诱生型一氧化氮合酶特异性抑制肽的制备

目的：通过噬菌体展示技术筛选iNOS特异性抑制肽。方法：将iNOSFAD结合区及其附近序列的基因片段装入pET-28A( )，在大肠杆菌BL21中表达，His.bind^TM亲和层析柱纯化目的蛋白，使用纯化蛋白筛选Ph.D.-12^TM噬菌体库，筛选iNOS活性抑制作用较高的噬菌体克隆，测序并合成其中具有一致序列的短肽。结果：得到具有较高表达量的目的蛋白，经His.Bind^TM柱亲和层析纯化后纯度大于95％，以纯化蛋白筛选Ph.D.-12^TM噬菌体库，经4轮筛选获得10株iNOS活性抑制作用较高的噬菌体克隆，测序发现其中5株序列完全相同，合成该12肽，初步研究表明其对iNOS表现为高浓度抑制，低浓度兴奋的作用，而对nNOS及eNOS则没有影响。结论：以iNOSFAD片段蛋白为靶蛋白筛选得到的克隆对iNOS活性具有特异性影响，可根据这些特征设计合成小分子前导药物，创造新的活性药物。     

人胃癌肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）的体外诱导培养和抗肿瘤作用

人胃癌肿瘤浸润淋巴细胞（ＴＩＬ）的体外诱导培养和抗肿瘤作用扬州医学院（扬州２２５００１）吴明生，徐立春，童鲲南京军事医学研究所许祥裕，丁树标肿瘤浸润淋巴细胞（ＴＩＬ）在抗肿瘤中的重要作用比ＬＡＫ细胞强５０～１００倍［１，２］．近年来已成为国内外研究的...     

细胞性一氧化氮供体的建立及其对肿瘤细胞凋亡的诱导效应

目的一氧化氮（ＮＯ）供体细胞系的建立及其对肿瘤细胞凋亡的诱导效应研究。方法采用３Ｈ－胍氨酸转换法进行ＮＯ合成酶（ＮＯＳ）活性测定；亚硝酸盐检测；ＤＮＡ片段的提取及凝胶电泳分析；凋亡细胞的ＤＡＰＩ染色观察；Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析。结果将ｉＮＯＳ真核表达质粒、ｐＣＭＶ／ｉＮＯＳ转染至Ｓｐ２／０骨髓瘤的变异株中，并获得能稳定表达ｉＮＯＳ和合成ＮＯ的重组细胞系（ＳＰｍｔ／ｉＮＯＳ），表达ｉＮＯＳ的效率为每升培养物含４００μｇ蛋白。利用该细胞作ＮＯ细胞性供体，成功地证实ＮＯ能诱导Ｓｐ２／０骨髓瘤细胞发生凋亡。结论所建细胞性ＮＯ供体应用于ＮＯ的生物学功能研究具有ＮＯ合成稳定；更能模拟体内细胞间ＮＯ的信息传递过程；不需任何外源刺激即可合成ＮＯ等独特优点。所建ＮＯ供体细胞可以用于肿瘤细胞凋亡的研究。     

As-80方救治猴梭曼中毒

目的　双吡啶单肟HI 6是目前救治小鼠和家犬等神经性毒剂中毒较为有效的胆碱酯酶重活化剂 ,但仍需进一步验证HI 6对高等动物的疗效 ,为HI 6过渡到人体临床应用提供依据。As 80方是作者以HI 6为主药组成的抗神经毒复方。本研究采用与人较为接近的灵长类动物猕猴 ,通过救治猕猴梭曼中毒进一步验证As 80方的效价。方法　 6只健康猕猴随机分为 2个实验组和 1个对照组。第一实验组猴im 10 μg·kg- 1梭曼 ,第二实验组猴im 2 5μg·kg- 1梭曼。待中毒猴出现惊厥时 ,立即给实验动物一次imAs 80方注射液 0 .1mL·kg- 1,对照动物注射等剂量的生理盐水。观察猴肌注梭曼后中毒症状出现时间 ,实验动物用As 80方救治后中毒症状缓解情况及时间 ,实验动物 3,5 ,7d活存率及恢复情况。结果　猴肌注梭曼后其中毒症状与狗梭曼中毒的症状相似 ,主要表现为肌颤、流涎、惊厥等 ,瞳孔缩小不明显 ,中毒症状的轻重及出现时间快慢与梭曼剂量大小呈正相关。As 80方救治猴梭曼中毒的效价明确。第一实验组 (10 μg·kg- 1梭曼 ) 7d活存率为 2 /2 ,第二实验组 3,5 ,7d活存率分别为 3/3,2 /3,1/3。对照组 1只动物于中毒 15h内死亡。实验结果还表明 ,As 80号复方对猕猴梭曼中毒症状控制好 ,治疗后机体恢复快。结论　实验结果均表明HI 6、     

重组人粒/巨噬细胞集落刺激因子下游处理研究(Ⅰ)

目的 在成功构建人粒/巨噬细胞集落刺激因子(GM—CSF)高效表达克隆的基础上,对表达产物进行实验室规模和中试规模的分离、纯化及对rhGM—CSF在溶液中的稳定性进行研究。方法 应用工程菌发酵、超声破菌、包涵体抽提、凝胶过滤层折、复性、离子交换等方法对rhGM—CSF进行纯化,并用GM—CSF依赖株TF-1细胞MTT法测定其生物学活性及应 用透析法测定其在溶液中的稳定性。结果 终产物纯度达99％,比活性达1.5×10~7u/mg蛋白。在偏硷性溶液中会发生降解,但降解后生物活性未见明显下降。结论 采用分子筛色谱和阴离子交换色谱对GM—CSF进行纯化,经从实验室规模放大至中试规模证明该工艺是简便可行的,得到了高纯度、高比活性的纯品。     

莪术醇生物构建自体瘤苗治疗晚期胃癌患者近期疗效研究

目的:探讨自体瘤苗治疗胃腺癌对患者免疫功能的影响及临床效应.方法:9例瘤苗组实体瘤术后患者应用自体瘤苗,并与对照组8例进行比较,对其疗效进行判断评价,检测治疗前后其NKC活性及CD3 、CD4 、CD8 水平.结果:实验组使用自体瘤苗治疗后,其NKC细胞的活性及CD3 、CD4 水平明显高于对照组及自身治疗前,其CD8 阱水平低于其他组;近期随诊其生存质量及疗效也明显优于治疗前及对照组.结论:莪术醇生物构建的自体瘤苗能增强胃癌患者的治疗效果,明显提高自身细胞免疫功能,副反应较小,是一种安全、有效、实用的辅助治疗方法.     

2000～2002年南京军区放射工作人员个人剂量监测结果分析

目的了解掌握我区部队放射工作人员受照剂量水平与现状。方法使用FJ-377型热释光剂量仪和LiF(Mg，Cu，P)玻璃剂量计对南京所属部队放射工作人员进行剂量监测。结果人均年平均剂量当量稳中有降，不同工种放射工作人员个人年均剂量当量不同。结论我区绝大多数放射工作人员的年剂量当量在标准水平以下。     

流式细胞仪检测人脾LAK细胞

目的：探求ＬＡＫ细胞对白血病疗效的监测手段。方法：用流式细胞仪测定５例成人脾淋巴因子激活的杀伤细胞（ＬＡＫ细胞）和２１例正常人外周血淋巴细胞的ＤＮＡ指数（ＤＩ）及增殖周期。结果：人脾ＬＡＫ细胞的增殖活力明显高于未激活的脾淋巴细胞和外周血淋巴细胞。培养（１～１４ｄ）期间人脾ＬＡＫ细胞的增殖活力高，并且稳定。在人脾ＬＡＫ细胞中，未找出非整倍体细胞，ＤＩ指数在正常范围。结论：流式细胞仪可用于判断人脾ＬＡＫ细胞对白血病的疗效。     

人EPO cDNA基因在CHO细胞中的稳定表达

建立稳定表达人红细胞生成素（ＥＰＯ）的工程细胞株。方法：用 ＤＮＡ磷酸钙共转染法,将人ＥＰＯ ｃＤＮＡ的表达质粒 ｐＣＤＢ与标志质粒 ｐＳＶ－ｄｈｆｒ共转染到 ＣＨＯ－ｄｈｆｒ－细胞中。用 ＥＬＩＳＡ法检测到 ７０个克隆的细胞培养上清,筛选出５０个克隆细胞系。结果：经ＭＴＸ加压扩增,获得４系高效表达ＥＰＯ的细胞系（Ｂ４、Ｃ３、Ｆ１０、Ｇ７）,表达量为 ２． ２～１０ μｇ／（１０６ ｃｅｌｌ· ２４ ｈ）,ＥＰＯ的分泌量在上述细胞系扩增了 １１～３１倍。 Ｆ１０细胞系表达量为最高,并进一步亚克隆纯化。其中Ｆ１０－６亚克隆细胞株的平均表达水平为１０ ｕｇ／（１０６ｃｅｌｌ·２４ ｈ）,细胞冻存后复苏传代１５次,ＥＰＯ的表达水平无明显改变。结论：以Ｆ１０－６亚克隆细胞株建立了工程细胞株。