离心淘洗技术在分离大鼠肝非实质细胞亚群中的应用

目的采用离心淘洗技术分离纯化大鼠肝非实质细胞亚群.方法通过原粒肝脏酶灌注,准备肝非实质细胞悬液,离心淘洗,收集不同流速(20和40ml/min)的细胞群.结果经培养鉴定,流速21ml/min获得的为肝窦内皮细胞,40ml/min的为库普弗细胞,细胞纯度均大于95%.结论在本实验室,离心淘洗技术已能成功应用于肝脏细胞分离过程.     

重组肝再生增强因子、苦参素和丹参对肝脏星形细胞株IG12的作用

目的通过观察重组肝再生增强因子(rALR)、苦参素和丹参对大鼠肝脏星形细胞(HSC)株IG12增殖及细胞外基质合成的影响,以研究其抗肝纤维化的疗效.方法利用DNA重组、转导、诱导及纯化等一系列方法制备肝再生增强因子重组蛋白,利用胶原酶灌注及密度梯度离心法分离肝星形细胞,用有限稀释法建立大鼠HSC株IG12;于体外观察rALR、苦参素和丹参作用于IG12后IG12酸性磷酸酶活力及细胞外基质合成的改变. 结果rALR、苦参素和丹参均可显著抑制IG12的增殖,并选择性地抑制其细胞外基质的合成. 结论rALR、苦参素和丹参均具有抗肝纤维化的作用;IG12对于抗肝纤维化药物的筛选具有很大的价值.     

人肝细胞总基因组DNA与c—myc,c—N—ras基因甲基化的改变

分别用两种方法研究了人原发性肝细胞癌基因组及特定癌基因片段的ＤＮＡ甲基化情况，并进行对比研究，以＾３Ｈ－ＳＡＭ掺入法研究总基团ＤＮＡ甲基化水平，以限制性内切酶切，Ｓｏｕｔｈ－ｅｒｎ吸印法对ｃ－ｍｙｃ，ｃ－Ｎ－ｒａｓ两种癌基因状况进行分析，结果：发现人肝细胞癌区和癌旁区组织内ｃ－ｍｙｃ，ｃ－Ｎ－ｒａｓ癌基因分别有不同程度的低甲基化，且有癌区总基因ＤＮＡ甲基化水平明显下降，本文结果提示，两种方法检测均     

熊去氧胆酸在自身免疫性肝病中的应用

熊去氧胆酸(UDCA)是一亲水性二羟基胆酸(化学结构:3α,7β-二羟基-5β-胆烷酸),在人体中作为次级胆酸少量存在(约占整个胆酸池的1%～3%),是鹅去氧胆酸在结肠细菌的作用下形成的7β-异构体.UDCA是中国黑熊胆汁中主要的胆酸,中医很早就将其用于治疗肝病.近年来,UDCA在自身免疫性肝病中的应用越来越受到重视.目前,UDCA是美国FDA批准用于原发性胆汁性肝硬化治疗的唯一药物.UDCA主要通过下列三种机制发挥作用:(1)替换或清除内源性胆酸,亲水性胆酸UDCA可防止其他疏水性胆酸导致的肝细胞及胆管上皮细胞的坏死及凋亡,从而保护肝细胞及胆管上皮细胞;(2)刺激肝细胞及胆管上皮细胞分泌胆汁;(3)通过抑制线粒体膜通透性转变(MMPT)减少胆酸诱导的肝细胞凋亡(见表1).     

英国胃肠病学会2011年自身免疫性肝炎指南解读

一、背景介绍 自身免疫性肝炎(autoimmune hepatitis,AIH)是一种慢性炎症性肝病,若不采取治疗常可进展至肝硬化、肝衰竭甚至死亡.2011年英国胃肠病学会(British Society of Gastroenterology,BSG)进一步更新了AIH诊断和治疗指南.     

血清胆碱酯酶诊断脂肪肝价值的再探讨

应用比色法检测41例非酒精性脂肪肝患者血清胆碱酯酶(ChE)活力．并以18例肥胖症和／或糖尿病、高脂血症患者，25例正常人分别作为疾病对照组和正常对照组。结果显示．脂肪肝组血清ChE活力显著高于正常对照组，并且ChE活力与其肝／脾CT比值和脂肪肝程度密切相关；脂肪肝组中，伴明显肝功能损害者，其ChE活力显著低于肝功能损害轻度或肝功能正常的患者；疾病对照组血清ChE活力也增高．但与其它两组相比均无统计学差异。血清ChE检测虽有助于了解脂肪肝患者肝内脂肪浸润程度，但对脂肪肝的早期诊断价值有限。     

脂质体法转染人肿瘤坏死因子-α基因对裸鼠人肝癌移植瘤的抑制效应及其机制

背景：外源性肿瘤坏死因子（TNF）-α联合化疗药物对肿瘤的疗效较单独应用更佳,为肿瘤治疗提供了新的方向。目的：对裸鼠人肝癌移植瘤模型行脂质体介导的TNF-α基因瘤内转染,研究肝癌移植瘤的生长抑制情况及其机制。方法：经脂质体介导,以真核表达质粒pSVK3-TNF-α分别转染人肝癌细胞株SMMC-7721和裸鼠皮下SMMC-7721细胞移植瘤。测定SMMC-7721细胞的TNF-α浓度,甲基噻唑基四唑（MTT）法测定细胞杀伤率,流式细胞仪和原位末端标记（TUNEL）法检测细胞周期和凋亡情况。结果：TNF-α转基因治疗裸鼠人肝癌移植瘤结束第5d,移植瘤体积为（75.28±35.35）mm^3,显著低于对照组的（326.45±103.64）mm^3（P〈0.05）。TNF-α基因体外转染SMMC-7721细胞24、48、72h后,基因转染组每106个细胞的TNF-α表达量分别为（1680±187）pg、（1702±205）pg和（1650±164）pg,细胞杀伤率分别为（37.1±2.4）%、（79.4±4.3）%和（84.2±4.6）%。基因转染72h后,SMMC-7721细胞增殖指数为（30.5±3.2）%,显著低于对照组的（46.1±3.9）%（P〈0.05）;凋亡指数为（10.0±2.1）%,显著高于对照组的（2.7±0.4）%（P〈0.01）。结论：脂质体介导的TNF-α基因转染裸鼠人肝癌移植瘤可明显抑制肿瘤生长,其机制可能为影响肿瘤细胞生长周期以及诱导肿瘤细胞凋亡。     

Ⅰ型自身免疫性肝炎患者肝组织细胞凋亡的研究

目的　探讨细胞凋亡在Ⅰ型自身免疫性肝炎 (AIH)肝细胞损伤过程中的作用。方法　采用TdT介导的dUTP缺口末端标记技术 (TUNEL)和细胞凋亡促进因子Fas的免疫组化染色 ,检测 10例AIH肝组织和 3例正常肝组织中的细胞凋亡情况。结果　所有AIH患者的肝组织中均见到不同程度的TUNEL染色阳性和Fas抗体染色阳性肝细胞。正常对照肝组织中未见到TUNEL阳性肝细胞 ,Fas表达微弱或缺如。在AIH肝组织中 ,凋亡指数 (AI)与炎症坏死分级有显著相关性 (r =0 .4 5 ,P <0 .0 5 ) ,而与血清丙氨酸转氨酶水平以及组织学纤维化分期无显著相关。结论　Fas介导的细胞凋亡参与了AIH的肝细胞损伤过程。     

冬虫夏草多糖治疗慢性丙型肝炎患者的临床研究

目的研究冬虫夏草多糖（ＣＰ）治疗慢性丙型肝炎的疗效．方法慢性丙型肝炎患者２１例，口服ＣＰ１５ｍＬ，３次／ｄ，连服３ｍｏ，治疗前后检测肝功能、血清肝纤维化标志物外周血Ｔ细胞亚群及ＮＫ活性的变化．结果慢性丙型肝炎患者经ＣＰ治疗后，血清ＡＬＴ（Ｕ／Ｌ，６１±３５ｖｓ３５±１５）及ｒＧＴ（Ｕ／Ｌ，１６９±８５ｖｓ１１８±５２）较治疗前显著降低（Ｐ＜００５）．血清ＨＡ（μｇ／Ｌ，２９３±１０９ｖｓ２１４±９６）、ＰⅢＰ（μｇ／Ｌ，１４３±４８ｖｓ１１４±４２）及ＣⅣ（μｇ／Ｌ，２４５±９８ｖｓ１８８±８７）均较治疗前显著下降（Ｐ＜００１，＜００５及＜００５）；ＣＤ４（３６４％±６６％ｖｓ４１０％±５６％）、ＣＤ４／ＣＤ８（１１４±０４０ｖｓ１４３±０２２）、ＮＫ（１６７％±４６％ｖｓ１９７％±４２％）均较治疗前显著增加（Ｐ＜００１），而ＣＤ８（３２６％±４７％ｖｓ２８９％±３７％）则明显降低（Ｐ＜００５）；血清胆红素略减、清蛋白略增但差异均无显著性．结论冬虫夏草多糖可以增强慢性丙型肝炎患者细胞免疫功能，改善肝功能，并具有一定的抗纤维化作用     

脂肪肝患者临床特点初步探讨

２６５例Ｂ超和／或ＣＴ确诊的脂肪肝患者病例分析显示，上海市脂肪肝患者以肥胖症和／或糖尿病、高脂血症等引起的非酒精性脂肪肝为主（占７８１％），多数患者同时并存高血压、冠心病等疾病；酒精性脂肪肝只占７２％。脂肪肝的程度以轻度为主，临床表现多不明显，肝功能及血清纤维化指标（Ⅲ型前胶原肽和层粘蛋白）多无变化。进一步研究发现，临床表现、肝功能改变模式及血清纤维化指标的变化主要与脂肪肝的病因有关，而与其程度无关。