禹州漏芦总黄酮抑制佐剂性关节炎大鼠Wnt信号

研究地道药材禹州漏芦主要活性成分总黄酮(FELT)对佐剂性关节炎(AA)大鼠Wnt信号的影响。采用大鼠关节炎评分法和MTT检测FELT对AA大鼠的治疗作用,Real-time qPCR检测FELT灌胃治疗对AA大鼠滑膜中Wnt信号关键基因β-catenin,C-myc和cyclin D1表达的影响,Real-time qPCR检测FELT灌胃治疗对AA大鼠滑膜中Wnt信号上游负调控基因SFRP 1,2,4,5表达的影响。结果发现FELT对AA大鼠关节炎评分和MTT值有显著的抑制作用,对Wnt信号关键基因β-catenin,C-myc和cyclin D1表达有显著的抑制作用,对SFRP 1,2,4表达有显著的上调作用。FELT灌胃治疗对AA大鼠有较好的治疗作用,这种治疗作用可能是通过对Wnt信号的抑制实现的。     

白藜芦醇下调肌球蛋白轻链激酶过表达抑制大鼠肝肿瘤增生

目的研究白藜芦醇(Res)通过影响肌球蛋白轻链激酶(MLCK)在肝脏中表达水平抑制原发性肝癌的增生。方法采用口服饮水中含0.9 mmol.L-1二乙基亚硝胺10周诱发原发性肝肿瘤;20周后,治疗组大鼠每天给予肌肉注射Res 50 mg.kg-16周;26周后,处死大鼠,计数肝表面癌结节数,称量和计算体重、肝重,肝/体重比,测定血清中甲胎蛋白的变化,观察大鼠肝脏的病理改变;用免疫组化和Westernblot法检测Res对MLCK的表达影响,用细胞凋亡试剂盒检测Res诱导肿瘤细胞的凋亡。结果 Res治疗组大鼠和模型组大鼠相比,体重增加,肝肿瘤结节数和肝/体重比和血清甲胎蛋白值减少或降低(P<0.05)。模型组大鼠肝组织MLCK的表达水平明显增加,而Res治疗可逆转MLCK的过表达水平,并诱导肿瘤细胞凋亡。结论 Res通过下调肝组织MLCK的表达水平诱导凋亡,抑制大鼠肝肿瘤细胞的增生。     

白头翁皂苷对佐剂性关节炎大鼠FZD8表达的影响

研究中药白头翁有效成分白头翁皂苷(pulchinenoside,PULC)对佐剂性关节炎(adjuvant arthritis,AA)大鼠Frizzled(FZD)表达的影响。采用足跖注射完全弗氏佐剂制备AA大鼠,原代培养AA大鼠滑膜成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS),Real-time qPCR检测PULC灌胃治疗对AA大鼠FLS FZD8表达的影响,MTT,ELISA检测FZD8敲除对FLS增殖和IL-1,IL-6,IL-8表达的影响,Real-time qPCR检测miR-375在FZD8异常表达中的作用。检测发现经PULC灌胃治疗后,AA大鼠FLS中FZD8表达明显降低,FZD8敲除后FLS增殖明显减弱,IL-1,IL-6,IL-8表达明显减少,PULC灌胃治疗后miR-375表达明显升高,上调表达的miR-375能够抑制FZD8的表达。PULC可能通过上调miR-375表达抑制FZD8的表达。     

白头翁皂抑制佐剂性关节炎大鼠成纤维样滑膜细胞凋亡

目的：研究白头翁皂苷(pulchinenoside,PULC)对佐剂性关节炎(adjuvant arthritis,AA)大鼠成纤维样滑膜细 胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)凋亡的影响。方法：60只 SD大鼠被随机分为正常对照组、AA组、PULC低剂量组 (50 mg/kg)、PULC中剂量组(100 mg/kg)、PULC高剂量组(150 mg/kg)、布洛芬8 mg/kg阳性药物组,每组10只。原代 培养AA大鼠FLS,real time qPCR检测PULC灌胃治疗对AA大鼠FLS抗凋亡基因Bcl-2,促凋亡基因Bax和细胞凋亡因子 caspase-3表达的调控作用;MTT 检测PULC治疗对FLS增殖的影响;ELISA检测PULC对FLS的IL-6和IL-8表达的影响。结 果：与AA组比较,各治疗组FLS中抗凋亡基因Bcl-2表达明显降低(均P<0.05),促凋亡基因Bax和细胞凋亡因子caspase-3 表达显著升高(均P<0.05),AA大鼠FLS增殖活力明显降低(均P<0.05),IL-6和IL-8表达显著下降(均P<0.05)。结论： PULC可能通过促进FLS凋亡而抑制AA大鼠滑膜的异常增殖。     

芍药苷抑制佐剂性关节炎大鼠mTOR信号通路的实验研究

目的 研究芍药苷（paeoniflorin,PF）对佐剂性关节炎（adjuvant arthritis,AA）大鼠关节滑膜成纤维样滑膜细胞（fibroblast-like synoviocytes,FLS）内mTOR信号的影响。 方法 将大鼠分为正常组、AA组、AA+PF 100 μg/mL组、AA+PF 200 μg/mL组、AA+PF 400 μg/mL组和AA+PBS组,除正常组外,其余各组大鼠均采用完全弗氏佐剂足跖注射法制备AA大鼠,AA+PF 100 μg/mL组、AA+PF 200 μg/mL组、AA+PF 400 μg/mL组大鼠造模后向尾静脉注射剂量为0.1 mL/200g体重PF,研究3个剂量PF对AA大鼠关节炎评分的影响。造模后第28天股动脉放血处死正常组和AA组大鼠,分离各组大鼠关节滑膜组织,培养FLS,将培养出的FLS分为正常组、AA组、AA+PF 1 μg/mL、AA+PF 2 μg/mL、AA+PF 4 μg/mL组,通过Real time qPCR检测PF加药对AA大鼠FLS内mTOR表达的影响,Western blot检测PF对AA大鼠FLS磷酸化mTOR（p-mTOR）蛋白表达的影响,ELISA检测PF对AA大鼠FLS细胞因子白细胞介素（IL）-1、IL-6表达的影响,real time qPCR检测PF加药对AA大鼠FLS内MMP3表达的影响,向FLS转染mTOR过表达载体48 h后再次检测IL-1、IL-6和MMP3的表达。 结果 PF能够降低AA大鼠关节炎评分。PF加药后48 h,与AA组FLS相比,AA大鼠FLS在PF为1、2、4 μg/mL时mTOR表达均降低。与AA组FLS相比,AA大鼠FLS在PF为2 μg/mL时p-mTOR蛋白表达量也降低。PF加药后48 h,与AA组FLS相比,AA大鼠FLS在PF为1、2、4 μg/mL时IL-1、IL-6、MMP3表达均降低。向AA+PF 2 μg/mL组FLS转染mTOR过表达载体48 h,与转染前相比,IL-1、IL-6、MMP3表达均升高。 结论 PF可以改善AA大鼠病理,其机制可能与AA大鼠FLS内mTOR信号的抑制有关。     

奥硝唑结肠定位肠溶片质量标准的研究

目的建立奥硝唑结肠定位肠溶片的质量控制标准。方法采用紫外分光光度法,测定奥硝唑结肠定位肠溶片中奥硝唑的含量,并采用转篮法,在不同溶出介质中测定奥硝唑结肠定位肠溶片的释放度。结果奥硝唑质量浓度在4.0～12.0μg/mL范围内,线性关系良好(r=0.9999),平均回收率为97.2%,RSD为0.603%;奥硝唑结肠定位肠溶片在pH1.0盐酸溶液(9→1000)2 h、pH6.8的磷酸盐缓冲溶液中4h均未溶出,而在pH7.6的磷酸盐缓冲溶液中开始释放,2h的累积释放度达90%以上。结论奥硝唑结肠定位肠溶片的含量和释放度测定方法简便、快速、准确,可作为其质量控制标准。     

桑黄多糖对类风湿性关节炎模型大鼠关节滑膜经典Wnt信号的影响

目的 研究中药桑黄中活性成分多糖(PPS)对类风湿性关节炎(RA)模型大鼠的治疗作用和对RA模型大鼠滑膜组织经典Wnt信号的影响。方法 将SD雄性大鼠随机分为3组:正常组、模型组和PPS组,每组10只。模型组和PPS组于每只大鼠右后足趾皮内注射0.1 mL完全弗氏佐剂致炎制作RA模型,正常组于相同部位注射等量PBS;PPS组在造模后第8 d给予50 mg/kg PPS灌胃治疗,每日1次,至第32 d,其余两组代之以等量生理盐水灌胃。造模后第16、20、24、28、32 d对各组大鼠进行关节炎评分和足爪肿胀评分,造模后第28 d采用real time qPCR检测各组大鼠滑膜中fibronectin表达,Wnt信号通路上游负调控基因SFRP1、2和通路关键基因β-catenin、C-myc、ccnd1的表达。结果 PPS灌胃治疗后,RA模型大鼠关节炎评分、足爪肿胀评分明显降低;与正常组相比,模型组大鼠滑膜中SFRP1、2表达明显降低,β-catenin、C-myc、ccnd1和fibronectin表达明显升高;但经PPS灌胃治疗后,PPS组滑膜中SFRP1、2表达明显升高,β-catenin、C-myc、ccnd1和fibronectin表达明显降低。结论 PPS对RA模型大鼠滑膜中Wnt信号具有抑制作用,对RA模型大鼠具有一定的治疗作用。     

白头翁皂苷影响RA模型大鼠FLS MeCP2表达

研究中药白头翁主要活性成分白头翁皂苷(PULC)对类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis, RA)模型大鼠MeCP2表达的调控作用。采用佐剂性关节炎大鼠为RA模型,原代培养RA模型大鼠滑膜成纤维细胞样滑膜细胞(FLS),Real time qPCR, Western blotting检测100 mg·kg^-1PULC灌胃治疗对RA模型大鼠FLS MeCP2表达的调控作用,MTT检测PULC治疗对FLS增殖的影响,MeCP2 siRNA干扰RA模型大鼠FLS MeCP2表达后SFRP2,β-catenin表达的变化。检测发现经100 mg·kg^-1PULC灌胃治疗后,RA模型大鼠FLS中MeCP2表达明显降低,SFRP2表达升高,RA模型大鼠FLS增殖活力降低,MeCP2 siRNA抑制RA模型大鼠FLS MeCP2表达后,SFRP2表达明显上调,β-catenin表达明显降低。PULC可能通过抑制MeCP2表达上调SFRP2表达,抑制RA模型大鼠滑膜Wnt通路活性,抑制RA模型大鼠滑膜异常增殖。     

王枣子总黄酮影响佐剂性关节炎大鼠病理的分子机制研究

课题组前期研究发现宿州地方特色药材王枣子中总黄酮(total flavonoids of Isodon amethystoides,TFIA)对佐剂性关节炎(adjuvant arthritis,AA)具有一定的治疗作用,并且这种治疗作用可能是通过对miR-152表达的上调实现的,该文进一步研究TFIA对AA大鼠病理机制影响的分子机制。采用完全弗氏佐剂制备AA大鼠,TFIA灌胃治疗,采用Real-time qPCR检测TFIA灌胃治疗对AA大鼠关节滑膜成纤维样滑膜细胞(fibroblast like synoviocytes,FLS)中miR-152、甲基化酶DNMT1及甲基化结合蛋白MeCP2构成的负调控环路的影响,对miR-152下游经典Wnt信号通路的影响,对AA大鼠病理基因fibronectin表达的影响。TFIA灌胃治疗显著抑制DNMT1表达,逆转了AA大鼠病理中存在的由miR-152,DNMT1和MeCP2构成的负调控环路,向治疗组FLS转染miR-152 inhibitors后,DNMT1表达显著恢复。TFIA灌胃治疗显著上调SFRP4表达,抑制经典Wnt信号通路关键基因β-catenin,C-myc和ccnd1表达,显著抑制AA病理基因fibronectin表达,向治疗组FLS转染miR-152 inhibitors后,逆转了TFIA灌胃治疗对SFRP4,β-catenin,C-myc,ccnd1和fibronectin表达的影响。TFIA可能通过miR-152表达的上调抑制DNMT1表达,上调SFRP4表达,抑制经典Wnt信号关节基因β-catenin,C-myc,ccnd1表达,抑制RA基因fibronectin表达。