树突状细胞的移行与递呈抗原作用的实验研究

借助异硫氰酸荧光素（ＦＩＴＣ）的可显示性，将其作为抗原免疫ＣＢＡ小鼠，以观察树突状细胞的移行及其抗原递呈方式与功能。结果表明，经ＦＩＴＣ两次刺激后（皮内），移行至局部淋巴结的树突状细胞数明显高于对照组（Ｐ＜０．０５）。ＦＡＣＳ的分析结果亦表明，局部淋巴结内的树突状细胞荧光阳性率显著增高，且荧光显微镜观察呈现不均一的膜荧光，提示该细胞的抗原递呈方式为单纯膜结合型，而无内在化过程。ＣｏｎＡ刺激的淋巴细胞增殖反应及ＦＩＴＣ特异性刺激的细胞增殖反应则分别体现了树突状细胞抗原递呈作用的后效应。     

大鼠树突状细胞单克隆抗体防治同种胰岛细胞移植排斥反应…

用链脲霉素诱导大鼠糖尿病模型，成模后７天内连续静脉注射大鼠树突状细胞单克隆抗体（ＷＺＤｓ）或隔日腹腔注射新鲜分离的大鼠树突状细胞（ＤＣ）３×１５＾５－－２×１０＾６个，或用ＷＺＤｓ在补体存在的条件下体外预处理处理待移植的胰岛细胞，观察ＤＣ对移植胰岛细胞存活时间的影响和ＷＺＤｓ抗排斥反应的作用，通过检测受体大鼠血糖、尿糖及血清胰岛素水平，显示直接注射ＷＺＤｓ和接受经ＷＺＤｓ预处理胰岛细胞的受体，排斥     

树突状细胞抗原提呈活化T细胞的机制研究

树突状细胞(Dendritic cells DCs)是一种重要的抗原提呈细胞,关于DCs抗原提呈如何活化T细胞,目前尚不十分清楚。本文应用小鼠脾脏分离到的树突状细胞和腹腔巨噬细胞(MΦ),在LPS的刺激下,观察了DCs和MΦ产生IL-1、TNF的能力,结果表明MΦ可以产生IL-1、TNF,而DCs可产生低浓度IL-1,但不产生TNF;DCs和T细胞共育的上清,观察到在低浓度的IL-2的共同作用下可以明显地促进CTLL-2细胞的增殖活性,提出了DCs对T细胞的活化可能是DCs产生低浓度IL-1触发T细胞,DC-T细胞聚集可以产生白细胞介素2增强因子(IL-2EF),增强T细胞对IL-2的反应性进而活化T细胞,据此提出了DCs活化T细胞的可能机制。     

雷公藤多甙对小鼠Ⅳ型超敏反应影响的研究

采用动物实验，选择Ⅳ型超敏反应局部渗出性改变、Ｔ细胞增殖能力的强弱和病理形态学观察等指标，研究了雷公藤多甙（ＴｒｉｐｔｅｒｙｇｉｕｍＷｉｌｆｏｒｄｉｉＰｏｌｙｇｌｙｃｏ－Ｓｏｄｉｕｍ，ＴＷＰ）对ＯＴ诱导的Ⅳ型超敏反应小鼠模型的影响。结果表明，经ＴＷＰ灌胃９～１５天的小鼠，发敏的局部渗出性改变明显降低，与未给药的模型组相比，Ｐ＜０．０５，病理形态学观察结果亦与之相符。ＴＷＰ的这种作用可能与已报道的其多种免疫抑制效应有关。     

小鼠FoxP3基因腺相关病毒的制备与鉴定

目的:构建携带小鼠FoxP3基因的重组腺相关病毒,并检测其在NIH3T3细胞的表达情况。方法:将FoxP3通过内部核糖体进入位点(IRES)与报告基因增强型绿色荧光蛋白连接,构建同时含有目的基因和报告基因的重组腺相关病毒(rAAV)表达质粒,通过磷酸钙沉淀法共转染HEK293细胞,收获并通过肝素亲和层析法纯化病毒,并对病毒纯度和滴度进行鉴定。利用携带FoxP3基因的重组病毒体外感染小鼠NIH3T3细胞,体外观察感染效率和目的基因转录情况。结果:包装成功的rAAV/FoxP3经纯化后获得了高纯度的rAAV/FoxP3,实时定量PCR检测rAAV/FoxP3的病毒滴度达到5.0×1012vg/mL,体外感染NIH3T3细胞,流式细胞术测定感染效率可达92.88%,实时PCR测定细胞内存在高水平FoxP3mRNA。结论:获得携带FoxP3-IRES-EGFP的rAAV,并可有效感染NIH3T3细胞,为进一步研究FoxP3的生物学功能提供了有效工具。     

重组FoxP3腺相关病毒转染小鼠CD4+CD25 -T细胞的实验研究

目的：研究FoxP3（Forkhead Box P3）基因在小鼠T细胞的表达情况，以及重组FoxP3腺相关病毒（adeno-associatedvirus，AAV）对小鼠CD4^＋CD25^-T细胞功能的影响。方法：采用实时定量PCR检测CD4^＋CD25^-T细胞和CD4^＋CD25^-T细胞FoxP3 mRNA表达情况，利用基因重组技术构建FoxP3腺相关病毒载体，体外转染CD4^＋CD25^-T细胞，通过细胞增殖试验观察转染CD4^＋CD25^-T细胞功能变化。结果：CD4^＋CD25^-T细胞较CD4^＋CD25^-T相比高水平表达FoxP3基因mRNA，重组FoxP3腺相关病毒转染后的CD4^＋CD25^-T细胞对CD3单抗的刺激呈低反应性，并且能抑制新鲜分离CD4^＋CD25^-T细胞的增殖。结论：FoxP3基因转染的CD4^＋CD25^-T细胞在体外具有抑制T细胞活化增殖的功能。     

大鼠DCs单抗和雷公藤多甙对大鼠同种异体心肺联合移植排斥反应的影响

采用改良的大鼠同种异体心肺联合移植手术，研究了大鼠树突状细胞（ＤＣｓ）单克隆抗体单独和联合雷公藤多甙片对移植排斥反应的影响，并与生理盐水对照组、雷公藤多甙片（ＴⅡ）组进行比较。结果表明：大鼠ＤＣｓ单抗单独和联合ＴⅡ两治疗组间无明显区别，但两组大鼠移植心脏存活时间明显长于生理盐水组和ＴⅡ组（Ｐ＜００１）；而且病理切片显示以慢性排斥反应改变为主。而生理盐水对照组和ＴⅡ组皆表现为急性排斥反应。提示ＤＣ单抗在治疗移植排斥反应中有实用价值。     

小鼠树突状细胞过继转移抗原作用的实验研究

用绵羊红细胞（SRBC）免疫小鼠,取其脾脏分离树突状细胞（dendriticcellsDCs）将这些带有抗原信息的DCs经尾静脉注射给小鼠．以观察DCs过继转移抗原的作用。结果表明,各试验组小鼠抗体形成细胞（AFC）及血清中SRBC处价明显高于对照组,P＜0．01,再次免疫DC组抗SRBC放价高于初次免疫DC组P＜0．05,提示：DCs具有过继转移抗原的作用。     

银屑病患者外周血单个核细胞白介素20及其受体mRNA水平检测

目的：观察银屑病患者外周血单个核细胞（PBMC）中白细胞介素20（IL-20）及其受体（IL-20R）mRNA水平，探讨其与银屑病发生发展的关系。方法：提取外周血总RNA，应用半定量逆转录-聚合酶链反应，以β-actin为内参照，检测IL-20和IL-20R mRNA。结果：银屑病患者PBMC分泌的IL-20水平低于对照组，而IL-20R水平高于对照组。结论：推测IL-20参与银屑病的发病机制，可能是PBMC分泌的IL-20一部分与PBMC自身的受体结合，调节PB-MC自身的免疫功能；另一部分定向转运到皮肤，与其中的受体结合，从而激活Stat信号通路，进一步激活一些与机体炎症反应密切相关的基因，参与银屑病患者机体免疫调节。     

人T-bet基因的克隆及序列分析

目的：克隆人T-bet基因全长编码区的cDNA，并进行豁定和测序分析，为从转录水平研究Th1／Th2平衡及其与免疫相关性疾病发生发展的关系奠定基础。方法：采用RT-PCR方法，从人外周血淋巴细胞获得T-bet基因的cDNA；连接至pGEM-Teasy载体，导入大肠杆菌DH5α并选择阳性克隆；应用M13F／R通用引物进行双向反应测序，以作序列鉴定。结果：扩增得到的T-bet基因cDNA全长1670 bp，包括编码区1607 bp，编码530个氨摹酸残基，与Genbank中发表的序列完全一致。结论：获得了人T-bet基网的克隆，为进一步研究其生物学功能构建了基础平台，为寻找多种免疫性疾病的有效治疗提供新思路。