恒河猴大脑注射Aβ1-42 和Thiorphan对胆碱能神经元影响的研究

目的 观察颅内灌注Aβ1-42和Thiorphan给药后恒河猴基底、核大脑皮质等部位胆碱能神经元的改变.方法 将恒河猴4只,分为对照组(1只)与实验组(3只),对照组开颅后只注射0.9%氯化钠溶液,实验组开颅后先注射Thiorphan到猕猴的基底核和大脑皮质消耗已存在的Neprilysin,然后再缓慢的注射孵育好的纤丝状Aβ1-42,再植入含有Thiorphan的微渗透泵到基底核.免疫组织化学方法检测大脑切片胆碱乙酰转移酶(ChAT)免疫反应活性及阳性神经元数量及形态学改变.结果 给药后实验组恒河猴基底核、皮质等部位的胆碱能神经元数量减少和ChAT水平降低.结论 Aβ1-42和Thiorphan联合颅内给药后损害大脑基底核、皮质等部位的胆碱能神经元.     

淀粉样β蛋白_(1-42)和thiorphan对恒河猴海马结构的影响

目的观察淀粉样β蛋白1-42(Aβ1-42)和thiorphan对恒河猴大脑海马神经元淀粉样蛋白、乙酰胆碱转移酶(ChAT)以及胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达的影响,为注射thior-phan和Aβ1-42建立恒河猴AD模型提供数据准备。方法开颅后先注射thiorphan到猕猴的大脑皮质和基底核,消耗已存在的Neprilysin,然后再缓慢的注射孵育好的纤丝状Aβ1-42,后植入含有thiorphan的微渗透泵到基底核。HE染色观察海马结构病理改变。免疫组化的方法检测猴子海马Aβ1-42、乙酰胆碱转移酶(ChAT)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)阳性细胞的表达。结果HE染色显示海马CA1、CA2等区神经元萎缩,海马齿状回局部颗粒细胞丢失被胶质细胞取代;免疫组化结果显示模型组海马各区Aβ1-42、ChAT、GFAP阳性细胞吸光度(OD值)分别为0.59±0.05、0.21±0.04、0.19±0.04,与对照组比较P<0.01,差异具有统计学意义。结论Aβ1-42和thiorphan联合颅内给药导致恒河猴海马产生类似AD患者的病理改变。     

高频超声心动图评价心梗小鼠左室整体功能和节段性室壁运动异常

目的 通过建立小鼠心梗模型,探讨应用超高分辨率超声系统评价心梗小鼠心脏结构及心功能方面的应用价值.方法 25只雄性C57BL/6小鼠随机分为2组,即开胸结扎左冠状动脉前降支建立心梗模型组(n=15)和仅在相同结扎位置穿针,不结扎的方法建立假手术组(n=10).术前3 d和术后1周采用二维、M型、脉冲多普勒(PWD)、组织多普勒(TDI)和EKVTM超声技术对心梗小鼠心脏形态结构、室壁运动以及心功能进行评价.术后1周,取小鼠心脏进行HE染色并观察心肌组织结构.结果 二维超声与HE色染均显示,心梗模型组心肌有明显的梗死区;心梗模型组与假手术组比较,心室明显扩大,室壁明显变薄,心室收缩功能与舒张功能均显著下降(P<0.05);局部室壁运动受阻严重,心室发生重构.结论 采用2D超声心动图联合M型、PWD、TDI以及EKVTM超声心动图观察小鼠心梗模型能够更精准敏感地判断心肌梗死位置和梗死程度,为临床心肌梗死诊断、治疗和预后评估提供了参考价值.     

超声引导下小鼠心脏穿刺取血方法的可行性分析

目的探索超声引导下不开胸进行小鼠心脏精准穿刺取血的方法,以明确该方法所能采集的最大血量,以及是否可以用于长期重复取血。方法将雄性C57BL/6J小鼠(10~14周龄)分为终止性实验组(n=4,检测一次所能取到的最大血量)、反复采血0.5 ml组(n=10,每次取0.5 ml全血,1次/2 d,持续4周),反复采血0.75 ml组(n=10,每次取0.75 ml全血,1次/2 d,持续4周)。使用高频心脏超声显示左心室最大切面,引导胰岛素注射器针头经胸廓进入左心室进行采血。在反复采血0.5 ml组,使用超声检测第一次采血前、第一次采血后3 min、以及采血结束(共采血14次)休息1周后的心脏结构和心功能变化。结果成功施行超声引导下不开胸经心脏穿刺取血,用时(88±19)s/只,获取的最大血量为(1.43±0.11)ml/只。在反复采血0.5 ml组,反复采血4周后,小鼠的心率、左心室射血分数、左心室缩短分数、左心室舒张末期内径及左心室舒张末期后壁厚度与第1次采血前比较,差异无统计学意义(P均>0.05),无小鼠死亡。但在反复采血0.75 ml组,在观察终点前有2只小鼠死亡。结论在超声引导下行小鼠心脏穿刺取血,安全、微创、便捷、高效,可获取血量大,也可用于长期多次取血。     

蕨麻小型猪心梗模型的建立及梗死边缘区的基因表达谱分析

目的 建立应用蕨麻小型猪建立心肌梗死（心梗）的造模方法和具有临床意义的模型指标,探讨心梗边缘区的基因表达与代谢失偿的相关性。方法 选取13只雄性蕨麻小型猪,随机分组,其中假手术对照组和心梗手术组各5只,不经任何手术处理的正常对照组3只。麻醉后在左前冠状动脉行靠近心尖的三分一降支主干支进行永久性结扎形成心肌缺血、梗死。术后4周进行心功能超声检测、采血并进行血清生化分析;安乐死后取梗死边缘区进行病理和基因芯片分析。结果 超声图可见明显的心梗区域,数据显示心梗手术组的收缩末期左心室腔射血分数及短轴缩短率较假手术组分别降低32%和40%;血清中有谷草转氨酶、血清胆红素、乳酸脱氢酶等升高;病理切片显示梗死边缘区域的心肌纤维断裂、溶解,结缔组织增生,中性粒细胞和淋巴细胞增多;基因表达谱分析显示在梗死边缘区有2个调控心梗后重构和组织病理通路,3个炎症和免疫调节通路,8个脂肪、蛋白、糖能量代谢途径的基因表达有显著性改变。结论 成功建立了蕨麻小型猪的心梗模型,其冠状动脉分支少,便于手术且成模稳定性,模型表征可与临床指标相吻合;模型梗死边缘区的基因表达谱特征与临床上代谢失偿表现有相同变化趋势,为心梗机理的研究提供了实验动物模型及心梗边缘区的具有参考价值的特征性改变。     

熟地中水溶性多糖超声提取工艺的正交优化

目的探讨熟地的水溶性多糖超声提取的最佳工艺条件。方法采用正交设计优化,以多糖得率和多糖含量两项为指标,考察料液比、提取时间、提取温度、提取次数及其交互作用对多糖提取的影响。以葡萄糖做标准曲线,测定水溶性熟地多糖含量。结果熟地的水溶性多糖最佳提取工艺条件为:以蒸馏水为提取溶剂,提取时间60 min,料液比为1∶30,提取温度为60℃,提取3次。结论该法工艺简单,提取效率高,适合提取熟地中水溶性多糖。     

银杏叶提取物防治神经系统疾病的临床研究进展

银杏叶提取物(金纳多,EGb-761)由德国Schwabe制药公司生产,其主要有效成分为24％的银杏总黄酮和6％萜类,其中银杏叶酸＜5 ppm(1/10万单位)[1,2];现有片剂、滴剂和针剂3种剂型.国内外大量研究证明这些有效成分具有拮抗血小板活化因子、降血脂、抑制一氧化氮合酶、抑制谷氨酸毒性、保护线粒体、清除自由基、抑制细胞凋亡、抑制炎症反应、保护神经细胞等生理作用[3～8].近年来,金纳多作为世界植物药中最具影响力的产品之一,广泛用于临床上心血管疾病、神经系统疾病、泌尿系统疾病以及呼吸系统疾病的预防与辅助治疗;对脑梗死、痴呆、帕金森病、高血压、冠心病、糖尿病及并发症病变、慢性肾小球肾炎、眩晕等慢性病疗效显著.本文主要就其在神经系统疾病中的临床应用作一综述.     

恒河猴大脑注射Aβ1-42和Thiorphan的病理学观察

目的：前人的研究证实大脑内存在降解Aβ关键酶neprilysin（NEP）,注射NEP的抑制剂thiorphan能够在啮齿类诱发神经元淀粉样蛋白水平升高。但是没有注射thiorphan后对啮齿类大脑病理学观察的报道,更加没有恒河猴身上这方面的实验数据。本课题组拟用该法建立AD模型,就建立AD模型而言需要获得病理学方面的数据,因此,本实验观察Aβ1-42和thiorphan对恒河猴大脑皮质,基底核等部位的毒性影响,为注射thiorphan和Aβ建立恒河猴AD模型提供数据准备。方法：开颅后先注射thiorphan到猕猴的大脑皮质和基底核消耗已存在的Neprilysin,然后再缓慢的注射孵育好的纤丝状Aβ1-42,后植入含有thiorphan的微渗透泵到基底核。HE染色法观察大脑上述部位的形态学改变。结果：实验组以注射位点为中心呈阶梯状,越靠近注射位点神经元的消失就越严重。局部液化坏死,呈筛孔状改变,神经元丢失。可见萎缩神经细胞,大量小胶质细胞增生,噬神经元现象显著。结论：Aβ1-42和Thiorphan联合颅内给药后引起神经元丢失及小胶质细胞增生。     

恒河猴大脑注射Aβ1-42和Thiorphan诱发脑内广泛炎症反应

目的：观察颅内给Aβ1-42和thiorphan后是否可以在恒河猴大脑内诱发类似AD患者的炎症反应．探讨该法建立猕猴AD模型的可行性。方法：开颅后先注射thiorphan到猕猴的大脑皮质和基底核消耗已存在的Neprilysin,然后再缓慢的注射孵育好的纤丝状Aβ1-42,后植入含有thiorphan的微渗透泵到基底核。HE染色及免疫组化观察大脑的炎症反应情况。结果：HE染色显示侧脑室室管膜的单层上皮结构消失．大量小胶质细胞浸润,形成多细胞层,小胶质细胞增生聚集成灶。免疫组化结果显示实验组恒河猴海马、基底核及皮质等部位出现星形胶质细胞增生。结论：Aβ1-42和thiorphan联合颅内给药后可以在恒河猴大脑内诱发广泛的炎症反应。     

房颤动物模型及其在细胞和分子疗法研究中的应用进展

房颤是多原因引起的心律失常，可导致运输到各器官组织的血量不足，引发血栓、心衰或其他相关的复杂病情。房颤的动物模型分类根据其疾病的症状或诱发因素可分为电生理性模型、神经激素和血管生理失常模型和结构变异模型等。不断涌现的新技术如micro RNA、CRISPR-Cas9体系等为构建房颤疾病动物模型提供了新的技术手段并引导其在疗法研究上的应用新方向。目前房颤治疗方法的研究已经从传统的侵入式电生理方法和抗心律失常药物的使用转向细胞和分子疗法，并在房颤分子机理、靶向治疗和药物筛选等方面都有重要的新进展。本文综述了几类常见的房颤动物模型的构建和特性及其在细胞和分子疗法研究中的应用进展。