逍遥散影响慢性应激T2DM大鼠糖脂代谢机制的初步研究

目的研究比较慢性应激对2型糖尿病(T2DM)大鼠胰岛素抵抗(IR)和糖脂代谢相关指标的影响及逍遥散的干预作用。方法以高糖高脂饲料喂养联合链脲佐菌素(STZ)诱导T2DM大鼠为研究对象,建立慢性心理应激动物模型。将成模的T2DM大鼠随机分为模型对照组、逍遥散组、应激对照组、应激加逍遥散组等4组。观察比较各组大鼠血糖(BG)、糖化血红蛋白(Hb A1c)、空腹胰岛素(FINS)、胰岛素敏感指数(ISI)、胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDLC)的水平。结果与模型对照组相比较,应激对照组的体重和ISI下降(P﹤0.01),BG及Hb A1c升高(P﹤0.01),逍遥散组大鼠BG降低(P﹤0.01),血脂水平降低(P﹤0.01,P﹤0.05),与应激对照组相比较:应激加逍遥散组体重增加(P﹤0.05),BG降低(P﹤0.05),Hb A1c与ISI均显著降低(P﹤0.01),TC、TG降低(P﹤0.01,P﹤0.05)。结论慢性应激能显著加剧T2DM大鼠IR和糖脂代谢紊乱;逍遥散能影响慢性应激大鼠的糖脂代谢,其机制可能与提高慢性应激T2DM大鼠的胰岛素敏感性有关。     

应激损伤糖尿病细胞模型的建立及不同浓度逍遥散含药血清对其生存率的影响

目的以大鼠胰岛β细胞瘤细胞(RIN-m5f细胞)为研究对象建立应激损伤糖尿病细胞模型,并探索不同浓度逍遥散含药血清对其生存率的影响。方法将RIN-m5f细胞用不同浓度葡萄糖(11mmol/L、50mmol/L、100mmol/L、200mmol/L、400mmol/L)分别培养5h、12h、24h、48h,建立高糖损伤状态细胞模型,再利用各个浓度的皮质酮(CORT)(64μmol/L、320μmol/L、1600μmol/L)干预,诱导应激损伤糖尿病细胞模型。造模完成后,用含10%、20%、30%、60%的逍遥散含药血清培养细胞,检测各组的细胞生存率。结果随着葡萄糖浓度的增加、培养时间的延长和皮质酮浓度升高,细胞存活率呈下降趋势。当含50mmol/L葡萄糖培养基培养12h后,INS分泌值较其他各浓度组是最高的,而细胞生存率较正常组稍有下降。当皮质酮浓度为320μmol/L时,细胞存活率约为60%。逍遥散血清组细胞活性普遍高于空白血清组,且当含血清比例为30%时,前者与后者细胞活性差值最大,血清比例高于30%以后,两组细胞活性均增长滞缓,进入平台期。结论含50mmol/L葡萄糖培养基培养12h的RIN-m5f细胞建立了高糖损伤状态的细胞模型;在高糖基础上,添加320μmol/L皮质酮能诱导出应激损伤状态糖尿病细胞模型;逍遥散含药血清能提高应激损伤状态糖尿病细胞的活性。     

逍遥散含药血清影响RIN-m5f细胞活性及胰岛素分泌的机制探讨

目的研究逍遥散含药血清对应激损伤状态糖尿病细胞模型[大鼠胰岛β细胞瘤细胞(RIN-m5f)]的活性、胰岛素(INS)分泌的影响及其干预机制。方法用高浓度葡萄糖(50 mmol·L-1)和皮质酮(CORT,320μmol·L-1)诱导培养RIN-m5f细胞12 h,制备应激损伤状态糖尿病细胞模型,再用30%逍遥散含药血清干预,并设立空白血清对照。共分为7组:①正常组:RIPM1640+10%FBS;②高糖组(G组):①+50 mmol·L-1的葡萄糖;③应激组(GCo组):②+320μmol·L-1的CORT;④空白血清高糖组(GC组):②+30%空白组大鼠血清(30%C)⑤逍遥散血清高糖组(GX组):②+30%逍遥散组大鼠血清(30%X);⑥空白血清应激组(GCoC组):③+30%C;⑦逍遥散血清应激组(GCoX组):③+30%X。干预12 h后,采用CCK-8法检测细胞活性;酶联免疫法(ELISA)检测细胞INS分泌水平;实时荧光定量PCR(qPCR)法检测细胞活化转录因子6(ATF-6)、肌醇需酶1(IRE-1)mRNA表达;Western Blot法检测细胞Caspase-12、CHOP蛋白表达。结果与正常组比较,G组细胞活性和ATF6、IRE1 mRNA以及Caspase-12、CHOP蛋白表达水平显著下降(P 0.05,P 0.01),INS水平显著升高(P 0.01)。与G组比较,GCo组细胞活性显著降低(P 0.01),INS水平和ATF6、IRE1 mRNA以及Caspase-12、CHOP蛋白表达水平均明显上调(P 0.05,P 0.01)。与GC组比较,GX组的细胞活性明显升高(P 0.05),ATF6、IRE1 mRNA以及Caspase-12蛋白表达水平均明显上调(P 0.05,P 0.01),但INS水平、CHOP蛋白表达水平差异无统计学意义(P0.05)。与GCoC组比较,GCoX组的细胞活性、INS水平明显升高(P 0.05),IRE1 mRNA以及Caspase-12、CHOP蛋白表达水平明显下降(P 0.05,P 0.01),但ATF6mRNA表达水平差异无统计学意义(P0.05)。结论高浓度葡萄糖和CORT能降低应激损伤状态糖尿病RINm5f细胞的活性,升高INS水平,加重胰岛素抵抗(IR)程度。逍遥散含药血清能缓解细胞IR水平,其作用机制可能与调控内质网应激(ERS)相关。     

四逆散、应激血清/脑脊液对皮质酮损伤的海马神经元生存率的影响

目的以皮质酮损伤的海马神经元细胞为研究对象,探讨四逆散、应激血清/脑脊液对其生存率的影响。方法离体培养原代海马神经元细胞并用Map-2鉴定,采用皮质酮(CORT)建立慢性应激损伤神经元细胞的体外模型。造模完成后,用含10%、20%、30%应激血清/脑脊液、应激四逆散血清/脑脊液,检测各组的生存率。结果皮质酮浓度为200μM、400μM、600μM时,细胞生存率显著下降(P0.01),当皮质酮浓度为200μM时,细胞生存率约为60%。与空白组比较,模型组细胞生存率降低(皮质酮200μM)(P0.01),10%应激血清组细胞生存率高于相应浓度的空白血清组(P0.05); 20%、30%应激血清组细胞生存率低于相应浓度的空白血清组(P0.05);10%、20%、30%应激四逆散血清组细胞生存率高于相应浓度的空白血清组(P0.05);20%、30%应激脑脊液组细胞生存率大于相应浓度空白脑脊液组(P0.05)。结论 200μM皮质酮培养24h建立海马神经元细胞慢性应激损伤状态模型;应激四逆散血清可以提高皮质酮损伤的海马神经元细胞的生存率。     

逍遥散对慢性应激2型糖尿病大鼠骨骼肌IRS-1及GLUT4表达的影响

目的:研究比较慢性应激对2型糖尿病(T2DM)大鼠骨骼肌GLUT4及INS-1表达的影响及逍遥散的干预作用。方法:以高糖高脂饲料喂养联合链脲佐菌素(STZ)诱导T2DM大鼠为研究对象,建立慢性心理应激动物模型。将成模的T2DM大鼠随机分为模型对照组、逍遥散组、应激对照组、应激加逍遥散组等4组。造模22 d后处死取右侧腓肠肌,采用免疫组化法和蛋白印迹法(Western Blot)检测葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)、胰岛素受体底物1(IRS-1)和分子伴侣-葡萄糖调节蛋白(Grp78),并运用ELISA法测出各组大鼠糖化血红蛋白(HbA1c)、空腹胰岛素(FINS)、胰岛素敏感指数(ISI)的水平。结果:与模型对照组相比较,应激对照组的ISI下降(P0.01),GLUT4、IRS-1和HbA1c升高(P0.05或P0.01),逍遥散组大鼠GLUT4、IRS-1表达增多(P0.01),与应激对照组相比较:应激加逍遥散组GLUT4、IRS-1、HbA1c与ISI均显著降低(P0.01)。结论:心理应激损伤能显著恶化T2DM大鼠的IR,逍遥散能降低T2DM大鼠与慢性应激T2DM大鼠的HbA1c水平,提高慢性应激状态下T2DM大鼠的ISI,其机制可能与调控胰岛素信号传导通路IRS-1/PI3K/GLUT4相关。     

4种不同中药复方对慢性应激模型大鼠行为学的影响

目的:探讨四逆散、四君子汤、柴芍六君子汤、右归丸对慢性应激大鼠行为学的影响。方法:90只Wistar雄性大鼠随机分为空白组、模型组、右归丸组、四逆散组、四君子汤组、柴芍六君子汤组6组,建立慢性应激动物模型,观察大鼠体质量及行为学指标变化。结果:与空白组相比,模型组大鼠体质量增长缓慢,糖水偏好率、旷场水平运动总路程、十字高架迷宫开臂滞留时间、水迷宫穿越平台次数、目标象限路程及停留时间均显著减少(P 0. 05),和模型组相比,各用药组体质量增长差异无统计学意义,四逆散组、四君子汤组糖水偏好率升高(P 0. 05),各用药组旷场水平运动总路程均增加(P 0. 05);四逆散、四君子汤、柴芍六君子汤组的开臂滞留时间延长(P 0. 05);柴芍六君子汤、右归丸组穿越平台次数、目标象限路程及停留时间增多(P 0. 05)。结论:四逆散、四君子汤、柴芍六君子汤、右归丸4种方药均能有效地改善模型大鼠的自主活动;其中四逆散和四君子汤可有效提高模型大鼠对奖赏的反应性;四逆散、四君子汤、柴芍六君子汤可改善模型大鼠焦虑样行为;右归丸、柴芍六君子汤具有改善模型大鼠空间学习记忆力的作用。4种中药复方中,四逆散、四君子汤、柴芍六君子汤具有较好的抗应激损伤的作用。     

柴胡疏肝散对不同应激时长大鼠自主行为及学习记忆能力的影响

【目的】研究不同应激时长对大鼠自主行为与学习记忆能力的影响以及柴胡疏肝散干预的作用。【方法】将75只8周龄雄性Wistar大鼠随机分为空白对照组,模型对照组,柴胡疏肝散低、中、高剂量组,每组15只。复制慢性多相性应激模型,于造模前,造模第10、20、30天,测量各组大鼠体质量,进行旷场实验观察各组大鼠自主行为,进行Morris水迷宫实验观察各组大鼠空间学习记忆能力。【结果】(1)体质量测量结果显示:模型对照组造模第20、30天大鼠体质量较空白对照组明显减轻(P0.01);柴胡疏肝散中、高剂量组造模第20、30天大鼠体质量较模型对照组均明显升高(P0.05或P0.01),且柴胡疏肝散高剂量组体质量增加更明显,与空白对照组比较,差异无统计学意义(P0.05)。(2)旷场实验结果显示:与空白对照组比较,模型对照组造模后各时间点大鼠的运动总路程及在中央区的运动路程均明显缩短(P0.01),平均运动速度均明显下降(P0.01),且与时间呈正相关关系;与模型对照组比较,柴胡疏肝散低、中、高剂量组的运动总路程、中央区运动路程均延长(P0.05或P0.01),平均运动速度均明显升高(P0.05或P0.01),且高剂量组作用效果更接近空白对照组。(3)Morris水迷宫实验结果显示:与空白对照组比较,模型对照组大鼠的平均潜伏期明显延长,穿越平台次数明显减少(P0.01);与模型对照组比较,柴胡疏肝散中、高剂量组大鼠的平均潜伏期均有缩短,穿越平台次数增加(P0.01),且与空白对照组差异无统计学意义(均P0.05)。【结论】慢性应激可以降低大鼠兴奋性,减少大鼠的自主活动,损伤大鼠空间学习记忆能力,而且这种损伤程度与应激时间呈正相关;柴胡疏肝散具有改善慢性应激大鼠自主活动行为及空间学习记忆力的作用,且以中、高剂量效果更好。