龙虎交战针法治疗缺血性脑卒中临床研究

目的：观察龙虎交战针法治疗缺血性脑卒中的临床疗效及其对血清miR-431 和miR-1247 的影 响。方法：选取2020 年5 月—2022 年1 月就诊的缺血性脑卒中气虚血瘀证患者98 例为研究对象,随机分为 2 组各49 例。对照组给予脑心通胶囊,观察组在对照组治疗方案的基础上采用龙虎交战针刺法治疗,2 组均治 疗4 周。比较2 组美国国立卫生研究院卒中量表（NIHSS） 评分、Fugal-Meyer 运动功能评估量表（FMA） 评 分、Barthel 指数（BI）评分及临床疗效。比较2 组炎症指标［白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-6（IL-6）、肿 瘤坏死因子-α（TNF-α）］、免疫功能（T 淋巴细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+）、血清miR-431、血清miR-1247 等指标。采用Pearson 相关分析miR-431、miR-1247 与炎症、免疫指标的关系,多因素Logistic 回归和ROC 曲线分析miR-431、miR-1247 对卒中复发的影响。结果：治疗后,2 组NIHSS 评分均低于治疗前,FMA 评 分、BI 评分均高于治疗前,且观察组NIHSS 评分低于对照组,FMA、BI 评分高于对照组,差异均有统计学意 义（P＜0.05）;治疗后,2 组IL-1β、IL-6、TNF-α 均低于治疗前,且观察组IL-1β、IL-6、TNF-α 水平均低 于对照组,差异均有统计学意义（P＜0.05）;2 组CD3+、CD4+、CD8+ T 细胞水平均高于治疗前,且观察组 CD3+、CD4+、CD8+T 细胞水平均高于对照组,差异均有统计学意义（P＜0.05）;治疗后,2 组miR-431、miR- 1247 水平均低于治疗前,且观察组miR-431、miR-1247 水平均低于对照组,差异均有统计学意义（P＜ 0.05）。血清miR-431、miR-1247 水平与CD3+、CD4+、CD8+ T 淋巴细胞水平呈负相关（P＜0.05）,与IL-1β、 IL-6、TNF-α 水平呈正相关（P＜0.05）。miR-431、miR-1247 是脑卒中复发的独立危险因素（P＜0.05）,二者 联合预测脑卒中复发的AUC 为0.942。结论：龙虎交战针法能改善缺血性脑卒中气虚血瘀证患者运动功能和生 活质量,减轻炎症反应,提高免疫功能,降低血清miR-431、miR-1247 水平,上述miRNA 是卒中复发的独立 危险因素,具有较高的临床预测价值。     

沙眼衣原体pORF5质粒蛋白通过HMGB1抑制细胞凋亡机制初步研究

【摘要】 目的 探讨pORF5质粒蛋白抗凋亡分子机制,为进一步阐明沙眼衣原体致病机制提供实验依据。方法 将HeLa细胞分为两组,一组用凋亡诱导剂碳酰氰基-对-氯苯腙（CCCP）刺激30 min,另一组经pORF5质粒蛋白预处理18 h后,再用CCCP刺激30 min。然后,Western印迹检测细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和胱天蛋白酶3（caspase-3）的表达水平;JC-1荧光探针检测HeLa细胞线粒体膜电位变化;间接免疫荧光观察细胞色素c释放情况。为了分析高迁移率族蛋白1（HMGB1）是否参与pORF5质粒蛋白的抗凋亡作用,分别用HMGB1 shRNA和对照RNA稳定转染HeLa细胞,再用pORF5质粒蛋白与CCCP共刺激两种细胞后,测定Bcl-2、Bax和活化的caspase-3蛋白的表达以及细胞色素c的释放情况。两组间比较采用配对样本t检验。结果 pORF5质粒蛋白能拮抗CCCP 诱导的线粒体膜电位的下降,CCCP单独处理组Hela细胞红/绿荧光强度比率为0.4 ± 0.1,显著低于pORF5与CCCP共处理组（1.7 ± 0.3,t = 6.95,P < 0.01）。与对照组相比,pORF5与CCCP共处理组HeLa细胞Bcl-2蛋白表达水平增加（5.3 ± 0.6）倍（t = 8.62,P < 0.01）,而Bax和活化的caspase-3平均表达水平分别降低79% ± 10%（t = 9.23,P < 0.01）和75% ± 8%（t = 4.26,P < 0.05）。与对照RNA转染组相比,HMGB1 shRNA转染组HeLa细胞线粒体膜电位下降（t = 11.23,P < 0.01）,细胞色素c释放增加,Bcl-2的表达水平降低（t = 7.19,P < 0.05）,而Bax的表达水平增加（t = 13.06,P < 0.01）。结论 沙眼衣原体pORF5质粒蛋白通过HMGB1阻断线粒体凋亡途径发挥抗凋亡作用。     

针刺联合散偏汤治疗偏头痛临床研究

目的：观察针刺联合散偏汤治疗偏头痛的临床疗效。方法：选取108例偏头痛患者为研究对象,按随机数字表法分为对照组及试验组各54例,其中对照组脱落2例,试验组脱落3例,最终实际纳入对照组52例,试验组51例。对照组给予氟桂利嗪胶囊治疗,试验组给予针刺联合散偏汤治疗,2组均治疗4周。观察2组临床疗效及不良反应发生情况,比较2组复发率,比较2组治疗前后头痛发作频率、头痛平均持续时间、疼痛视觉模拟评分法（VAS）、中医证候评分、血清5-羟色胺（5-HT）、内皮素-1 (ET-1)、降钙素基因相关肽（CGRP）、多巴胺（DA）、一氧化氮（NO）水平的变化。结果：治疗后,2组头痛发作频率、头痛平均持续时间、VAS评分、中医证候积分均较治疗前下降（P<0.05）,试验组上述4项指标值均低于对照组（P<0.05）。试验组临床疗效总有效率为84.31%,对照组总有效率为67.31%,2组比较,差异有统计学意义（P<0.05）。试验组不良反应发生率为3.92%,对照组为13.46%,2组比较,差异有统计学意义（P<0.05）。试验组复发率为9.76%,对照组复发率为45.71%,2组...     

肽聚糖识别蛋白1抗鼠衣原体生殖道感染的初步研究北大核心CSCD

目的探讨肽聚糖识别蛋白1(peptidoglycan recognition protein 1,PGLYRP-1)抗鼠衣原体(Chlamydia muridarum,Cm)生殖道感染作用,为衣原体感染性疾病的治疗提供实验依据。方法构建pET-28a(+)/PGLYRP-1原核表达重组体,IPTG诱导表达PGLYRP-1重组蛋白,重组蛋白经Ni^(2+)-NTA纯化后进行Western blot鉴定。将5×10^(5)包涵体形成单位(IFU)的Cm和不同剂量的PGLYRP-1(50、100、200μg)分别接种于BALB/c小鼠阴道后穹隆,PBS和Cm感染分别作为阴性和阳性对照。收集感染后不同时间(3、7、10、14、21、28、35d)小鼠生殖道分泌物进行衣原体包涵体计数;第21d处死小鼠,无菌分离小鼠脾脏,制备脾淋巴细胞,PGLYRP-1刺激后测定IFN-γ含量;第63d分离小鼠生殖道组织,观察组织病理学变化。结果PGLYRP-1可降低Cm在小鼠生殖道组织的定植并促进Cm的清除,Cm感染阳性对照组及50、100、200μg PGLYRP-1接种组小鼠生殖道Cm清除时间分别是第35、21、14、10d;IFN-γ含量分别为(959.6±104.6)、(1025.4±112.5)、(1537.8±118.6)、(2131.2±196.7)pg/ml,PBS阴性对照组为(224.0±23.5)pg/ml;83.3%的小鼠在Cm感染后第63d存在单侧或双侧输卵管积水现象,PGLYRP-1接种组有22.2%的小鼠存在类似情况。与阳性对照组相比,PGLYRP-1接种组小鼠生殖道组织炎症反应程度显著减轻,且与PGLYRP-1蛋白剂量呈正比(P<0.05)。结论PGLYRP-1具有抗Cm生殖道感染的作用,其作用机制可能与促进IFN-γ表达上调有关。     

E型沙眼衣原体持续性感染模型的建立与鉴定

目的构建E型沙眼衣原体(Ct)持续性感染细胞模型,为深入研究Ct致病机制提供实验基础。方法用不同剂量人重组干扰素-γ(IFN-γ)处理Ct感染的HeLa细胞,体外诱导Ct持续性感染,间接免疫荧光法检测不同剂量IFN-γ下Ct包涵体形态的变化;移除处理因素,继续培养16 h后观察Ct包涵体形态,并计算Ct包涵体形成单位(IFUs)。实时定量PCR检测Ct DNA修复和重组(dnaA和dnaK)、细菌分裂(ftsK)、蛋白水解和肽转运(oppA.4和htrA)、膜结构(ompA)、发育调节(htcA)和分子伴侣(groEL)等相关基因转录水平。流式细胞术和Hoechst染色检测持续性感染12 h、24 h、40 h时肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导后的HeLa细胞凋亡率。结果75 U/mL IFN-γ可显著降低Ct感染能力,包涵体形态亦发生明显改变;移除IFN-γ后Ct IFUs为(12.60±0.52)×10⁹/L,而未移除IFN-γ组IFUs为(3.60±0.52)×10⁹/L,Ct感染力得到显著提高(P＜0.05)。持续性感染组dnaA、dnaK、groEL、ompA、ftsK和htcA基因转录水平在不同的感染时间发生不同程度的改变;而oppA.4和htrA在急性和持续性感染状态下转录水平差异无显著性(P＞0.05)。凋亡诱导后,与HeLa细胞凋亡率33.63%比较,流式细胞检测Ct持续性感染12 h、24 h、40 h时细胞凋亡率分别为14.77%(P＜0.05)、18.71%(P＜0.05)、26.32%(P＞0.05);Ct在感染12 h和24 h时呈现抗凋亡效应,随着感染时间延长,衣原体抗凋亡能力下降。结论成功构建IFN-γ诱导的E型Ct持续性感染体外模型,持续性感染状态的Ct能抑制细胞凋亡。