Expression and Purification of the Major Outer Membrane Protein of Chlamydia Trachomatis in Prokaryotic Cell

Chlamydiatrachomatis(C.trachomatis)isanobligate intracellularbacterialpathogen.Ocularinfectionwith C.trachomatisserovarsA,B,BaandCleadstotracho ma,aleadingcauseofpreventableblindnessinmanyde velopingcountries[1].Urogenital tractinfectionwithC. trachomat…     

沙眼衣原体ompA基因真核表达载体的构建及在HeLa细胞中的表达

目的　构建沙眼衣原体 (Ct)ompA基因真核表达重组质粒 ,利用脂质体体外转染HeLa细胞 ,为核酸疫苗的研制作准备。　方法　应用PCR技术从D型Ct基因组中扩增ompA全长基因 ,重组入 pUCm -T克隆载体。将pUCm -T/ompA中的ompA外源基因片段经酶切、连接等反应 ,亚克隆入 pcDNA3 .1真核表达载体的相应位点 ,进行序列分析和酶切鉴定后 ,运用脂质体将重组体 pcDNA3 .1/ompA转染HeLa细胞 ,免疫组化法观察目的基因的表达。　 结果　PCR扩增得到约 1.2kb的特异性ompA基因片段 ;序列测定证实与发布序列一致 ;构建得到真核表达重组体 ;重组质粒pcDNA3 .1/ompA在HeLa表达MOMP。　结论　CtompA基因能够在体外真核细胞中表达 ,为进一步研究CtDNA疫苗以及研究该蛋白的生物学功能提供实验基础。     

脉络宁口服液对深静脉血栓形成的疗效观察

目的　观察脉络宁口服液对深静脉血栓形成的疗效和安全性。方法　将符合纳入标准的患者随机分为2组:治疗组1 0 0例,对照组30例,分别用脉络宁口服液和注射液治疗,2周为1疗程,共用2个疗程;观察治疗前后主要症状体征、静脉血流图、甲襞微循环、血凝与抗凝及安全性指标等变化情况。显效病例,停药1个月后随访观察远期疗效。结果　经过2个疗程的治疗,总有效率:治疗组为97%,对照组为1 0 0 %,两组比较无显著性差异(P >0 . 0 5 )。临床显效病例,停药1个月后随访,治疗组保持疗效者占87. 5 %,复发者占1 3%;对照组保持疗效者占80 %,复发者占2 0 %;两组比较无显著性差异(P >0 . 0 5 )。两组静脉血流图、甲襞微循环及血凝与抗凝情况治疗后均优于治疗前,组间比较则均无显著性差异(P >0 . 0 5 )。治疗过程中两组均未发现明显不良反应。结论　脉络宁口服液对深静脉血栓形成具有较好的疗效和较高的安全性,其作用机制可能与改善血液高凝状态及溶栓作用等有关。     

促销，适可而止

随着一个产品推向市场，在市场推广与品牌传播的过程中，适度的促销可起到锦上添花的促进作用。但是，我们也不断认识到，过度的促销现象应该得到遏制，因为它可能掏空某个品牌的市场基础，透支某个产品的未来收益，这是营销界的共识。但是过度的促销现象实际上是愈演愈烈，以致于很多的企业患上了“促销依赖症”。这将对整个市场的健康状况产生诸多不良的后果：     

双头空心加压螺钉加克氏针内固定治疗股骨颈骨折

目的 探讨双头空心加压螺钉加克氏针内固定治疗股骨颈骨折的疗效。方法 对76例应用双头空心加压螺钉加克氏针内固定治疗股骨颈骨折进行了观察分析，平均随访6年10个月。结果 髋关节功能评价参照Merled-Aubigue评分标准，优28例（36．84％），良39例（51．32％），差9例（11．84％）。结论 双头空心加压螺钉治疗股骨颈骨折具有操作简单、安全、创伤小，对骨折断端有加压作用，但抗旋转能力比较差，加用克氏针内固定可有效控制旋转移位，降低骨折不愈合和股骨头坏死率。     

STD患者性病病原体感染状况的调查研究

用聚合酶链反应及培养法对３４０例性病门诊患者进行了淋球菌（Ｇｃ）、衣原体（Ｃt） 、解脲支原体（Ｕu）、人型支原体（Ｍh）、乳头状瘤病毒（Ｈｐｖ）等５种常见病原体的检测。结果明显：单纯性感染中Ｃｃ、Ｃｔ、Ｕｕ、Ｍｈ、Ｈｐｖ分别为１５．８８％、７．３５％、１７．９４％、５．５９％、４．４１％，Ｕu检出率最高；多种病原体混合感 染分别为５．５８％、４．４１％、１．１８％、２．０６％、１．７６％、２０．２９％     

SiO2-Pickering乳液佐剂增强沙眼衣原体Pgp3蛋白免疫效果

目的优化二氧化硅(SiO₂)Pickering(SPE)乳液佐剂,研究其对沙眼衣原体(Ct)Pgp3蛋白的免疫增强效应,为预防Ct感染性疾病提供实验依据。 方法优化SiO₂质量浓度、水油比及超声功率,超声乳化制备SPE佐剂。30只小鼠均分为SPE+Pgp3组(Pgp3蛋白和SPE混合免疫)、Pgp3组(Pgp3蛋白单独免疫)和PBS组。ELISA检测各组小鼠血清抗体水平和脾细胞上清细胞因子水平,流式细胞术检测脾细胞γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-4(IL-4)水平。 结果SPE最优制备条件为超声功率337 W、水油比10∶2、SiO₂质量浓度1 g/L,最优条件下SPE直径为(300.12±44.26) nm,聚合物分散性指数为0.33±0.12。除PBS组外,其他组均检测到了特异性抗体,SPE+Pgp3组总抗体IgG及其亚类IgG1、IgG2a抗体水平高于Pgp3组,且以IgG2a升高为主(P＜0.05)。SPE+Pgp3组、Pgp3组脾细胞IFN-γ和刺激指数高于PBS组,且SPE+Pgp3组高于Pgp3组(P＜0.05)；IFN-γ主要由CD4＋T细胞和CD8＋T细胞分泌。各组IL-4含量均较低。 结论SPE乳液佐剂具有良好的佐剂效应,能有效增强Pgp3蛋白体液免疫和细胞免疫,且可优势诱导Th1型免疫反应。     

沙眼衣原体pORF5蛋白真核表达系统的构建与鉴定

目的构建沙眼衣原体(Ct)pORF5基因重组质粒pDSRed-C1/pORF5,建立pORF5稳定转染的表达系统并对其进行鉴定。方法PCR法扩增pORF5基因,定向插入pDSRed-C1真核表达载体构建pDSRed-C1/pORF5重组体,重组体经酶切、PCR及测序鉴定后,用脂质体介导的基因转染法,分别将pDSRed-C1/pORF5和pDSRed-C1导入HeLa-229细胞,通过G418筛选获得转入目的基因的阳性细胞克隆;荧光显微镜和Western blot检测pORF5蛋白在细胞中的表达。结果所克隆的pORF5基因片段经测序完全正确;转染pDSRed-C1/pORF5的HeLa-229细胞大部分有pORF5蛋白的表达,而转染空载体pDSRed-C1或未转染的HeLa-229细胞,均未见pORF5蛋白表达。结论成功构建了稳定表达外源新基因pORF5的细胞系,为进一步研究该蛋白的结构功能、阐明Ct的致病机制、研制基因工程疫苗提供了有利的条件。     

医学微生物学教学改革探讨

医学微生物学是联系基础与临床的重要桥梁课程.在传统教学中,学生被动学习,兴趣不大,教学效果不佳.为提高医学微生物学的教学质量,尝试在教学理念和方法等方面进行了一些改革,在一定程度上克服了医学微生物学传统教学模式的弊端,调动了学生的积极性,增强了学生的实践技能和综合素质,取得了良好的教学效果.     

Daxx与PML在HeLa和Caski细胞株中的定位观察

目的 分析宫颈癌细胞内早幼粒细胞白血病蛋白(PML)和死亡域相关蛋白(Daxx)的定位,为进一步研究高危型HPV16和HPV18的致癌机制奠定试验基础.方法 培养HeLa细胞和Caski细胞,利用间接免疫荧光试验,在激光共聚焦显微镜下观察并分析PML和Daxx在细胞内的定位;分析Caski细胞中Daxx与HPV16 E6蛋白定位.结果在HeLa细胞和Caski细胞,PML红色信号和Daxx绿色信号在胞核和胞浆呈弥散样均匀分布;Daxx绿色信号与PML红色信号重叠时,依然显示各自的绿色信号与红色信号.在Caski细胞,HPV16 E6和Daxx在细胞中分布不均匀,呈区域性聚集;表达红色信号的HPV16 E6与表达绿色信号的Daxx重叠成黄色信号.结论 在Caski细胞和HeLa细胞,PML定位于细胞核的PML-NBs;Daxx在胞核和胞浆呈弥散样均匀分布;两者未发生共定位.Daxx与HPV16 E6蛋白在Caski细胞共定位于胞浆与胞核.