再生障碍性贫血患者淋巴细胞亚群及T细胞活化水平的分析

目的：观察再生障性贫血患者外周血的淋巴细胞亚群的变化和T细胞活化，探讨免疫机制在再障发病中的作用。方法：用流式细胞术直接免疫法检测48例再障患者外周血淋巴细胞亚群及T细胞的HLA-DR表达。结果：再障组患者的CD4^ 、CD8^ 细胞明显增高，D4^ /CD8^ 比值降低，CD8^ HLA-DR^ 细胞明显增加。结论：再障患者存在淋巴细胞亚群的失调及T细胞的异常活化。提示由T淋巴细胞介导的免疫异常对造血功能的押制在再障的发生中起重要作用。     

CD20scFv-IgGFc T 淋巴细胞的建立及其对B细胞淋巴瘤靶向杀伤作用的比较

目的：研究CD20scFv嵌合T淋巴细胞靶向杀伤Daudi细胞时杀伤的效果和T细胞活化情况。方法：将两种质粒转染至PA317细胞中，用转染成功的PA317上清液感染外周血T淋巴细胞后经800 mg/L的G418筛选1周后去杀伤Daudi、K562细胞，分别在不同时点用流式细胞仪检测Daudi细胞AnnexinⅤ的阳性率 ，用ELISA检测细胞因子IL-2、IFNγ。结果：Daudi细胞AnnexinⅤ的阳性率在24 h内两实验组与K562组相比明显增高，而实验组之间没有显著差异。72 h时CD20scFv-IgGFc-CD28-ζ组比CD20scFv-IgGFc组IL-2（1 509.00 ng/L比220.54 ng/L）和IFNγ（912.16 ng/L比251.42 ng/L）的分泌量有显著增高。结论：①两种CD20scFv特异的T细胞在引起Daudi细胞早期凋亡无显著差异，说明在CD20scFv的靶向杀伤过程中CD28-ζ基因可能不主导Daudi细胞的早期凋亡。②CD20scFv-IgGFc-CD28-ζ组IL-2、IFNγ增幅更加明显，说明CD3ζ和CD28嵌合的T细胞可以自身活化而不受MHC的限制，从而增强了T细胞的活化和杀伤等功能。     

造血干细胞移植治疗白血病和淋巴瘤

目的：探讨造血干细胞移植治疗白血病和淋巴瘤的疗效、移植过程中的并发症及其预防和移植后的植活证据及微小残余病灶检测等问题。方法：２例行同胞间异基因骨髓移植（Ａｌｌｏ－ＢＭＴ）、５例行自体外周血干细胞移植（ＡＰＢＳＣＴ）。采用ＣｓＡ＋ＭＴＸ预防ＧＶＨＤ;ＰＧＥ１＋潘生丁预防ＨＶＯＤ;以ＡＰＯＢ、ＳＭ７和Ｄ１Ｓ８０三个位点多态性分析作为植活证据;以ｂｃｒ／ａｂｌ、ＡＭＬ１－ＥＴＯ融合基因或ＩｇＨ基因重排     

PHA—MNCCM对慢性再障骨髓基质细胞生长影响的研究

目的：探讨植物血素－单个核细胞条件培养液（ＰＨＡ－ＭＮＣＣＭ）对正常人与慢性再障（ＣＡＡ）成纤维细胞集落（ＣＦＵ－Ｆ）形成的影响,以及对再障血清中抑制物的拮抗作用。方法：采用改良Ｇａｓｔｒｏ－Ｍａｌａｓｐｉａ培养法,分组观察ＣＦＵ－Ｆ形成率。结果：标准培养体系中ＣＡＡ组ＣＦＵ＿Ｆ产率明显低于正常组（Ｐ〈０．０１）,ＰＨＡ－ＭＮＣＣＭ刺激ＣＡＡ组ＣＦＵ－Ｆ形成作用明显大于正常组（Ｐ〈０．００１）,Ｃ     

多发性骨髓瘤患者医院感染原因分析与控制

目的探讨多发性骨髓瘤(MM)患者发生医院感染的相关因素,为临床预防多发性骨髓瘤医院感染提供客观依据。方法回顾性调查2011年6月-2012年12月收治的64例多发性骨髓瘤患者的临床资料,分析发生医院感染的原因,并总结应对策略。结果 64例多发性骨髓瘤患者中发生医院感染31例、46例次,医院感染率为48.4%、例次感染率为71.9%;前3位感染部位为呼吸道、口腔及胃肠道感染,分别占54.4%,17.4%,13.0%;骨髓瘤细胞≥30%、疾病Ⅲ期、有骨损害、住院时间>45d、白细胞减少以及采用化疗治疗的患者医院感染率分别为71.0%、61.2%、68.6%、64.3%、66.7%、67.6%,以上是发生医院感染的相关因素。结论多发性骨髓瘤患者发生医院感染的原因有体液免疫缺陷、住院时间较长、中性粒细胞减少、化疗治疗等,为预防医院感染,应提高患者的护理质量、加强其个人卫生管理、改善营养,并采用合理的保护性隔离措施。     

姜黄素对骨髓瘤细胞迁移和侵袭能力的影响及其机制研究

 目的：探讨姜黄素对骨髓瘤细胞迁移侵袭能力的影响及其机制。方法：shRNA表达质粒沉默含IQ模序的RasGTP酶活化蛋白1(IQ motif-containing GTPase-activating protein 1,IQGAP1)后转染RPMI8226细胞,Western blotting法检测RPMI8226-shIQGAP1组、RPMI8226-shRNA阴性对照组和未转染RPMI8226组细胞IQGAP1表达;不同浓度姜黄素作用于各组细胞后,Transwell迁移实验和Matrigel侵袭实验检测细胞的迁移及侵袭力,RT-PCR法检测姜黄素作用后IQGAP1 mRNA的表达,Western blotting检测姜黄素对各组细胞IQGAP1蛋白表达的影响。结果：使用shRNA表达质粒沉默IQGAP1后,RPMI8226细胞IQGAP1表达减少;RPMI8226-shIQGAP1组较RPMI8226-shRNA 阴性对照组和未转染RPMI8226 组细胞迁移及侵袭力下降,姜黄素可降低RPMI8226-shRNA 阴性对照组和未转染RPMI8226组细胞迁移及侵袭力,无浓度相关性,不同浓度的姜黄素对RPMI8226-shIQGAP1组作用后细胞的迁移及侵袭力无明显变化。对于RPMI8226-shRNA阴性对照组及未转染RPMI8226组,姜黄素作用后IQGAP1 mRNA及蛋白的表达下降。结论：姜黄素通过抑制IQGAP1的表达降低骨髓瘤细胞的迁移力和侵袭力。     

苦参碱诱导RPMI8226细胞凋亡及其对Bcl-2、增殖细胞核抗原蛋白表达的影响

目的：研究苦参碱是否具有诱导RPMI8226细胞凋亡的生物学活性,探讨苦参碱对RPMI8226细胞Bcl-2及增殖细胞核抗原（PCNA）表达水平的影响及其作用的分子机制。方法：CCK-8法检测一定浓度的苦参碱对RPMI8226细胞的体外增殖抑制作用;AnnexinV/PI双染色法检测细胞凋亡;PI单染色法检测细胞周期改变;同时应用流式细胞术检测Bcl-2及PCNA蛋白表达的变化。结果：苦参碱对RPMI8226细胞生长具有明显的抑制作用,呈量效和时效关系;苦参碱能诱导RPMI8226细胞凋亡,呈量效关系;细胞周期分析,G0/G1期细胞相对增多、S期相对减少、G2/M期无明显变化。苦参碱处理组RPMI8226细胞中Bcl-2及PCNA蛋白的表达跟未加药组相比阳性表达率均降低。结论：苦参碱对RPMI8226细胞生长具有明显抑制作用,其作用主要通过诱导RPMI8226细胞产生细胞周期阻滞和凋亡,降低PCNA的表达。苦参碱诱导RPMI8226细胞凋亡过程中,Bcl-2蛋白表达下调对调控细胞凋亡有重要作用。     

小鼠CD40Ig基因真核表达质粒的构建及鉴定

目的：构建含小鼠CD40Ig基因的真核表达载体，为诱导供体特异性移植物的免疫耐受的基因治疗作准备。方法：以小鼠脾脏总RNA为模板，以RT-PCR法克隆小鼠CD40胞外段cDNA及IgG2a Fc段cDNA；另以pEGFP-N1质粒为模板获得绿色荧光蛋白（GFP）基因。将所得基因片段插入真核表达载体pDC516中得到重组质粒pDC516-CD40-IgG-GFP，测序鉴定正确后，用脂质体2000将其转染人胚肾上皮细胞（HEK293细胞），荧光显微镜下观察融合蛋白的表达。结果：成功构建了小鼠CD40Ig基因真核表达质粒pDC516-CD40-IgG-GFP，并在HEK293细胞中实现表达。结论：小鼠CD40Ig基因真核表达质粒pDC516-CD40-IgG-GFP构建成功，为诱导供体特异性移植物免疫耐受的研究奠定了基础。     

成人多囊肾PCR─核苷酸重复序列的多态分析

成人多囊肾ＰＣＲ─核苷酸重复序列的多态分析温州医学院附属一院潘景业，徐玉兰，俞康，吴建波，沈志坚，胡晓霞成人型多囊肾病（Ａｄｕｌｔｐｏｌｙｃｙｓｔｉｃｋｉｄｎｅｙｄｉｓｅａｓｅ，ＡＰＫＤ）是一种常染色体显性遗传病。发病率高达１／１０００［１］。主要特...     

抗CD20阳性淋巴瘤单抗真核表达载体的包装及增殖

在我国,恶性淋巴瘤在儿童和青年中所占比例较高。大部分恶性B细胞淋巴瘤呈CD20高表达状态,利妥昔单抗是针对CD20抗原的单克隆抗体药物,能准确地识别并与之结合，并通过人体免疫清除这些肿瘤细胞，然而该药物单独治疗B细胞淋马瘤的效率仅达到48%。本实验用包装细胞对抗CD20阳性淋马瘤单抗真核表达载体PLNCX/anti-CD20-scFv-Fc-￡进行包装，并通过测定病毒滴度的方法来检测其增殖情况，报告如下。