六味地黄丸增效小鼠黑色素瘤HSV-tk/GCV 自杀基因疗法的免疫机制

目的明确六味地黄丸是否增强单纯疱疹病毒核苷激酶/更昔洛韦（HSV-tk/GCV）自杀基因疗法对小鼠黑 色素瘤的免疫杀伤效果,并对其相关机制进行探索。方法采用Western Blot 实验、免疫荧光实验检测六味地 黄丸对缝隙连接蛋白43（Cx43）表达水平及膜定位的影响;通过荧光黄染料、钙黄绿素荧光传输实验检测六味 地黄丸对小鼠黑色素瘤细胞B16（B16 细胞）缝隙连接通讯（GJIC）功能的影响;PI/Hoechst 染色实验检测CD8+ T 细胞对B16 细胞的免疫杀伤效果;CD8+ T 细胞激活实验观察GJIC 在六味地黄丸增强对小鼠黑色素瘤免疫杀 伤中的作用。结果自杀基因疗法联合六味地黄丸治疗较单独应用自杀基因疗法能更显著地抑制肿瘤生长; Western Blot 及免疫荧光实验显示六味地黄丸组Cx43 表达明显上调,荧光传输实验显示六味地黄丸组B16 细 胞GJIC 功能显著增强;PI/Hoechst 染色实验显示,六味地黄丸组CD8+ T 细胞对B16 细胞的免疫杀伤效果更加 显著,阻断Cx43 后,对B16 细胞的免疫杀伤效果则被逆转,同时CD8+ T 细胞的激活也被减弱。结论六味 地黄丸可通过上调B16 细胞中Cx43 的表达,改善GJIC 功能,促进肿瘤抗原的交叉提呈,更强地激活CD8+ T 细 胞以增强其对肿瘤细胞的免疫杀伤效果。     

清肺化痰通络方对大鼠肺纤维化肺组织中iNOS表达的影响

目的：观察清肺化痰通络方对博莱霉素所致大鼠肺纤维化中诱导型一氧化氮合酶（iNOS）表达的影响。方法：通过气管内灌注博莱霉素A5（BLMA5）复制大鼠肺纤维化动物模型，于灌服该方后3、7、14、28天，分别观察肺组织病理变化及iNOS的表达。结果：清肺化痰通络方能显著改善大鼠的一般身体状况，减轻病变的程度，并抑制iNOS的表达。结论：清肺化痰通络方可能通过抑制iNOS的异常表达。对BLMA5致肺组织纤维化起到一定的防治作用。     

MTT法分析含药血清对体外培养肺癌细胞增殖的影响

目的:M TT法观察莪术瓜蒌汤含药血清对人肺癌细胞增殖的影响。方法:家兔灌胃制备高、中、低剂量莪术瓜蒌汤血清分别作用于人肺癌细胞,采用M TT法观察莪术瓜蒌汤含药血清对细胞增殖的抑制作用。结果:高剂量血清组与对照血清组之间的吸光度差异有显著统计学意义(P<0.01),随着作用时间的延长,其吸光度逐渐降低,抑制率逐渐增高。结论:莪术瓜蒌汤含药血清具有一定的抗肺癌作用,并存在一定的量效关系,为莪术瓜蒌汤的临床应用提供了科学的实验依据。     

5-Aza-dC对恶性黑色素瘤细胞的抑制作用及机制研究

目的研究5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-Aza-dC)对小鼠黑色素瘤B16细胞增殖、凋亡及体外迁移、侵袭等恶性生物学行为的影响及其作用机制。方法 2022年1月至6月, 通过CCK-8法、细胞划痕实验、Transwell侵袭实验及流式细胞术检测5-Aza-dC对小鼠恶性黑色素瘤B16细胞体外增殖、迁移、侵袭及凋亡等恶性生物学行为的影响;蛋白免疫印迹法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax及缝隙连接蛋白Cx43的表达水平。采用Mann-WhitneyU检验、Welch检验和单因素方差分析。结果 CCK-8实验结果显示:与空白对照组及DMSO对照组相比, 5-Aza-dC给药组细胞存活率均明显降低(均P<0.01);同一药物浓度作用下不同给药时间细胞存活率对比显示, 细胞存活率随着作用时间的增加而降低(P<0.01)。细胞划痕实验结果显示:5-Aza-dC给药组细胞划痕愈合率均明显低于空白对照组[(74.67±11.91)%比(100.00±0.00)%, P<0.01]。Transwell侵袭实验结果显示:空白对照组侵袭细胞数量明显多于5-Aza-dC给药组[(444±65)...     

川芎防治动脉粥样硬化有效部位的研究

目的 :认定川芎防治动脉粥样硬化 (ＡＳ)的有效部位。方法 :按正交设计表Ｌ16(2 15)内涵 ,研究川芎生物碱、酸性酚性成分、中性酯类物质、挥发油、酸性物质 5部位 (五因素二水平 )对ＡＳ的疗效。每种部位等分成 480份 ,按设计应该给 16只ＡＳ造模家兔中的 8只家兔每日每只给药 1份。结果 :观察指标显示川芎可逆转造模物质所致的ＡＳ病变 ,表现为 :①降低血清甘油三酯含量 :生物碱 (Ｐ <0 .0 5 )、酸性酚性成分与挥发油交互作用 (Ｐ <0 .0 1)、生物碱与酸性成分交互作用 (Ｐ <0 .0 1)可使动物血清甘油三酯明显回降 ;②降低血清总胆固醇 (ＴＣ…     

化瘀消瘤方含药血清对体外培养的人肺癌细胞周期的影响

目的：探讨化瘀消瘤方含药血清对肺癌细胞周期的作用。方法：制备高、中、低剂量含药血清、西药血清和对照血清，作用于人肺癌细胞。MTT法观察血清对细胞增殖的作用，流式细胞仪进行细胞周期时相分析。结果：高剂量含药血清组与对照血清组之间的吸光度差异有统计学意义(P<0.01)，中剂量血清组、高剂量血清组的S期细胞所占比例与对照血清组之间的差异有统计学意义(中剂量血清组P<0.05，高剂量血清组P<0.01)。结论:本实验提示化瘀消瘤方含药血清可能是通过干扰细胞DNA合成而抑制肺癌细胞的增殖，为该药的临床应用提供了科学的实验依据。     

激光共聚焦显微镜观察FITC-Annexin V/PI双染色法检测人肺癌细胞凋亡

目的激光共聚焦显微镜观察FITC-Annexin V／PI双染色法检测人肺癌细胞凋亡的形态。方法对不同剂量含药血清处理的体外培养人肺癌PGLH7细胞株进行Annexin V／PI双染,激光共聚焦显徽镜观察细胞凋亡的形态特征。结果Annexin V／PI双染色法加激光共聚焦显微镜观察,经含药血清作用的人肺癌细胞ee,凋亡早期细胞呈AnnexinV高染而PI低染,细胞膜呈绿色而细胞核不着色;凋亡中、晚期细胞则AnnexinV和PI均为高染,细胞膜呈绿色而细胞核呈红色;部分细胞的核呈碎片状或梅花状,为典型的细胞凋亡形态。结论FITC—AnnexinV／PI双染色法加激光共聚焦显微镜观察凋亡细胞是目前观察凋亡的理想方法,特别适用于凋亡细胞的早期检测。     

基于Cx32探讨六味地黄丸增效自杀基因抗肝癌的缝隙连接机制

目的:探讨六味地黄丸对大鼠肝癌细胞株CBRH7919缝隙连接蛋白(connexin,Cx) 32及间隙连接细胞间通讯(gap junction intercellular communication,GJIC)的影响,进一步研究其增强自杀基因旁杀伤效应的机制。方法:六味地黄丸(32 g·kg·d-1)与等体积的生理盐水灌胃大鼠,取血制备含药血清及空白血清,采用不同浓度的六味地黄丸含药血清及空白血清分别对CBRH7919细胞进行处理。实验分为4组,即空白组(体积分数为10%空白鼠血清),六味地黄丸含药血清高、中、低浓度组(10%,5%,2. 5%含药鼠血清)。应用间接免疫荧光法、实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测肝癌细胞Cx32蛋白及mRNA表达,应用光漂白恢复技术检测各组肝癌CBRH7919细胞GJIC功能。结果:(1)间接免疫荧光检测结果显示,与空白组比较,六味地黄丸含药血清各浓度组对CBRH7919细胞Cx32的表达具有浓度依赖性上调作用(P 0. 05,P 0. 01),尤其在细胞膜上的表达增多。(2)Real-time PCR结果表明,六味地黄丸各剂量组均可提高Cx32 mRNA表达(P 0. 05,P 0. 01),且具有一定的量效关系;(3)光漂白恢复技术检测结果表明,六味地黄丸各组的平均荧光恢复率高于空白组,并呈现出一定的浓度依赖趋势。结论:六味地黄丸增强自杀基因旁杀伤效应的机制与缝隙连接有关,可能是通过增加CBRH7919细胞Cx32在细胞膜上的定位,提高Cx32 mRNA及蛋白水平的表达,从而增强GJIC功能而达到增效作用。     

开设基础医学概论课程的教学思考

笔者阐述了医学院校面向非医学专业开设基础医学概论课程的必要性以及教学中存在的问题,并就教学工作中合理选取教学内容、优化备课、改革教学方法进行深入分析,提高学生学习的积极性;加强师资队伍建设等方面进行了探讨。