HPLC测定水蛭仿生酶解有效部位中次黄嘌呤及尿苷

目的:测定水蛭仿生酶解有效部位中次黄嘌呤及尿苷的含量,为其质量控制提供科学依据。方法:采用SinoChrom ODS-BP液相色谱柱,以甲醇-水为流动相,测定波长254 nm。结果:次黄嘌呤在0.88～14.08 g·L-1呈良好线性关系(r=0.9997),平均加样回收率为99.69%,RSD 1.23%;尿苷在2.12～33.92 g·L-1呈良好线性关系(r=0.999 8),平均加样回收率为99.20%,RSD 1.17%。结论:该法操作简便,结果可靠,为水蛭仿生酶解有效部位的质量研究提供有效的方法。     

花椒水提取物HPLC指纹图谱研究

目的:建立花椒水提取物的HPLC指纹图谱分析方法,为其质量控制提供可靠的依据。方法:采用HPLC方法,色谱柱为COSMOSIL C18柱(4.6μm×250 mm,5μm),以乙腈-水为流动相进行梯度洗脱,检测波长270 nm,流速0.8 mL/min,柱温25℃,进样量10μL。运用中药色谱指纹图谱相似度评价系统(国家药典委员会2012 A版)进行相似度评价。结果:15批花椒水提取物指纹图谱中呈现6个共有峰,并指认出两个化学成分羟基-α-山椒素和羟基-β-山椒素,相似度为0.984～0.999,表明花椒水提取物指纹成分具有良好的一致性。结论:所建立的指纹图谱稳定可靠,可以为花椒药材指纹图谱的系统研究提供有益借鉴,同时有助于花椒药材的质量控制和评价。     

阿胶酶解液相对分子质量分布及其补血升白作用

目的:研究阿胶酶解液的相对分子质量分布及其补血、升白的作用。方法:采用TSK-GEL G2000SWXL色谱柱(7.8 mm×300 mm,5μm),流动相0.1 mol·L~(-1)NaCl+0.05%NaN_3+0.1 mol·L~(-1)磷酸盐缓冲液(pH 6.7),流速0.5 m L·min~(-1),检测波长280 nm,对阿胶原液、阿胶仿生酶解液、阿胶胰蛋白酶酶解液进行相对分子质量分布的测定;采用放血法致小鼠血虚模型及环磷酰胺致小鼠白细胞减少模型,观察阿胶酶解液的补血升白作用。结果:阿胶所含蛋白及多肽的相对分子质量6.64×10~4Da,胰蛋白酶酶解液及仿生酶解液的相对分子质量主要集中在3.7×10~3Da左右;阿胶仿生酶解液及胰蛋白酶酶解液可使血虚模型小鼠血红蛋白(Hb),红细胞计数(RBC)水平显著提高,使白细胞减少模型小鼠的白细胞计数(WBC),RBC和Hb水平显著提高。结论:阿胶经酶解后相对分子质量减小且具有显著的补血升白作用,胰蛋白酶酶解与仿生酶解效力大致相当。     

双酶复合酶解制备玉米肽对酒后肝脏乙醇脱氢酶活性影响

目的:为了研究双酶复合酶解玉米蛋白制备的玉米肽对小鼠酒后肝脏乙醇脱氢酶(Alcohol dehydrogenase,ADH)活力的影响。方法:通过单因素实验优选,采取正交试验优化复合酶的酶解工艺;酶解液采用超滤膜处理进行分子量分离,并采取冷冻干燥法将分离后的玉米肽溶液冷冻干燥处理;将冷冻干燥后的玉米肽配制为不同浓度的酶解液进行小鼠灌胃,采用瓦勒霍赫法计算小鼠肝脏中ADH的活性变化。结果:双酶复合酶解的最佳条件为:在料液比1∶10的情况下,先用菠萝蛋白酶在酶解温度50℃、酶底比3.0%、酶解p H 7.0条件下酶解2 h后,再以酶底比4.0%加入胰蛋白酶,控制温度为40℃、酶解p H为8.0的条件下酶解3 h;小鼠体内实验结果表明:玉米肽组的小鼠肝脏中ADH活性均高于对照组,且该激活作用与玉米肽的浓度呈正相关。结论:双酶复合酶解制备的玉米肽对小鼠酒后肝脏中ADH有激活作用,且较常用酶解方法对ADH活性影响显著。     

水蛭仿生酶解有效部位HPLC指纹图谱的研究

目的:建立水蛭仿生酶解有效部位HPLC指纹图谱的鉴定标准。方法:采用依利特SinoChrom ODS-BP色谱柱;0～25min,甲醇(1%～10%)～水梯度洗脱;柱温35℃;流速0.8 mL.min-1;检测波长254nm。结果:在相同色谱条件下获得6批水蛭仿生酶解有效部位的指纹色谱图,其中8个色谱峰分离较好,均达到指纹图谱的技术要求。结论:HPLC指纹图谱中8个共有峰的相对保留时间比值(RRT)和相对峰面积比值(RPA)可用于水蛭仿生酶解有效部位的质量控制。     

雄土鳖虫活性物质分离工艺考察

目的：采用不同方法对雄土鳖虫虫活性物质进行分离,得到活性组分。方法：比较SephadexG15、SephadexG25对样品的分离情况,需用最佳的物质对雄土鳖虫虫活性物质进行分离,然后再采用高效液相仪对分离后的组分进行鉴别,同时采用半制备液相柱对物质进行分离,获得活性单体。并对活性单体进行体外溶栓和抗凝验证。结果：实验得出SephadexG25对雄土鳖虫虫活性物质分离效果比较好。而后采用高效液相仪对分离后的活性组分进行分析,图谱出现五个含量较大的组分。并采用半制备液相柱进行分别收集后,验证得到第二个组分和第三个组分活性较强。结论：采用不同方法对雄土鳖虫虫活性物质进行系统分离后,得到纯度较高的活性组分,为后期研发和应用奠定基础。     

福林酚比色法测定水蛭仿生酶解小肽的含量

目的 建立水蛭仿生酶解小肽中总多肽含量的快速测定方法.方法 采用福林酚比色法对样品进行总肽的含量测定,并做加样回收率试验.结果 该方法线性关系、稳定性、精密度、重复性、加样回收率均良好.结论 确定福林酚比色法作为水蛭仿生酶解总肽的含量测定方法,该法简便、快速、准确可靠.     

DA-201C型大孔树脂对土鳖虫酶解液的除盐工艺考察

目的:考察DA-201C型大孔树脂对土鳖虫酶解液的脱盐纯化效果。方法:采用DA-201C型树脂对土鳖虫酶解液进行脱盐试验,通过单因素试验考察上样液p H和质量浓度、洗脱剂种类和用量对土鳖虫小肽的影响。通过folin-酚法测定活性成分小肽含量,检测波长650 nm,利用电导率测定除盐率。结果:最佳除盐工艺为上样液与树脂柱体积比1∶1,上样液质量浓度10 mg·L-1,上样液p H 7.0,吸附流速1.5 BV·h-1,加水3 BV洗除杂,加75%乙醇3 BV洗脱。除盐率99.1%,小肽回收率86.05%。结论:采用DA-201C型大孔树脂对土鳖虫酶解液进行纯化除盐处理的方法简便、易行。     

水蛭仿生酶解小肽的含量测定方法

目的:建立水蛭仿生酶解小肽的含量测定方法。方法:以氨基酸分析仪测定结果为参照,采用双缩脲法、2010年版《中国药典》二部附录收载的Lorry法、2010年版《中国药典》三部附录收载的Lorry法、茚三酮法等4种常用蛋白含量测定方法对3批样品进行总肽的含量测定。结果:2010年版《中国药典》三部收载的Lorry法测定的总肽含量不仅准确度高而且重复性,稳定性均好。结论:确定2010年版《中国药典》三部收载的Lorry法作为水蛭仿生酶解小肽的含量测定方法。     

水蛭提取方法及生理活性的研究

目的筛选较优的水蛭提取方法。方法采用原粉匀浆、水煎煮、水煎醇沉、胃蛋白酶酶解、胰蛋白酶酶解、仿生酶解等不同的方式提取水蛭,考察各提取方法的得膏率、对凝血酶原时间、纤溶活性、大鼠凝血时间及静脉血栓重量的影响。结果各项指标中以上六种工艺与空白对照组相比较均有显著性差异(P<0.05);各酶解工艺组与空白对照组相比有极显著性差异(P<0.01),其中仿生酶解液组与匀浆液组相比有极显著性差异(P<0.01),仿生酶解组明显优于其他酶解组,同时仿生酶解的得膏率最高。结论仿生酶解方法所得样品液的得膏率及生理活性作用较其他提取方法有极大提高,生物利用度更高,值得推广应用。