NF-κB结合元件缺失对NOX1启动子转录活性的影响

目的:构建含NADPH氧化酶1(NOX1)近端启动子区的pGL3萤光素酶报告基因载体及缺失NF-κB结合元件的相应载体,分别测定其相应活性,探讨NF-κB结合元件缺失对NOX1启动子区转录活性的影响。方法:采用PCR法克隆NOX1启动子区序列(1 415 bp),将目的片段与pGL3萤光素酶载体分别双酶切、纯化后进行连接(pGL3-NOX1-1415),测序鉴定;应用Alibaba 2.1软件分析NOX1近端启动子区,获取NF-κB结合元件;重叠PCR法将含该元件的启动子区域(88 bp)缺失,并构建相应载体(pGL3-NOX1-1327)。将两载体分别与pRL-TK内参质粒瞬时转染进入A549细胞,采用TNF-α(10μg/L)刺激细胞24 h,萤光酶标仪检测A549细胞的萤光素酶活性。结果:测序鉴定结果提示pGL3-NOX1-1415及NF-κB结合元件缺失的pGL3-NOX1-1327载体构建成功;细胞实验显示,TNF-α刺激后,转染pGL3-NOX1-1415的A549细胞萤光素酶活性明显强于对照组(P0.05),而转染NF-κB结合元件缺失的pGL3-NOX1-1327的细胞萤光素酶活性明显低于转染pGL3-NOX1-1415组(P0.05)。结论:TNF-α诱导A549细胞NOX1基因活化与NF-κB密切相关,NF-κB参与了TNF-α诱导的NOX1基因启动子的转录调控。     

CT图像定量分析竖脊肌横截面积减少率在机械通气患者中的临床价值

目的:应用CT图像定量分析技术测量机械通气患者双侧竖脊肌横截面积(ESM_(CSA))的减少率,分析其与患者危重程度、预后、肌力及营养的关系,研究其在机械通气患者中的意义。方法:回顾性统计机械通气患者入院时和入院7～10 d的CT胸12椎体水平ESM_(CSA)之和的减少率。按照减少率10%、10%～20%、20%分为3组,分析3组患者之间病情危重程度、预后、肌力评分、营养水平的差异。结果:研究共纳入111例患者,其中A组47例,B组46例,C组18例。ESM_(CSA)减少率与患者的危重程度、肌力评分有密切关系,3组患者MRC评分、APACHEⅡ评分、SOFA评分的差异均有统计学意义(P0.05)。APACHEⅡ评分、SOFA评分、ESM_(CSA)减少率与死亡之间的ROC曲线下面积分别为0.759、0.737、0.778,ESM_(CSA)减少率界值10.01%,敏感度为0.828、特异度为0.512。3组患者ICU获得性肌无力(ICU-AW)发生率、脱机成功率、28 d病死率及90 d存活天数、ICU住院天数的差异均有统计学意义(P0.05)。ESM_(CSA)减少率越高,机械通气天数、ICU住院天数增多,病死率增加。3组间的总住院天数、血清前白蛋白的组间差异无统计学意义。结论:CT测量胸12椎体水平ESM_(CSA)在7～10 d内的减少率,可以准确评估机械通气患者肌肉损耗程度和疾病的严重程度,预测ICU-AW和脱机困难的概率,预测机械通气患者的预后。     

不同浓度肿瘤坏死因子-α对肺腺癌A549细胞的影响

目的 观察不同浓度肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对肺腺癌A549细胞产生的保护、促炎、促细胞凋亡效应.方法 分别以0、1、10、25、50 ng/mL的TNF-α诱导肺腺癌A549细胞6h.采用MTT比色法观察细胞存活率;应用活性氧(ROS)荧光探针DCFH-DA检测ROS强度;RT-PCR法检测Nrf-2、NF-κB基因的表达;DAPI细胞核荧光染色法处理细胞,荧光显微镜下观察细胞凋亡.结果 0、1、10、25、50 ng/mL TNF-α对肺腺癌A549细胞存活率无影响(P均＞0.05);100 ng/mL TNF-α诱导后,与对照组比较,细胞存活率降低(P＜0.05).随着TNF-α浓度增加,肺腺癌A549细胞产生ROS的量随之增加(P均＜0.05),Nrf-2 mRNA表达减少(P均＜0.05),NF-κB mRNA表达增加(P均＜0.05),细胞凋亡率有上升趋势.结论 不同浓度TNF-α诱导肺腺癌A549细胞可产生保护、促炎、促细胞凋亡等不同细胞效应,且随TNF-α浓度增加,细胞损伤加重;其机制可能与ROS产生的量有关.     

冠心病不同中医证型与血浆纤维蛋白原的相关性研究

目的:检测冠心病中医各证型患者血浆纤维蛋白原(FIB)浓度,为冠心病的中医辨证分型及辨证论治提供参考。方法:179例冠心病患者(冠心病组)按中医辨证分为心血瘀阻29例、痰浊内阻27例、阴寒凝滞33例、心肾阴虚30例、气阴两虚33例及阳气虚衰27例共6型,与排除冠心病的体检人员(对照组)30例均进行血浆FIB浓度测定。结果:与对照组比较,冠心病组患者FIB浓度均值明显升高(P0.05);冠心病组中各证型间比较,阳气虚衰型FIB浓度阴寒凝滞型痰浊内阻型气阴两虚型心血瘀阻型心肾阴虚型。阳气虚衰型急性冠脉综合征,其FIB阳性率明显高于其他各证型(P0.05)。结论:FIB浓度的变化可能与冠心病严重程度有一定关系,在不同证型中阳气虚衰型FIB浓度增高其临床指导意义更大。     

冠心病不同中医证型与血浆纤维蛋白原的相关性研究

目的检测冠心病中医各证型血浆纤维蛋白原(FIB)的水平,为冠心病的中医辨证分型提供客观依据。方法 179例冠心病患者,中医辨证分为心血瘀阻、痰阻心脉、阴寒凝滞、心肾阴虚、气阴两虚、阳气虚衰型6组,选对照组30例,测定血浆FIB水平。结果各组FIB水平升高的阳性率以阳气虚衰型最高,以下依次为阴寒凝滞型、痰浊内阻型、气阴两虚型、心血瘀阻型、心肾阴虚型、对照组;各组两两比较的21对中,6对差异有统计学意义、15对差异无统计学意义;急性冠脉综合征(ACS)的阳性率在冠心病的6个证型中差异有统计学意义。结论 FIB水平可能与冠心病严重程度有一定关系,但单独做为冠心病不同中医证型的分型指标意义不大。     

重度颅脑损伤急性期高血糖反应与预后的相关性分析

目的 观察重度颅脑损伤患者急性期血糖浓度的变化规律,分析其与病情严重程度及预后的相关性.方法 78例重度颅脑损伤患者入院后24 h内进行格拉斯哥昏迷量表评分和血糖检测,3个月后接受格拉斯哥预后量表评分.结果 颅脑损伤后24h的空腹血糖水平显著高于正常值(P＜0.05),与格拉斯哥昏迷量表评分呈显著负相关(P＜0.05),与患者的预后呈显著负相关(P＜0.05).结论 重度颅脑外伤患者急性期的血糖浓度是判断颅脑损伤的严重程度及近期预后的参考指标.     

冠心病不同中医证型与FIB、HS-CRP的相关性研究

目的:检测冠心病中医不同证型血浆纤维蛋白原(FIB)、血清超敏C反应蛋白(HS-CRP)水平,为冠心病的中医辨证分型提供客观依据,为冠心病的辨证论治提供参考。方法:将179例冠心病患者,中医辨证分为心血瘀阻、痰浊内阻、阴寒凝滞、心肾阴虚、气阴两虚、阳气虚衰型6组,选对照组30例,测定FIB、HS-CRP水平。结果:①各组中FIB测值高于正常的比例阳以气虚衰型最高,具体测值为阳气虚衰型>阴寒凝滞型>痰浊内阻型>气阴两虚型>心血瘀阻型>心肾阴虚型>对照组;冠心病中医证型中HS-CRP测值为心血瘀阻型>阳气虚衰型>痰浊内阻型>阴寒凝滞型>对照组>气阴两虚型>心肾阴虚型。②7组的FIB及HS-CRP水平的两两比较的21对中,均为6对有统计学差异,15对无统计学差异;③急性冠脉综合征(ACS)的阳性率在冠心病的6证型组中有统计学差异。结论FIB、HS-CRP对冠心病中医辨证分型有一定参考价值,尤其是FIB在阳气虚衰型,HS-CRP在心血瘀阻型中的作用更大。     

Noxl基因启动子表达载体的构建

目的克隆烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶（Nox）上游启动子序列,为研究Noxl基因的转录调控奠定基础。方法以人基因组DNA为模板,通过PCR扩增获得1415bp（-1415-0）、1276bp（-1415～-140）、997bp（-1415～-419）、839bp（-1415～-577）、470bp（-1415～-946）大小的Noxl启动子片段,将其定向克隆入pGL3-Basic荧光素酶表达载体,构建荧光素酶报告基因载体,进行真核细胞转染后鉴定目的片段启动子活性。结果在A549细胞中,各Noxl启动子片段均有活性;-140～-419bp和-577～-946bp区域可能存在Noxl启动子核心区域。结论成功克隆了在肺泡上皮样细胞中具有活性的Noxl启动子序列,为进一步研究Noxl基因的转录调控机制奠定了基础。     

Nox1基因启动子表达载体的构建

目的 克隆烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶(Nox)上游启动子序列,为研究Nox1基因的转录调控奠定基础.方法 以人基因组DNA为模板,通过PCR扩增获得1 415 bp(-1415～0)、1 276 bp(-1415～-140)、997 bp(-1415～-419)、839 bp(-1415～-577)、470 bp(-1415～-946)大小的Nox1启动子片段,将其定向克隆人pGL3-Basic荧光素酶表达载体,构建荧光素酶报告基因载体,进行真核细胞转染后鉴定目的片段启动子活性.结果 在A549细胞中,各Nox1启动子片段均有活性;-140～-419 bp和-577～-946 bp区域可能存在Nox1启动子核心区域.结论 成功克隆了在肺泡上皮样细胞中具有活性的Nox1启动子序列,为进一步研究Nox1基因的转录调控机制奠定了基础.