用自制新型荧光剂EPQS标记蛋白质及其荧光纸层析扫描测定

用自行研制的新型水溶性荧光剂EPQS分别标记人血清白蛋白(HSA)、牛血清白蛋白(BSA)和猪胰岛素(Insulin),经乙酸纤维素薄膜电泳纯化后,作荧光纸层析扫描,测得EPQS-HSA、EPQS-BSA和EPQS-Insulin的荧光光谱(λ_(em))分别为470、465、468nm,激发光谱(λ_(ex))分别为370、373、371nm;EPQS的λ_(em)为476nm,λ_(ex)为382nm。表明EPQS能用于蛋白质的标记。用EPQS定量HSA,结果显示,1～5μg的EPQS-HSA作荧光纸层析扫描,其结果与荧光强度有良好的线性关系。     

成都地区青年人群中血浆和红细胞还原/氧化型谷胱甘肽的含量及其氧化-还原电位的分布

目的 :测量谷胱甘肽还原型和氧化型在血浆内和红细胞内的含量 ,探讨GSH/GSSG及其氧化还原电位在健康人群的分布情况。方法 :在组织内谷胱甘肽荧光测量法的基础上 ,加以改进 ,对血浆和红细胞内的GSH/GSSG进行测定 ,并计算出GSH/GSSH的氧化还原电位。同时 ,探讨了冷冻保存和去蛋白处理对血浆和红细胞内GSH和GSSG的影响。结果 :改进后的方法具重复性好 ;准确性高 ,回收率在 98.7%和 97.5 % ;标准曲线呈明显线性等良好的测定效率。用本法对 42名年青年健康志愿者的新鲜血浆和红细胞液的谷胱甘肽进行测定 ,结果为 :血浆内GSH的范围为 8.64± 1 .40 μmol/L ,GSSG的范围为 1 .0 8± 0 .2 4μmol/L ,GSH/GSSG的比值为1 0 .2 7± 1 .5 4;红细胞内GSH的范围为 6.81± 1 .3 8μmol/LRBC ,红细胞内GSSG的范围为 0 .77± 0 .3 9μmol/LR BC ,GSH/GSSG的比值为 9.0 2± 3 .61。血浆GSH/GSSG的氧化还原电位为Eh =-2 1 3 .9mV± 4.94mV ;RBC液的Eh =-2 2 1 .4mV± 3 .1 6mV ,血浆内和红细胞内的GSH/GSSG比值以及电位值都呈正态分布。血浆和红细胞在 -80℃条件下保存后对GSH和GSSG的测定有一定影响 (p <0 .0 5 )。结论 :本文建立的GSH/GSSG测定方法具有良好的重复性、准确性 ;测得的青年人血浆和RBC液的GSH/GSSG比值以及     

GFP质粒DNA/阳离子脂质体复合物的制备及其体外表达

目的 为基因免疫和基因治疗寻找一种简单、经济、有效的DNA投递系统。方法 采用逆向蒸发法，用卵磷脂、胆固醇、十八胺制备成阳离子脂质体包封含绿色荧光蛋白基因的真核表达质粒pEGFPC1，对三种不同DNA加入量所形成的DNA／脂质体复合物的微球形、包封率、电荷性、转染真核细胞的效果以及对细胞的毒性作用进行初步检测研究。结果 所获得的DNA／脂质体复合物呈球形、平均粒径为562nm；包封率达55％～65％，为阳离子脂质体；都能有效转染真核细胞，但转染效率有差异，DNA／脂质体混悬液中DNA含量、混悬液的加入量以及细胞的作用时间，都对细胞毒性有不同程度的影响。结论 该方法可作为提高基因免疫效果的简单、经济、有效的手段之一。     

BSO对内皮细胞氧化还原状态的影响

目的　探讨人脐静脉血管内皮细胞(humanumbilicalveinendothelialcells, HUVEC)在慢性髓性白血病细胞株K562细胞条件培养基作用下氧化还原状态的变化与其增殖活性间的关系,观察谷胱甘肽合成抑制剂丁胱亚磺酰亚胺(buthioninesulfoxine, BSO)在上述条件下对HUVECs的作用,为探索相应的抗肿瘤血管生成治疗策略提供新思路。方法　用K562细胞条件培养基、谷胱甘肽合成抑制剂共同或单独处理HUVEC,检测HUVEC细胞内氧化还原状态以及细胞活力的改变。结果　K562细胞条件培养基明显促进内皮细胞的增殖,并促进内皮细胞氧化型与还原型谷胱甘肽(GSSG与GSH)、辅酶Ⅱ(NADP+与NADPH)两对氧化和还原性物质同时增高,但GSSG/GSH、NADP+ /NADPH比值未变。BSO显示出对HUVEC生长的明显抑制,引起HUVEC中GSH、NADPH含量明显降低、GSSG/GSH、NADP+ /NADPH比值升高;在K562细胞条件培养基的同时作用下,BSO对HUVEC的生长抑制作用增强, 使细胞内GSSG/GSH、NADP+ /NADPH比值进一步提高。结论　慢性髓性白血病细胞条件培养基使得血管内皮细胞对BSO的生长抑制作用更加敏感,其机制与内皮细胞氧化还原状态的改变密切相关。     

抗HSA与微晶纤维素的固定化

采用溴化氰化学修饰法制备抗HSA-微晶纤维素固相抗体.对制备条件进行了优化，以修饰温度20℃、抗体浓度3.5mg/mL为固定化最佳条件；并对固相抗体进行了扫描电镜测定、稳定性考察及初步应用.     

恶性肿瘤组织的氧化还原态及其抗氧化能力的改变

目的：探讨恶性肿瘤组织的氧化-还原态及其抗氧化能力的改变。 方法： 42例原发性消化道恶性肿瘤（食管癌13例、胃癌14例及结直肠癌15例），以其相对应的癌旁正常粘膜组织为对照，测定其谷胱甘肽氧化还原对（GSH、GSSG）的含量及辅酶Ⅱ氧化还原对（NADPH、NADP+）的含量，并据此计算出GSH/GSSG、NADPH/NADP+比值以及GSH/GSSG氧化还原电位值、NADPH/NADP+氧化还原电位值。 结果： 癌组织中的GSH、NADPH含量明显高于癌旁组织(P＜0.01)。GSH/GSSG、NADPH/NADP+的氧化-还原电位轻度还原偏移(P＜0.05)。而GSSG含量及NADP+含量则与对照组无明显差异(P＞0.05)。 结论： 消化道恶性肿瘤组织的GSH、NADPH含量明显升高，提示其抗氧化能力明显增强；而在此基础上，其氧化-还原电位仅较癌旁组织轻度偏向还原方向，提示癌组织内仍存有较明显的氧化应激态。     

马桑内酯对麻醉狗脑脊液中单胺类神经递质代谢物含量影响的初步探讨

作者通过狗口服丙磺舒阻断酸性物质向外周血循环转运的方法来测定肌注马桑内酯1mg/kg,前、后脑脊液中去甲肾上腺素、多巴胺和5-羟色胺的代谢物3-甲氧-4羟苯一乙二醇、高香草酸和5-羟吲哚乙酸的含量改变,以了解三者的更新率。初步结果表明:高香草酸的含量显著下降(P<0.05),5-羟吲哚乙酸的含量有所下降(P>0.05)但无统计学意义,3-甲氧-4羟苯一乙二醇影响不大。     

SOD酶生物传感器筛选清除超氧阴离子自由基的活性物

目的制备超氧化物歧化酶传感器，建立清除氧自由基药物的体外筛选方法。方法将固定化铜锌超氧化物歧化酶与光纤氧传感器通过特定装置组装为酶传感器。以邻苯三酚的自氧化作为超氧阴离子的发生源，预置的固定化酶响应为内标，以已知有氧自由基清除作用的Vit C为阳性对照，验证测定方法；通过对比加入样品前后邻苯三酚自氧化速度的变化情况考察样品清除超氧阴离子自由基能力。结果酶传感器检测限为7.0 U，使用寿命大于2周。以本传感器对15种样品进行了体外清除氧自由基活性实验，分别验证和发现了部分样品的清除活性。结论所研制的传感器信号稳定性较好，测定方法简便、快速，能直观地获得氧自由基清除的动力学信息，可用于大量药物的体外初筛实验。     

一种简便、准确的血清氧化及还原型辅酶II的分光光度测定法的建立

由于辅酶II在正常细胞稳态及许多代谢异常中均非常重要,寻找一个简便而可靠的方法测定氧化型及还原型辅酶II对于了解机体的氧化还原稳态将非常有益.本法是对Nisselbam法稍加改进,运用一个敏感的酶循环反应以分光光度法测定血清中的辅酶II,结果显示标准曲线线性关系良好,加样回收较完全.用本法测定的27例健康献血员,血清NADPH、NADP+及其比值NADPH/NADP+分别为8.385±1.516nmol/ml,3.624±0.985nmol/ml,2.3612±0.805,男女性别无明显差异.本法灵敏、准确、重现性好、费用低、操作简便,是测定氧化型及还原型辅酶II的较佳选择.     

异硫氰酸荧光素标记人血清白蛋白

目的：用异硫氰酸荧光素（FTTC）对人血清白（HSA）进行荧光标记。方法：采用直接标记法,并考查不同料比时的荧光素分子与蛋白分子的结合情况,荧光标记物（FTTC－HSA）的荧光光谱及荧光寿命情况,结果：FTTC－HSA的激发波长为500nm,荧光波长为530nm;其固态和液态低温保存时荧光寿命分别为一年和37天。