中药药理学实验教学改革探索与实践

中药药理学实验教学是中药药理学教学的重要组成部分。通过优化实验教学内容,完善自编教材,加强教学过程管理,合理应用现代教学手段和改革考核方式等途径,提高了实验教学效果。     

禹州漏芦总黄酮抑制佐剂性关节炎大鼠Wnt信号

研究地道药材禹州漏芦主要活性成分总黄酮(FELT)对佐剂性关节炎(AA)大鼠Wnt信号的影响。采用大鼠关节炎评分法和MTT检测FELT对AA大鼠的治疗作用,Real-time qPCR检测FELT灌胃治疗对AA大鼠滑膜中Wnt信号关键基因β-catenin,C-myc和cyclin D1表达的影响,Real-time qPCR检测FELT灌胃治疗对AA大鼠滑膜中Wnt信号上游负调控基因SFRP 1,2,4,5表达的影响。结果发现FELT对AA大鼠关节炎评分和MTT值有显著的抑制作用,对Wnt信号关键基因β-catenin,C-myc和cyclin D1表达有显著的抑制作用,对SFRP 1,2,4表达有显著的上调作用。FELT灌胃治疗对AA大鼠有较好的治疗作用,这种治疗作用可能是通过对Wnt信号的抑制实现的。     

白藜芦醇下调肌球蛋白轻链激酶过表达抑制大鼠肝肿瘤增生

目的研究白藜芦醇(Res)通过影响肌球蛋白轻链激酶(MLCK)在肝脏中表达水平抑制原发性肝癌的增生。方法采用口服饮水中含0.9 mmol.L-1二乙基亚硝胺10周诱发原发性肝肿瘤;20周后,治疗组大鼠每天给予肌肉注射Res 50 mg.kg-16周;26周后,处死大鼠,计数肝表面癌结节数,称量和计算体重、肝重,肝/体重比,测定血清中甲胎蛋白的变化,观察大鼠肝脏的病理改变;用免疫组化和Westernblot法检测Res对MLCK的表达影响,用细胞凋亡试剂盒检测Res诱导肿瘤细胞的凋亡。结果 Res治疗组大鼠和模型组大鼠相比,体重增加,肝肿瘤结节数和肝/体重比和血清甲胎蛋白值减少或降低(P<0.05)。模型组大鼠肝组织MLCK的表达水平明显增加,而Res治疗可逆转MLCK的过表达水平,并诱导肿瘤细胞凋亡。结论 Res通过下调肝组织MLCK的表达水平诱导凋亡,抑制大鼠肝肿瘤细胞的增生。     

MOX燃料元件生产过程主要职业危害和防护重点

通过工艺、原辅料系统分析,辨识MOX燃料元件生产过程存在的职业危害主要来自UO2、PuO2以及杂质核素产生的内、外照射危害和化学毒性。铀、钚及其子体在衰变过程产生α粒子、β粒子、γ射线和X射线,铀、钚自发裂变产生中子。PuO2原料中各核素（含杂质核素）γ剂量率贡献依次为238Pu、241Am、240Pu、239Pu、137Cs、241Pu、236Pu、234U、232U。MOX燃料元件生产过程辐射防护应重点考虑物料的密封和γ射线、中子的屏蔽。     

UPLC-MS/MS法检测人体毛发中右美沙芬及其代谢物去甲右美沙芬

目的:建立一种准确、快速检测毛发中右美沙芬及其代谢物去甲右美沙芬的超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)方法。方法:用含内标双苯戊二氨酯(SKF_525A)的甲醇溶液提取含有右美沙芬及其代谢物的毛发,经0.22μm微孔有机滤膜过滤,UPLC-MS/MS检测。采用ACQUITY UPLC HSS T3超高液相色谱柱(100 mm×2.1 mm, 1.8μm),以0.2%甲酸(10 mmol·L^-1甲酸铵)和乙腈为流动相进行梯度洗脱,流速0.3 mL·min^-1,柱温为室温。采用电喷雾离子源,正离子多反应模式检测。结果:右美沙芬和去甲右美沙芬质量浓度均在1～100 ng·mL^-1范围内线性响应良好,线性方程分别为Y=1.349 49X-0.020 80 (r=0.998 8)和Y=0.775 10X-0.013 87 (r=0.999 1),检测限和定量限均分别为0.01 ng·mL^-1和0.025 ng·mL^-1,平均回收率在97.0%～104.8%...     

白头翁皂苷调控RA模型大鼠FLS SFRP2表达

目的: 研究中药白头翁主要活性成分白头翁皂苷(pulchinenoside,PULC)对类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis, RA)模型大鼠成纤维细胞样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)SFRP2表达的调控. 方法: 采用大鼠关节炎评分法和足爪肿胀评分法评价PULC对RA模型大鼠的治疗作用,MTT法检测PULC灌胃治疗后对FLS增殖抑制作用.RT-PCR,Western blotting检测PULC灌胃治疗对FLS SFRP2基因表达的调控作用,对Wnt通路关键基因β-catenin,Wnt通路下游效应基因C-myc的调控作用. 结果: RA模型大鼠FLS中SFRP2基因表达明显下调,经PULC灌胃治疗后,RA模型大鼠FLS中SFRP2表达上调,β-catenin和C-myc基因表达明显下调. 结论: PULC通过对Wnt通路的调控抑制RA模型大鼠滑膜异常增殖.     

白头翁皂苷对佐剂性关节炎大鼠FZD8表达的影响

研究中药白头翁有效成分白头翁皂苷(pulchinenoside,PULC)对佐剂性关节炎(adjuvant arthritis,AA)大鼠Frizzled(FZD)表达的影响。采用足跖注射完全弗氏佐剂制备AA大鼠,原代培养AA大鼠滑膜成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS),Real-time qPCR检测PULC灌胃治疗对AA大鼠FLS FZD8表达的影响,MTT,ELISA检测FZD8敲除对FLS增殖和IL-1,IL-6,IL-8表达的影响,Real-time qPCR检测miR-375在FZD8异常表达中的作用。检测发现经PULC灌胃治疗后,AA大鼠FLS中FZD8表达明显降低,FZD8敲除后FLS增殖明显减弱,IL-1,IL-6,IL-8表达明显减少,PULC灌胃治疗后miR-375表达明显升高,上调表达的miR-375能够抑制FZD8的表达。PULC可能通过上调miR-375表达抑制FZD8的表达。     

白头翁皂抑制佐剂性关节炎大鼠成纤维样滑膜细胞凋亡

目的：研究白头翁皂苷(pulchinenoside,PULC)对佐剂性关节炎(adjuvant arthritis,AA)大鼠成纤维样滑膜细 胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)凋亡的影响。方法：60只 SD大鼠被随机分为正常对照组、AA组、PULC低剂量组 (50 mg/kg)、PULC中剂量组(100 mg/kg)、PULC高剂量组(150 mg/kg)、布洛芬8 mg/kg阳性药物组,每组10只。原代 培养AA大鼠FLS,real time qPCR检测PULC灌胃治疗对AA大鼠FLS抗凋亡基因Bcl-2,促凋亡基因Bax和细胞凋亡因子 caspase-3表达的调控作用;MTT 检测PULC治疗对FLS增殖的影响;ELISA检测PULC对FLS的IL-6和IL-8表达的影响。结 果：与AA组比较,各治疗组FLS中抗凋亡基因Bcl-2表达明显降低(均P<0.05),促凋亡基因Bax和细胞凋亡因子caspase-3 表达显著升高(均P<0.05),AA大鼠FLS增殖活力明显降低(均P<0.05),IL-6和IL-8表达显著下降(均P<0.05)。结论： PULC可能通过促进FLS凋亡而抑制AA大鼠滑膜的异常增殖。     

桑黄多糖对类风湿性关节炎模型大鼠关节滑膜经典Wnt信号的影响

目的 研究中药桑黄中活性成分多糖(PPS)对类风湿性关节炎(RA)模型大鼠的治疗作用和对RA模型大鼠滑膜组织经典Wnt信号的影响。方法 将SD雄性大鼠随机分为3组:正常组、模型组和PPS组,每组10只。模型组和PPS组于每只大鼠右后足趾皮内注射0.1 mL完全弗氏佐剂致炎制作RA模型,正常组于相同部位注射等量PBS;PPS组在造模后第8 d给予50 mg/kg PPS灌胃治疗,每日1次,至第32 d,其余两组代之以等量生理盐水灌胃。造模后第16、20、24、28、32 d对各组大鼠进行关节炎评分和足爪肿胀评分,造模后第28 d采用real time qPCR检测各组大鼠滑膜中fibronectin表达,Wnt信号通路上游负调控基因SFRP1、2和通路关键基因β-catenin、C-myc、ccnd1的表达。结果 PPS灌胃治疗后,RA模型大鼠关节炎评分、足爪肿胀评分明显降低;与正常组相比,模型组大鼠滑膜中SFRP1、2表达明显降低,β-catenin、C-myc、ccnd1和fibronectin表达明显升高;但经PPS灌胃治疗后,PPS组滑膜中SFRP1、2表达明显升高,β-catenin、C-myc、ccnd1和fibronectin表达明显降低。结论 PPS对RA模型大鼠滑膜中Wnt信号具有抑制作用,对RA模型大鼠具有一定的治疗作用。