系统 ,以及海马内各种结构上的自身受体在神经递质释放的突触前调制中的作用。1.　海马结构内主要的神经递质系统1.1　 Glu能系统Glu能通路和细胞在海马结构内形成三级突触环路 ,即由内嗅皮质来的主要 Glu能传入纤维与齿状回区的主细胞…     

海马内主要神经递质系统递质释放的异源受体介导作用

海马的主要神经递质包括谷氨酸 (Glu)能、γ-氨基丁酸(GABA)能、乙酰胆碱 (ACh)能、去甲肾上腺素 (NA)能和 5 -羟色胺 (5 - HT)能等系统。这些递质系统神经元的胞体、树突和 /或轴突上存在递质的受体 ,它们介导调节神经递质的释放。这些受体根据其所接受递质来源的不同分为自身受体(autoreceptor)、异源受体 (heteroreceptor)和同源受体 (ho-moreceptor)。自身受体是指接受自身神经元释放的递质的作用而发挥介导作用的受体 ;异源受体系指接受不同类型神经元释放的递质的作用而发挥介导作用的受体 ;同源受体系指接受其它同类型神经元释…     

皮质酮对原代培养的海马神经元及其Ca2+/CaMKⅡ的影响

在培养液中加入10-7、10-6和10-5浓度(mol/L)的皮质酮,采用MTT染色测定、Fura-2/AM的荧光标记以及Western印迹的方法,观察了不同浓度的皮质酮作用下海马神经元形态学和细胞存活率的变化以及胞浆内游离钙离子浓度[Ca2+]i和CaMKII表达的变化规律,探讨其对原代培养的大鼠海马神经元及其Ca2+/CaMKII的影响和可能的机制.结果发现10-6、10-5浓度的皮质酮对海马神经元的形态学影响较大,与对照组比较,细胞存活率明显降低;[Ca2+]i分别为113.1022±16.9716、155.3794±20.7727;CaMKII的表达也明显减少;三者的变化均显著(P＜0.01),而10-7浓度的皮质酮对上述指标影响不大(P＞0.05).此外,相关性分析表明[Ca2+]i和CaMKII的表达呈现负相关(P＜0.05).以上结果提示,皮质酮对大鼠海马神经元的作用存在浓度依赖效应,浓度越高,对大鼠海马神经元的损伤越大,同时也验证了皮质酮是啮齿类动物的主要的应激激素.     

皮质酮对原代培养的海马神经元及其Ca~(2+)/CaMKII的影响

在培养液中加入 10 7、10 6和 10 5浓度(mol/L)的皮质酮,采用MTT染色测定、Fura 2 /AM的荧光标记以及Western印迹的方法,观察了不同浓度的皮质酮作用下海马神经元形态学和细胞存活率的变化以及胞浆内游离钙离子浓度 [Ca2+ ]i和CaMKII表达的变化规律, 探讨其对原代培养的大鼠海马神经元及其Ca2+ /CaMKII的影响和可能的机制。结果发现: 10 6、10 5浓度的皮质酮对海马神经元的形态学影响较大,与对照组比较,细胞存活率明显降低; [Ca2+ ]i分别为 113. 1022±16. 9716、155.3794±20. 7727;CaMKII的表达也明显减少;三者的变化均显著 (P<0. 01 ),而 10 7浓度的皮质酮对上述指标影响不大 (P>0.05)。此外,相关性分析表明: [Ca2+ ]i和CaMKII的表达呈现负相关(P<0. 05)。以上结果提示,皮质酮对大鼠海马神经元的作用存在浓度依赖效应,浓度越高,对大鼠海马神经元的损伤越大,同时也验证了皮质酮是啮齿类动物的主要的应激激素。     

慢性复合应激对大鼠学习与记忆及海马 NMDA受体NR1亚基表达的影响

目的：观察慢性复合应激对大鼠学习与记忆的影响和海马内NMDA受体亚基NR1表达的变化。方法：成年雄性Wistar大鼠实验组每天交替暴露于复合应激原环境中达6w，然后作Morris水迷宫和Y迷宫作业测试，再采用免疫组织化学和图像处理方法分析海马CA1、CA3和齿状回区内NR1的表达变化。结果：慢性复合应激组大鼠寻找平台的潜伏期较对照组明显缩短，学会躲避电击的正确次数较对照组明显增多；海马内NMDA受体亚基NRI的表达水平较对照组明显上调。结论：慢性复合应激可增强学习与记忆能力，NMDA受体表达变化可能是影响学习与记忆的机制之一。     

慢性复合应激对大鼠学习和记忆功能及海马内PKA-Cβ表达的影响

目的 研究慢性复合应激对成年雄性大鼠学习记忆功能和海马内蛋白激酶A(PKA-Cβ)表达的影响。方法 将成年雄性Wistar大鼠随机分为对照组和应激组，应激组动物每天交替暴露于复合应激原中达6周，并测定应激第3周和第6周时两组动物的血清皮质酮水平。应激结束后，用Morris水迷宫和Y-迷宫测试大鼠空间学习记忆成绩，并采用免疫组织化学方法分析海马各亚区PKA-Cb的表达。结果 应激组大鼠的血清皮质酮水平在第3周明显高于对照组，但在第6周两组差别不明显。在Morris水迷宫测试中，应激组动物寻找隐蔽平台的潜伏期明显短于对照组；Y-迷宫测试中，应激组动物寻找安全区的正确率也显著高于对照组。应激组大鼠的海马CAl和CA3区PKA-Cβ的表达水平较对照组明显上调，而齿状回(DG)内PKA-Cβ的表达在两组中无明显差别。结论 慢性复合应激可增强大鼠海马依赖的学习记忆能力，PKA可能参与了其增强机制。     

慢性捆绑应激致大鼠学习记忆受损及海马神经元突触素和突触后致密物95表达的变化

目的　了解慢性捆绑应激对大鼠学习记忆能力的影响及可能的神经解剖学机制。方法　将大鼠分为应激组和正常对照组 ,应激组大鼠每天捆绑 6h共 2 1d ,然后用Y迷宫对 2组大鼠进行行为检测 ,运用免疫组织化学方法 ,观察 2组大鼠海马突触素和突触后致密物 95 (PSD 95 )的表达 ,并用计算机图像分析仪对免疫反应结果进行处理。结果　应激组大鼠学习记忆能力明显受损 (P <0 0 5 ) ;其海马CA3 区突触素和PSD 95免疫阳性产物较对照组明显减少 (P <0 0 1)。结论　慢性捆绑应激致大鼠学习记忆受损可能与其海马神经元突触素和PSD 95的表达减少有关。