白藜芦醇下调肌球蛋白轻链激酶过表达抑制大鼠肝肿瘤增生

目的研究白藜芦醇(Res)通过影响肌球蛋白轻链激酶(MLCK)在肝脏中表达水平抑制原发性肝癌的增生。方法采用口服饮水中含0.9 mmol.L-1二乙基亚硝胺10周诱发原发性肝肿瘤;20周后,治疗组大鼠每天给予肌肉注射Res 50 mg.kg-16周;26周后,处死大鼠,计数肝表面癌结节数,称量和计算体重、肝重,肝/体重比,测定血清中甲胎蛋白的变化,观察大鼠肝脏的病理改变;用免疫组化和Westernblot法检测Res对MLCK的表达影响,用细胞凋亡试剂盒检测Res诱导肿瘤细胞的凋亡。结果 Res治疗组大鼠和模型组大鼠相比,体重增加,肝肿瘤结节数和肝/体重比和血清甲胎蛋白值减少或降低(P<0.05)。模型组大鼠肝组织MLCK的表达水平明显增加,而Res治疗可逆转MLCK的过表达水平,并诱导肿瘤细胞凋亡。结论 Res通过下调肝组织MLCK的表达水平诱导凋亡,抑制大鼠肝肿瘤细胞的增生。     

血必净组方药效物质基础与脓毒症多靶点作用效应研究

目的 探讨中药血必净组方作用的药效物质基础,并对组方作用效应在分子网络层面上进行分析。 方法 选择16个脓毒症相关靶点,参照生物学功能分为炎症、免疫、凝血三大类;构建该组方化学成分分子数据库, 探讨其与炎症、免疫、凝血类靶点间相互作用关系。 结果 丹参、红花与凝血、炎症类靶点间有作用效应分子较多,具有广泛的抗凝血、抗炎症效应。与脓毒症靶点有较好作用效应的前10个分子分别为组分色氨酸、丹参素、没食子酸、 丹参酚酸D、 原儿茶酸、丹酚酸A、丹参素 C、 香草酸、 迷迭香酸、 苯丙氨酸。血必净组方中既存在1个组分与多个靶点存在较强相互作用,如丹参素与13个靶点有作用, 同时也存在不同组分作用同一个靶点蛋白的现象,如8个分子与MD-2有作用。 结论 该组方与各类脓毒症靶点均有一定的潜在协同效应; 为寻找新型脓毒症类药物提供一定的参考和借鉴。。     

白花前胡丙素抗哮喘模型小鼠Th17/Treg失衡作用

目的 研究白花前胡丙素对哮喘模型小鼠体内Th17/Treg失衡的干预作用。方法 小鼠腹腔注射和雾化吸入卵清蛋白以建立气道炎性反应模型,并灌胃不同剂量的白花前胡丙素干预。模型结束后,动物肺功能仪分析气道高反应性;细胞计数器和Diff-Quick染色计数支气管灌洗液中白细胞总数及分类;酶联免疫吸附法检测血清或BALF中细胞因子和炎性介质的水平;苏木精-伊红(HE)染色法观察气道病理改变;流式细胞检测脾脏CD4+细胞数及分类;RT-PCR分析脾脏Foxp3 mRNA的表达。结果 与对照组比较,模型组呈现明显的气道炎性反应和气道高反应(P<0.05或P<0.01);IgE、IL-17水平增加(P<0.01),IL-10、TGF-β1水平降低(P<0.01);CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺细胞占总CD4⁺细胞的比例降低(P<0.01);Foxp3 mRNA的表达减少(P<0.01)。与模型组比较,白花前胡丙素组气道炎症显著减轻,中、高剂量组气道反应在氯乙酰胆碱剂量>10 mg·kg^-1均显著受到抑制(P<0.05或P<0.01);白花前胡丙素组IgE水平显著降低(P<0.01),IL-10、TGF-β1水平显著增加(P<0.05或P<0.01),中、高剂量组IL-17显著降低(P<0.01);白花前胡丙素组显著增加CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺细胞的比例(P<0.05或P<0.01),并增加Foxp3 mRNA的表达(P<0.05或P<0.01)。结论 白花前胡丙素具有抗哮喘鼠Th17/Treg失衡的作用。     

芍药苷抑制佐剂性关节炎大鼠mTOR信号通路的实验研究

目的 研究芍药苷（paeoniflorin,PF）对佐剂性关节炎（adjuvant arthritis,AA）大鼠关节滑膜成纤维样滑膜细胞（fibroblast-like synoviocytes,FLS）内mTOR信号的影响。 方法 将大鼠分为正常组、AA组、AA+PF 100 μg/mL组、AA+PF 200 μg/mL组、AA+PF 400 μg/mL组和AA+PBS组,除正常组外,其余各组大鼠均采用完全弗氏佐剂足跖注射法制备AA大鼠,AA+PF 100 μg/mL组、AA+PF 200 μg/mL组、AA+PF 400 μg/mL组大鼠造模后向尾静脉注射剂量为0.1 mL/200g体重PF,研究3个剂量PF对AA大鼠关节炎评分的影响。造模后第28天股动脉放血处死正常组和AA组大鼠,分离各组大鼠关节滑膜组织,培养FLS,将培养出的FLS分为正常组、AA组、AA+PF 1 μg/mL、AA+PF 2 μg/mL、AA+PF 4 μg/mL组,通过Real time qPCR检测PF加药对AA大鼠FLS内mTOR表达的影响,Western blot检测PF对AA大鼠FLS磷酸化mTOR（p-mTOR）蛋白表达的影响,ELISA检测PF对AA大鼠FLS细胞因子白细胞介素（IL）-1、IL-6表达的影响,real time qPCR检测PF加药对AA大鼠FLS内MMP3表达的影响,向FLS转染mTOR过表达载体48 h后再次检测IL-1、IL-6和MMP3的表达。 结果 PF能够降低AA大鼠关节炎评分。PF加药后48 h,与AA组FLS相比,AA大鼠FLS在PF为1、2、4 μg/mL时mTOR表达均降低。与AA组FLS相比,AA大鼠FLS在PF为2 μg/mL时p-mTOR蛋白表达量也降低。PF加药后48 h,与AA组FLS相比,AA大鼠FLS在PF为1、2、4 μg/mL时IL-1、IL-6、MMP3表达均降低。向AA+PF 2 μg/mL组FLS转染mTOR过表达载体48 h,与转染前相比,IL-1、IL-6、MMP3表达均升高。 结论 PF可以改善AA大鼠病理,其机制可能与AA大鼠FLS内mTOR信号的抑制有关。     

己酮可可碱对戊巴比妥钠中毒家兔呼吸抑制的影响

目的:研究己酮可可碱(PTX)是否具有对抗戊巴比妥钠中毒所致呼吸抑制的作用。方法:常规剂量(30 mg.kg-1)的戊巴比妥钠静脉麻醉后,加注15 mg.kg-1剂量的戊巴比妥钠制造呼吸抑制模型。在加注戊巴比妥钠10 m in后静脉注射不同剂量的PTX(15,30和60 mg.kg-1)和阳性对照药物尼可刹米(125 mg.kg-1),观察给药前后家兔呼吸流量及呼吸频率的变化。结果:30和60 mg.kg-1的PTX组家兔吸气峰流量和呼气谷流量均显著增加,呼吸频率短时间内显著增加;15 mg.kg-1PTX组的呼气谷流量显著增加。30 mg.kg-1的PTX组呼吸流量和频率在给药后的增加值较尼可刹米阳性对照组更大,持续时间也更长。结论:PTX具有呼吸兴奋作用,可用于对抗戊巴比妥钠中毒所致呼吸抑制;其呼吸兴奋作用强于尼可刹米。     

王枣子总黄酮对佐剂性关节炎大鼠的治疗作用及机制研究

目的 研究王枣子中总黄酮(TFIA)对佐剂性关节炎(AA)的治疗作用及机制。方法 采用注射完全弗氏佐剂制备AA模型大鼠后随机分为4组:AA组、AA+TFIA 50 mg/kg组、AA+TFIA 100 mg/kg组、AA+TFIA 150 mg/kg组,每组10只。另设空白对照组大鼠,不造模（n=10）。造模后4 d,TFIA各剂量组大鼠采用TFIA灌胃治疗,分别按上述3个剂量灌胃,每天1次,共24 d,空白对照组和AA组灌胃生理盐水。治疗第12天、16天、20天、24天采用大鼠关节炎评分法评价TFIA对AA大鼠的治疗作用。治疗第24天处死各组大鼠,分离大鼠滑膜组织,原代培养各组大鼠成纤维样滑膜细胞(FLS),ELISA检测各组FLS中白细胞介素（IL-1）表达,MTT检测各组FLS增殖活力,real time qPCR检测各组FLS miR-152和经典Wnt信号通路关键基因〔β-catenin、细胞周期蛋白基因（ccnd1）〕表达。向AA大鼠FLS转染miR-152 mimics和对照NC mimics,向TFIA 100 mg/kg剂量组大鼠FLS转染miR-152 inhibitors和对照NC inhibitors,36 h后检测miR-152、β-catenin、ccnd1、IL-1表达和FLS的增殖。结果 TFIA各剂量灌胃治疗均能抑制AA大鼠关节炎评分,抑制β-catenin、ccnd1、IL-1表达和FLS增殖活力（P<0.05),各剂量组间比较差异无统计学意义（P>0.05),与空白对照组相比,各剂量组均未恢复至正常水平（P<0.05)。与空白对照组相比,AA组FLS中miR-152表达降低（P<0.05),向AA组FLS转染miR-152 mimics后,与对照组相比,过表达的miR-152抑制β-catenin、ccnd1、IL-1表达,抑制FLS增殖（P<0.05)。向TFIA 100 mg/kg剂量组FLS转染miR-152 inhibitors,与对照组相比,抑制了miR-152的表达,促进了β-catenin、ccnd1、IL-1表达,促进了FLS增殖（P<0.05)。结论 TFIA对AA大鼠有一定治疗作用,此作用可能通过上调miR-152的表达,影响经典Wnt信号通路实现。     

滁菊总黄酮和白背三七总黄酮配伍对糖尿病血瘀证大鼠血糖及血液流变学的影响

目的观察滁菊总黄酮和白背三七总黄酮配伍对糖尿病血瘀证大鼠空腹血糖(FBG)及血液流变学指标的影响。方法采用饲喂高脂饲料复合链脲佐菌素(STZ)的方法复制2型糖尿病大鼠模型,再注射强的松龙和肾上腺素制备糖尿病血瘀证大鼠模型。观察滁菊总黄酮和白背三七总黄酮配伍对糖尿病血瘀证大鼠体质量、空腹血糖(FBG)、全血黏度和血浆黏度、血沉和红细胞压积、凝血参数及二磷酸腺苷(ADP)、花生四烯酸(AA)诱导的血小板聚集的影响。结果与空白对照组比较,模型对照组大鼠体质量显著减轻,全血黏度和血浆黏度、血沉和红细胞压积及血小板聚集率显著增加,活化部分凝血酶时间(APTT)、凝血酶时间(TT)、凝血酶原时间(PT)明显缩短,纤维蛋白原(FIB)水平明显升高。与模型对照组比较,滁菊总黄酮或白背三七总黄酮单独应用均能显著降低模型大鼠全血黏度和血浆黏度,降低血沉和红细胞压积,延长PT,降低FIB水平,白背三七总黄酮还具有降低FBG作用。与单独应用滁菊总黄酮或白背三七总黄酮比较,滁菊总黄酮和白背三七总黄酮配伍能显著抑制大鼠体质量减轻,降低血沉、红细胞压积及抑制ADP、AA诱导的血小板聚集作用明显增强,显著延长APTT、TT;另外,滁菊总黄酮和白背三七总黄酮配伍降低FBG作用明显强于白背三七总黄酮,降低FIB作用显著强于滁菊总黄酮。结论滁菊总黄酮和白背三七总黄酮配伍改善糖尿病血瘀证大鼠FBG和血液流变学异常作用显著增强。