中西医结合治疗癫痫伴抑郁Meta分析

目的:系统评价中西医结合治疗癫痫伴抑郁患者的临床疗效。方法:计算机检索中国知网、万方数据库、中国医学生物文献数据库、维普资讯、PubMed及Web of Science等中英文数据库,筛选出自各数据库建库以来至2018年7月关于中西医结合治疗癫痫伴抑郁的临床随机对照试验(randomized controlled trial,RCT)研究,根据系统评价标准依次进行文献质量评价和Meta分析。结果:纳入14个研究,共1183例患者。Meta分析结果显示:中西医结合治疗癫痫伴抑郁在降低HAMD评分、提高QLOIE-31评分方面优于单纯西药治疗。癫痫发作频次改善率效应值合并量OR=3.53,95%CI(1.73,7.17),Z=3.48(P=0.0005),差异有统计学意义(P<0.05)。临床安全性效应值合并量OR=0.59,95%CI(0.35,0.98),Z=2.03(P=0.04),差异有统计学意义(P<0.05)。结论:中西医结合足疗程治疗癫痫伴抑郁临床疗效优于单纯西药治疗,且临床安全性良好,但因纳入研究数量和质量有限,上述结论尚待高质量的RCT研究验证。     

小柴胡汤治疗癫痫的网络药理学研究

目的:通过中药网络药理学技术研究小柴胡汤治疗癫痫的活性成分、作用靶标、靶标的相互作用关系、靶标的生物学功能及其作用的通路,探讨其可能的作用机制。方法:在中药系统药理学数据库和分析平台上筛选出小柴胡汤的活性成分,并根据活性成分检索其成分作用的靶标。利用在线文本挖掘服务器(GeneCards)和人类孟德尔遗传数据库(OMIM)查询与癫痫相关的靶标,并使用在线软件venny 2.1 对癫痫相关的靶标与小柴胡汤作用的靶标取交集,得到小柴胡汤治疗癫痫的潜在靶标156个。将潜在靶标导入Cytoscape软件,初步获得“成分-靶标”关系网络;同时基于clusterProfiler包对潜在靶标进行基因本体(GO)功能富集分析、基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。并根据KEGG富集分析结果,构建“潜在靶标-KEGG通路”关系网络。此外,为了解靶标之间的相互作用关系,把潜在靶标导入STRING在线数据库,构建蛋白-蛋白相互作用网络(PPI网络),将关系网络编排导入Cytoscape软件进行拓扑结构分析获得核心子网络。结果:小柴胡汤的活性成分有162种,主要包括:槲皮素、汉黄芩素、黄芩苷、山柰酚、人参皂苷Rh2、异鼠李素、柚皮素、木蝴蝶素等;作用的靶标有156个。其主要作用的途径有:IL-17信号通路、细胞凋亡、C型凝集素受体信号通路、内分泌的阻力等。结论:小柴胡汤治疗癫痫体现了中药复方多成分、多靶标、多通路共同作用的特点。本研究进一步拓宽了小柴胡汤在神经系统疾病方面的应用,为进一步的实验研究提供了理论基础。     

基于定痫汤干预后癫痫小鼠海马区miRNA-204表达水平的变化及脑电图变化的研究

目的:研究定痫汤干预后癫痫小鼠脑电图的变化、小鼠海马区miRNA-204表达水平的变化以及自噬相关蛋白ATG7、LC3II的表达变化,探讨其可能的作用机制。方法:取50只雄性昆明小鼠,其中40只随机分成模型组、生理盐水组、卡马西平组和定痫汤组,每组10只,另外10只为备用小鼠。首先对各组实验动物进行灌胃给药两周,模型组和生理盐水组均予20 mL·kg^-1·d^-1生理盐水进行灌胃;定痫汤组予7 g·kg^-1·d^-1定痫汤药液进行灌胃;卡马西平组予30 mg·kg^-1·d^-1卡马西平混悬液灌胃。然后,通过盐酸匹罗卡品构建小鼠急性癫痫模型。其次,对各组小鼠进行行为学和脑电图观察。最后,将小鼠断头取脑,采用实时荧光定量PCR技术检测小鼠海马区miRNA-204表达水平的变化;并且通过免疫组化法检测自噬相关蛋白ATG7、LC3II的表达变化。结果:与生理盐水组相比,模型组小鼠癫痫发作的频率多、持续时间长,小鼠脑电图尖波、棘波、棘慢波明显增多,海马区miRNA-204的表达明显下调(P<0.01),自噬相关蛋白ATG7、LC3II的表达明显增多(P<0.01)。与模型组相比,使用定痫汤干预后小鼠癫痫发作频率减少,小鼠脑电图痫性波形减少,小鼠海马区miRNA-204的表达升高(P<0.01),自噬相关蛋白ATG7、LC3II的表达下调(P<0.01)。结论:定痫汤可以减少小鼠癫痫发作的频率,减少小鼠脑电图的痫性波形。其可能是通过上调miRNA-204的表达,抑制自噬相关蛋白ATG7、LC3II的表达,拮抗小鼠海马神经元过度自噬,从而发挥抗癫痫的作用。     

定痫丸对急性期癫痫小鼠海马组织Wnt/β-Catenin信号通路相关蛋白及神经元凋亡的影响

目的研究定痫丸对急性期癫痫小鼠海马组织Wnt/β-Catenin信号通路相关蛋白及神经元凋亡的影响,探讨其可能的疗效机制。方法取100只8~10周龄SPF级雄性小鼠,其中20只用于模型失败备用小鼠,将80只小鼠随机分为4组,分别为模型组(A)、生理盐水组(B)、卡马西平组(C)、定痫丸组(D),每组20只,采用腹腔注射氯化锂-匹罗卡品的方法制作急性期癫痫小鼠模型,A组不予干预,B组实验全程均给予生理盐水,C组予卡马西平混悬液灌胃,D组予定痫丸混悬液灌胃,应用免疫组化和Western Blot分别检测海马组织内β-Catenin(β-连环蛋白),Cyclin D1(细胞周期蛋白D1)和Wnt3a的蛋白表达水平,运用Tunel法检测神经元的凋亡情况。结果与生理盐水组比较,模型组海马组织中的β-Catenin、Wnt3a的蛋白表达明显上调(P<0.05),在海马CA1区和CA3区的凋亡阳性细胞增多(P<0.05);与模型组比较,定痫丸组中的β-Catenin、Wnt3a的蛋白表达下调(P<0.05),在海马CA1区和CA3区的凋亡阳性细胞减少(P<0.05);在4组海马组织中均未检测到Cyclin D1蛋白的表达。结论定痫丸可能是通过下调Wnt/β-Catenin信号通路上的β-Catenin、Wnt3a的蛋白的表达,抑制了海马神经元的凋亡,达到治疗癫痫的作用。     

加味柴胡疏肝汤调控miRNA-204对癫痫小鼠海马自噬的影响

目的:观察加味柴胡疏肝汤对癫痫小鼠海马微小非编码RNA 204(miRNA-204)的表达影响,探讨其发挥神经保护作用的机制。方法:将60只小鼠随机分为6组:正常组,模型组(盐酸匹罗卡品180 mg·kg~(-1)),加味柴胡疏肝汤组(7 g·kg~(-1)·d~(-1)),加味柴胡疏肝汤+miRNA-204模拟物组(7 g·kg~(-1)·d~(-1)+2μL),加味柴胡疏肝汤+miRNA-204抑制物组(7 g·kg~(-1)·d~(-1)+2μL),卡马西平组(30 mg·kg~(-1)·d~(-1)),各灌胃2周;采用匹罗卡品使小鼠致痫,6组分别灌胃给药、抑制及过表达miRNA-204后,处死小鼠,取其海马组织,观察每组的指标情况,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测小鼠海马miRNA-204的表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测自噬相关蛋白微管相关蛋白轻链3(LC3),自噬相关标志性蛋白7(ATG7)的表达情况,苏木素-伊红(HE)染色观察每组小鼠海马病理学变化;透射电镜观察各组小鼠海马组织自噬情况。结果:与正常组比较,模型组小鼠miRNA-204表达显著降低(P0.01),海马C1区病理改变最明显,ATG7,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达显著升高(P0.01),自噬小体数量最多;与模型组比较,加味柴胡疏肝组小鼠海马组织miRNA-204表达明显升高(P0.05),海马C1区病理改变减轻,ATG7,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达明显降低(P0.05),自噬小体数量减少;加味柴胡疏肝汤+miRNA-204模拟物组小鼠海马组织miRNA-204表达显著升高(P0.01),海马C1区病理改变最轻,ATG7,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达显著降低(P0.01),自噬小体数量最少;与加味柴胡疏肝汤比较,加味柴胡疏肝汤+miRNA-204抑制物组上述指标变化趋势相同,变化幅度明显减少(P0.05)。结论:加味柴胡疏肝汤可以改善癫痫小鼠海马组织病理改变,其作用机制可能是通过升高癫痫小鼠海马miRNA-204的表达,抑制神经元过度自噬,减少细胞凋亡。     

半夏白术天麻汤治疗癫痫作用机制的网络药理学研究

目的:运用网络药理学技术探讨半夏白术天麻汤治疗癫痫的作用机制。方法:分别在中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)、BATMAN-TCM数据库及TCMID数据库中检索并整合得到半夏白术天麻汤的活性成分及活性成分作用的靶点。在OMIM数据库和GeneCards数据库中检索并整合得到癫痫的相关靶点。通过Venny软件映射得到半夏白术天麻汤治疗癫痫的潜在靶点。通过Cytoscape 3.6. 1软件构建成分-靶点关系网络,通过STRING 11.5数据库构建蛋白质-蛋白质相互作用网络,筛选核心治疗靶点。基于R语言软件对半夏白术天麻汤治疗癫痫的潜在靶点进行基因本体(GO)富集分析、京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析,并且构建KEGG关系网络。结果:共筛选出半夏白术天麻汤活性成分130个,半夏白术天麻汤治疗癫痫的潜在靶点258个,其中核心靶点5个,包括β_2肾上腺素受体(ADRB2)、钙调蛋白1 (CALM1)、雌激素受体1 (ESR1)、一氧化氮合酶2 (NOS2)、丝裂原活化蛋白激酶14 (MAPK14)。且靶点之间具有直接或间接的相互作用关系。其涉及的GO生物学主要包括γ-氨基丁酸(GABA)能突触、神经递质受体的活动、GABA-A受体活动、GABA受体活动、苯二氮卓受体活动等。其主要涉及的KEGG通路包括白细胞介素-17 (IL-17)信号通路、5-羟色胺能突触等。结论:半夏白术天麻汤通过多成分、多靶点、多途径对癫痫发挥作用。     

加味柴胡疏肝汤调控miR-204影响癫痫小鼠海马神经元调亡与ATG7、LC3Ⅱ的表达＊

目的 观察加味柴胡疏肝汤对癫痫小鼠海马神经元自噬和凋亡的拮抗作用，探讨其发挥神经保护作用的机制。方法 将60只小鼠随机分为6组：生理盐水组（20 mL·kg^-1·d^-1灌胃两周）、模型组（180 mg·kg^-1腹腔注射）、加味柴胡疏肝汤组（7 g·kg^-1·d^-1灌胃两周）、加味柴胡疏肝汤＋miRNA-204 mimic组（2 μL颅内注射）、加味柴胡疏肝汤＋miRNA-204 inhibitor组（2 μL颅内注射）、卡马西平组（混悬液30 mg·kg^-1·d^-1灌胃两周）；采用匹罗卡品使小鼠致痫，抑制及过表达miRNA-204后，分别予加味柴胡疏肝汤灌胃，处死小鼠，取其海马组织，观察每组的指标情况：采用实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）技术检测小鼠海马miRNA-204，以及自噬相关基因ATG7、LC3Ⅱ的表达情况，采用原位缺口末端标记法（TUNEL）检测小鼠海马C1区神经元凋亡情况。结果 与生理盐水组相比，模型组小鼠海马miR-204表达明显降低（P＜0.01），自噬相关基因ATG7、LC3Ⅱ的表达，神经元凋亡指数明显升高（P＜0.01）；与模型组相比，使用加味柴胡疏肝汤后，小鼠海马组织miR-204表达明显升高，自噬相关基因ATG7、LC3Ⅱ的表达，神经元凋亡指数明显降低（P＜0.05）；使miR-204过表达后，与单纯使用柴胡疏肝汤相比，上述指标变化趋势相同，变化幅度增大（P＜0.01）；抑制miR-204表达后，与单纯使用柴胡疏肝汤相比，上述指标变化趋势相同，变化幅度减少（P＜0.05）。结论 加味柴胡疏肝汤具有抗癫痫作用，可能是通过升高miRNA-204的表达，拮抗小鼠海马神经元过度自噬和凋亡。