黄芪皂苷III抑制小鼠动脉平滑肌细胞TNFR1介导信号转导

目的 研究黄芪皂苷III（astragaloside III,ASⅢ）对小鼠动脉平滑肌细胞（arterial smooth muscle cells,ASMCs）中I型TNF-α受体（TNF-α receptor type 1,TNFR1）介导信号通路的抑制作用,为中药黄芪的抗炎作用和抗动脉粥样硬化作用提供证据。方法 以不同浓度ASⅢ预处理ASMCs,之后以TNF-α诱导细胞。采用WST-1实验检测细胞活力变化;采用实时定量RT-PCR技术检测细胞间黏附分子-1（intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1）、凝集素样氧化低密度脂蛋白受体（lectin-like oxidized LDL receptor-1,Lox-1）和ATP结合盒转运蛋白A1（ATP-binding cassette transporter A1,ABCA1）mRNA表达变化;采用Western Blot方法检测ICAM-1、Lox-1和ABCA1蛋白表达变化,并检测ASⅢ对转录因子NF-κB（nuclear factor-κB）上游抑制蛋白IκBα（NF-κB inhibitor-α）、以及对信号分子AKT、细胞外受体活化激酶（extracellular receptor-activated kinases,ERKs）和p38磷酸化的影响。结果 （1）ASⅢ在30 nM~10 μM范围内不抑制细胞活力;（2）ASⅢ剂量依赖性抑制TNF-α对ICAM-1、Lox-1和ABCA1 mRNA表达的调控;（3）ASⅢ剂量依赖性抑制TNF-α对ICAM-1、Lox-1和ABCA1 蛋白表达的调控;（4）ASⅢ显著抑制TNFR1介导的IκBα磷酸化和降解;（5）ASⅢ显著抑制TNFR1介导的AKT、ERKs和p38磷酸化。结论 ASⅢ可全面抑制ASMCs中TNFR1介导信号通路激活,参与其抗炎和抗动脉粥样硬化作用。     

抗菌钛合金Ti24Nb4Zr8Sn-8Cu抗菌性能及生物相容性初步评价

研究含铜抗菌钛合金Ti2448(Ti24Nb4Zr8Sn)的生物相容性。电弧炉熔炼的Ti24Nb4Zr8Sn和Ti24Nb4Zr8Sn-8Cu合金材料,分别与金黄色葡萄球菌、MC3T3-E1细胞共培养,通过荧光染色、显微观察、电镜观察、流式检测,来研究合金材料抗菌性能和生物相容性。Ti24Nb4Zr8Sn合金材料对金黄色葡萄球菌无抗菌作用,而Ti24Nb4Zr8Sn-8Cu合金材料对细菌有较强的抑制作用;Ti24Nb4Zr8Sn和Ti24Nb4Zr8Sn-8Cu合金材料均对MC3T3-E1细胞没有影响。Ti24Nb4Zr8Sn-8Cu合金材料拥有良好的抗菌性,具有良好的生物相容性,适合用于骨科内植入材料。     

Semaphorin 3A过表达对H_2O_2诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的影响

目的:探讨semaphorin 3A(Sema 3A)对过氧化氢(H_2O_2)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤的影响。方法:构建Sema 3A过表达载体,以脂质体转染法转染HUVECs,过表达效果以qPCR和Western blot法验证;待测细胞以200μmol/L H_2O_2处理4 h;qPCR法检测炎性细胞因子水平;乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)水平以相应比色法检测;细胞活力以MTT法检测;流式细胞术检测细胞凋亡,凋亡相关蛋白cleaved caspase-3及Bcl-2水平以Western blot法检测。结果:Sema 3A过表达能显著增加H_2O_2诱导的HUVECs凋亡、炎性细胞因子分泌以及LDH和MDA含量,同时显著抑制SOD活性和细胞活力;Sema 3A对未经H_2O_2处理的HUVECs没有损伤效应,即其对HUVECs的损伤具有H_2O_2依赖性。结论:Sema 3A能显著加重H_2O_2诱导的HUVECs损伤,在氧化应激所致的内皮细胞损伤过程中发挥促进作用。     

溶瘤性腺病毒携带canstatin基因对肺癌A549细胞小鼠移植瘤的抑制作用

目的:研究溶瘤性腺病毒介导的canstatin基因表达对A549细胞的抑制作用。方法:将构建的溶瘤性腺病毒载体CRAd-canstatin感染A549细胞。Western blot方法鉴定canstatin基因在A549细胞中的表达;结晶紫染色法和MTT法检测重组病毒体外对细胞的生长抑制作用;将腺病毒注射入荷瘤的裸鼠体内,通过测量肿瘤体积,形态学观察等方法验证CRAd-canstatin对肿瘤的抑制效果。结果:体外结果显示腺病毒介导的canstatin基因在A549细胞中有效表达。体内结果显示相比对照组而言,肿瘤体积明显缩小。结论:初步的实验表明溶瘤性腺病毒介导的CRAd-canstatin基因有望用于肺癌细胞的治疗。     

白芍总苷对小鼠成骨细胞增殖、分化和矿化的影响

目的研究白芍总苷(TGP)对小鼠成骨细胞(MC3T3-E1)增殖、分化和矿化的影响。方法采用MTT法和流式细胞术检测TGP对MC3T3-E1细胞增殖和细胞周期的影响;诱导MC3T3-E1成骨分化,通过检测碱性磷酸酶(ALP)活性和RT-PCR法检测人类相关转录因子2(Runx2)基因表达,分析TGP对成骨分化的影响,采用茜素红染色分析TGP对矿化的影响。结果 3、10μg/L TGP均能促进MC3T3-E1细胞增殖(P0.05,P0.01);10μg/L TGP可使G1期细胞的比例减少,S+G2期细胞的比例增加(P0.05);与对照组比较,TGP处理组细胞的ALP活性和Runx2表达水平显著升高(P0.05,P0.01),且矿化结节量明显增加。结论 TGP具有促进MC3T3-E1细胞增殖和分化成熟的能力,为炎性骨质疏松的治疗策略提供了实验依据和治疗思路。     

抗柯萨奇病毒A16型单克隆抗体的制备和应用

目的 制备抗CA16病毒的特异性单克隆抗体,评价单克隆抗体在ELISA和细胞免疫化学染色中的作用,并利用单抗建立CA16快速检测胶体金免疫层析法并对其进行初步评价方法 CA16病毒接种RD细胞大量培养,氯化铯密度梯度超速离心纯化病毒颗粒,透射电镜鉴定纯化产物。福尔马林灭活病毒颗粒后免疫Balb/c小鼠,利用细胞融合技术制备稳定分泌抗CA16单抗的杂交瘤细胞株。ELISA和免疫荧光试验分别对单抗特性进行分析。根据单抗反应特性,分析单抗在细胞ELISA、细胞免疫组化中的应用,并利用特异性抗CA16单抗建立CA16胶体金免疫层析快速检测法结果 氯化铯密度梯度离心纯化病毒颗粒电镜观察显示,病毒颗粒为二十面体立体对称球形结构,大小均匀。经免疫小鼠,获得1株稳定分泌抗CA16单克隆抗体的杂交瘤细胞株(mAb CA16-19),该单抗为IgG2a亚型,细胞免疫荧光表明,单抗与RD宿主细胞内的CA16病毒颗粒结合。细胞ELISA显示,随着病毒滴度增加吸光度也增加。细胞免疫化学染色分析表明,单抗可与CA16病毒感染的RD结合,而不与EV71感染RD细胞和正常RD细胞反应。因此,该单抗可用于细胞ELISA和细胞免疫化学染色。同时,依据前期制备的抗CA16单抗(mAb CA16-10),并结合此次制备的mAb CA16-19共同建立胶体金免疫层析试纸条,该试纸条不与EV71和柯萨奇病毒B型交叉反应,最低检测限为6.25×10^6.25TCID₅₀/0.1 mL结论 利用氯化铯密度梯度离心纯化出CA16病毒颗粒,筛选出1株特异性抗CA16单抗,此株单抗可用于细胞免疫荧光试验、细胞ELISA和细胞免疫化学染色试验。并以单抗为原材料建立了CA16快速检测胶体金免疫层析法,为CA16病毒感染的快速诊断提供帮助。     

柯萨奇病毒A16型快速纯化和中和性单克隆抗体制备与鉴定

目的建立柯萨奇病毒A16型快速纯化方法,制备中和性单抗,并对单抗进行分析。方法收获CA16培养上清液,超滤浓缩,氯化铯密度梯度离心纯化病毒颗粒,透射电镜鉴定纯化产物。福尔马林灭活CA16,免疫BALB/c小鼠,制备分泌抗CA16特异性单抗的杂交瘤细胞系,用ELISA和中和试验分别对单抗特性进行分析。结果初步建立CA16病毒氯化铯密度梯度纯化方法,电镜显示,病毒颗粒为二十面体立体对称球形结构,病毒直径在20~30nm间,大小均匀。获得2株分泌抗CA16单抗的杂交瘤细胞系,2株单抗均为IgG2a亚型,Anti/CA16/5效价为103,Anti/CA16/10效价为104。2株抗体的中和效价分别为1∶256和1∶1 024。结论初步建立氯化铯密度梯度纯化CA16的方法,筛选出2株具有中和活性的抗CA16单抗,为CA16病毒的基础研究提供重要的原材料。     

沉默FOXM1拮抗肝细胞生长因子对胃癌细胞SGC7901增殖、迁移和侵袭的诱导作用

目的:探索转录因子FOXM1在肝细胞生长因子(HGF)诱导胃癌细胞增殖、迁移和侵袭过程中的作用.方法:体外培养胃癌细胞SGC7901,根据不同处理将细胞分组:空白对照组、20 ng/ml HGF组、40 ng/ml HGF组、60 ng/ml HGF组、siRNA-scramble+HGF组、siRNA-FOXM1+HGF组.采用MTT法检测各组SGC7901细胞的增殖,Transwell法检测各组细胞的迁移和侵袭情况,qRT-PCR和Western blot法分别检测各组细胞中FOXM1 mRNA和蛋白水平.结果:与空白对照组相比,不同浓度HGF均能够促进胃癌细胞SGC7901增殖、迁移和侵袭,同时上调FOXM1的表达水平,并且呈浓度依赖性关系.沉默HOXM1表达能够明显抑制HGF对SGC7901细胞的增殖、迁移和侵袭的诱导作用.结论:HGF对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的诱导作用可能与上调FOXM1表达有关,沉默FOXM1表达能够抑制HGF的作用.     

活血胶囊激活 PI3K/Akt/Nrf2/HO-1通路对血管内皮细胞发挥抗氧化损伤作用

目的研究活血胶囊(HXJN)对血管内皮细胞的抗氧化损伤作用分子机制。方法 采用WST-1法检测细胞活力；qRT-PCR和Western blot技术检测血红素加氧酶-1（HO-1）的表达；检测 HXJN对Akt和转录因子Nrf2的激活作用，并分析其对HO-1表达的影响。结果 HXJN可显著减轻 H2O2 对细胞活力的抑制作用。HXJN可上调HO-1表达水平。HXJN可诱导Akt和Nrf2磷酸化，并促进Nrf2核转位；LY294002、perifosine和ML385均抑制 HXJN对HO-1的上调，LY294002可抑制Nrf2核转位。结论 HXJN促进HO-1表达而发挥抗氧化损伤作用，Akt和Nrf2参与调控HO-1表达。