中药系统药理学Ⅱ:在药物开发和复方研究领域的应用进展

随着全球医药经济的快速发展,我国中草药及天然药物的研发遇到前所未有的机遇。由于化学合成药研制开发的成本越来越高、周期延长、成功率大幅下降,利用天然产物研发新药又重新得到科学家的广泛关注。然而中草药及其复方成分多,机理极其复杂并且药理作用也多样化,开发一种新药的过程非常复杂,往往涉及到多学科的综合应用,因此,中药系统药理学方法应运而生。文章详细介绍了中药系统药理学用于药物开发及复方研究领域的主要方法,并且汇总了其在以上领域近五年的研究成果,强调中药系统药理学在药物发现中所起的重要作用,并寄希望于从中草药中为不同疾病探索有效的药物分子及新复方提供指导。     

DEAD盒RNA解旋酶17在乳腺癌细胞中的表达及定位

目的研究DEAD盒RNA解旋酶17 (DDX17)在人乳腺癌细胞和组织中的表达和定位。方法蛋白印迹法检测DDX17在人乳腺癌细胞系中蛋白的表达,激光共聚焦扫描显微镜和Western blot检测DDX17在MCF-7乳腺癌细胞中的定位。结果 DDX17在人乳腺肿瘤细胞系中蛋白表达水平增高,激光共聚焦扫描显微镜和Western blot观察发现DDX17主要定位于MCF-7细胞核中。结论 DDX17在人乳腺癌细胞系中高表达,主要定位于乳腺癌细胞核内,可能是人乳腺癌重要的调节因子。     

二氢埃托啡依赖80例临床分析

目的：分析二氢埃托啡依赖者的临床表现。方法：对80例二氢埃托啡依赖者的临床资料进行分析，并分析这80例依赖者所填写的药物依赖性调查表的结果。在患者入院后的第一周开始给予支持疗法进行治疗。结果：80例二氢埃托啡依赖者中男女比例为4：1，初中文化程度的人最多，32人、个体户、无业人员占82％；大多数患者不知道二氢埃托啡可以成瘾。滥用二氢埃托啡的平均时间是（3．1±2．4）月，用量为（6．4±4．6）片。停用药物后，患者全部出现戒断症状。二氢埃托啡的戒断症状比较轻，出现早，消失快，容易戒断。联合疗法治疗二氢埃托啡依赖的效果明显。结论：联合疗法治疗二氢埃托啡依赖效果明显，值得推广。     

普罗帕酮与ATP治疗小儿阵发性室上性心动过速临床观察

目的观察普罗帕酮与ATP治疗小儿阵发性室上性心动过速的临床疗效。方法将收治的28例小儿阵发性室上性心动过速随机分为普罗帕酮组15例和ATP组13例,普罗帕酮组给予普罗帕酮治疗,ATP组给予ATP治疗,观察临床疗效和不良反应发生情况。结果2组总有效率比较差异无统计学意义（P〉0．05）,ATP组复律时间为（23．99±5．62）s短于普罗帕酮组的（5．92±2．88）min,差异有统计学意义（P〈0．01）。ATP组不良反应发生率高于对照组,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论普罗帕酮与ATP治疗t｜,JL阵发性室上性心动过速临床疗效无差异,ATP治疗后复律时间短于普罗帕酮。     

应用二维电泳和质谱技术鉴定乳腺癌相关蛋白

目的 通过比较人乳腺癌细胞MCF7和乳腺上皮细胞MCF10A的差异表达蛋白,以发现可能用于早期诊断的乳腺癌肿瘤标志物.方法 体外培养人乳腺癌细胞MCF7和乳腺上皮细胞MCF10A,提取细胞总蛋白,进行二维凝胶电泳并比较分析,选择在乳腺癌细胞MCF7中明显差异表达的蛋白点,进行质谱和生物信息学分析.结果 建立了MCF7和MCF10A两种细胞系的二维凝胶电泳图谱,平均蛋白质点数分别为(960±44)和(1128±29);对选择的35个差异表达蛋白质点进行质谱和生物信息学分析,鉴定了其中16个点,包括过氧化氢酶-6(PRDX6)、磷酸甘油酸激酶-1(PGK1)、60 kD热休克蛋白(CH60)、谷氨酰胺转移酶-2(TGM2)等.结论 乳腺癌细胞MCF7相对于乳腺上皮细胞MCF10A的差异表达蛋白可能作为乳腺癌早期诊断和预后评价的候选肿瘤标志物.     

氟西汀对癫痫合并抑郁大鼠海马GFAP、NeuN表达的影响

目的探讨氟西汀对癫痫合并抑郁大鼠海马齿状回胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、神经元核抗原(NeuN)表达的影响。方法SPF级SD大鼠60只,随机分为对照组、模型组、氟西汀低、中、高剂量组各12只。模型组和对照组给予等剂量生理盐水,1次/d,腹腔注射;氟西汀低、中、高剂量组给予氟西汀(5.0、7.5、10.0 mg/kg),1次/d,腹腔注射。治疗28 d,采用强迫游泳实验和旷场实验测试大鼠行为学表现,采用免疫组化、RT-PCR检测海马GFAP、NeuN表达。结果造模后,与对照组相比,模型组、氟西汀低、中、高剂量组不动时间延长,垂直运动次数、水平运动次数明显下降(P<0.05)。干预后,模型组不动时间明显长于对照组,垂直运动次数、水平运动次数明显低于对照组(P<0.01);与模型组相比,氟西汀低、中、高剂量组不动时间缩短,垂直运动次数、水平运动次数明显增加(P<0.05);尤其是氟西汀高剂量组,较氟西汀低、中剂量组相比有统计学意义(P<0.05)。免疫组化、RT-PCR显示,与对照组相比,模型组GFAP表达明显增加、NeuN表达明显下降(P<0.05);与模型组相比,氟西汀低、中、高剂量组GFAP表达明显下降、NeuN表达明显增加(P<0.05);尤其是氟西汀高剂量组,较氟西汀低、中剂量组相比有统计学意义(P<0.05)。结论氟西汀可能通过改变海马区GFAP、NeuN表达,并呈剂量依赖性,发挥神经保护作用,改善癫痫合并抑郁大鼠抑郁症状。     

不同激酶活性的hPAK6基因原核表达载体的构建及重组蛋白的表达

目的 构建不同激酶活性的hPAK6原核表达载体并诱导和鉴定其融合蛋白表达.方法 野生型、激酶活型和激酶死型pcDNA3.1-PAK6经EcoR Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切后,克隆至GST融合表达载体pGEX-5X-1,在E.coli BL21中诱导不同型GST-hPAK6融合蛋白表达,并经免疫印迹鉴定结果.结果 野生型、激酶活型和激酶死型hPAK6编码序列已被克隆至GST融合表达载体pGEX-5X-1,双酶切及测序鉴定正确,并在E.coli BL21中获得了诱导表达,蛋白的分子量均为101 kDa,免疫印迹检测到了融合蛋白表达.结论 成功构建不同激酶活性的hPAK6基因原核表达载体,并分别诱导表达出GST-PAK6融合蛋白.     

癌胚抗原启动子调控的白细胞介素-2/干扰素β融合基因的原核及真核表达质粒的构建

目的 根据细胞因子间协同作用特点,构建人白细胞介素-2（IL-2）与干扰素（IFN）β的融合基因,并用癌胚抗原（CEA）基因启动子调控其在结肠癌细胞株中的靶向表达.方法 分别用原核及真核表达载体,检测融合蛋白的表达情况.PCR、RT-PCR法扩增得到CEA启动子、IL-2 cDNA、IFNβ cDNA,应用原核表达质粒pGEX-5X-1、真核表达质粒pcDNA3.1/HisA、绿色荧光蛋白质粒pEGFP-C1,构建出原核表达质粒和真核表达质粒;SDS-PAGE电泳检测原核表达;用脂质体法将真核表达质粒转入结直肠癌细胞株Lovo（CEA高表达）、HT-29（CEA低表达）和对照Hela细胞（CEA阴性）,转染后分别以流式细胞仪、荧光显微镜、Western印迹等方法检测肿瘤细胞凋亡情况及蛋白表达情况.结果融合基因可在大肠杆菌及肿瘤细胞内表达融合蛋白;对肿瘤细胞有明显的杀伤作用;由CEA启动子调控的融合基因在Lovo细胞的表达高于HT-29细胞,在CEA阴性的Hela细胞中几乎不表达.结论 CEA启动子可靶向性调控融合基因在肿瘤细胞的表达,具有协同作用的细胞因子融合蛋白可能有更强的抗肿瘤作用.     

hLMO4基因重组质粒的构建及蛋白表达和定位

目的构建hLMO4真核表达载体并证实融合蛋白在细胞内表达及定位。方法提取人乳腺癌MCF-7细胞的mRNA,反转录为cDNA。PCR扩增hLMO4全长编码基因,亚克隆至pCDNA3.1-myc-hisA表达载体中。将构建的重组质粒测序并转染到胃癌细胞BGC823中,提取细胞蛋白进行Western blot检测。利用共聚焦激光扫描显微镜观察pEGFP-LMO4在乳腺癌MCF-7细胞内定位。结果hLMO4全长基因序列克隆到了真核表达载体pCDNA3.1-myc-hisA中,酶切鉴定片段为500bp。Western blot检测到了融合蛋白表达,分子量约为23KD。pEGFP-LMO4在乳腺癌MCF-7细胞内定位以细胞核为主,在细胞浆内少量表达。结论成功的构建了hLMO4全长基因真核表达载体,pEGFP-LMO4蛋白定位于乳腺癌细胞质和核内。     

前置胎盘期待疗法患者的护理干预及临床效果观察

目的:探讨健康教育对前置胎盘期待疗法患者的影响,旨在改善妊娠结局。方法:选取2011年6月~2013年6月我院64例前置胎盘期待疗法孕产妇作为研究对象,将孕产妇随机等分为对照组和观察组。观察组进行有针对性的护理干预健康教育,对照组给予常规护理。采用问卷调查方式比较两组产妇和新生儿状况。结果:干预组产后出血量和产后感染率均低于对照组,两组比较差异具有统计学意义(P0.05)。干预组新生儿的Apgar评分、体质量均高于对照组,而呼吸窘迫综合征的发生率低于对照组,两组比较差异均具有统计学意义(P0.05)。结论:对前置胎盘期待疗法孕妇给予有效的针对性健康教育,能够提高产妇对疾病相关知识的知晓度,改善新生儿状况,降低新生儿呼吸窘迫综合征的发生。