dl-扁桃酸热敏凝胶对家兔阴道黏膜刺激性的组织病理学研究

目的运用组织病理学方法评价dl-扁桃酸热敏凝胶(MA Gel)对家兔阴道黏膜的刺激性。方法 40只雌性日本大耳兔随机分为基质对照组、MA Gel低剂量组(10 mg/ml)、中剂量组(20 mg/ml)、高剂量组(40 mg/ml)和市售壬苯醇醚凝胶(40 mg/ml, N-9 Gel)组。阴道给予凝胶2.5 ml,1次/d,连续给药10 d。末次给药72 h后处死家兔,取阴道组织,观察阴道黏膜组织病理学改变;运用原位缺口末端标记法(TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling, TUNEL)检测阴道黏膜上皮细胞凋亡;运用免疫组织化学法检测阴道黏膜内增殖细胞核抗原(Proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的阳性表达。结果家兔阴道黏膜组织苏木素-伊红(HE)染色显示,MA Gel的黏膜刺激性呈剂量依赖性,高剂量组可造成黏膜上皮轻度损伤、固有层毛细血管充血和炎症细胞浸润(病理学评分4.35±1.04),与N-9 Gel组7.88±1.67相比,差异有统计学意义(P0.05)。TUNEL检测结果显示,MA Gel 3个剂量组均出现不同数量的凋亡细胞阳性表达,分布于上皮层和黏膜固有层。与基质对照组相比,MA Gel各组的阴道黏膜细胞凋亡细胞数目差异无统计学意义(P0.05)。MA Gel 3个剂量组黏膜上皮固有层均出现PCNA阳性表达,且表达量与扁桃酸浓度呈正相关,提示MA Gel可诱发炎症细胞轻度的活化增殖,但较N-9 Gel组为轻。结论 MA Gel对家兔阴道黏膜有轻度的刺激性,但刺激性远低于市售N-9 Gel。MA Gel安全性较好,作为阴道外用避孕新药具有潜在开发前景。     

链状酰胺类化合物B07的体外杀精效果及其对精子质膜的影响

目的:研究一种链状酰胺类化合物(B07)的体外杀精作用及其对精子质膜的影响。方法:上游收集高活力人类精子分别与0μg/ml(对照组),5~640μg/ml B07作用30 min,随后用计算机辅助精液分析仪分析记录精子的活率及运动参数;用160μg/ml B07与精子作用,记录5 min、30 min、60 min和120 min时精子活动率;处理后的精子一部分经SYBR-14/PI双染后用荧光显微镜观察,另一部分通过电子显微镜来观察质膜的变化情况;并以壬苯醇醚(N9)作为阳性对照。结果:随着B07浓度的升高,精子活率和活力呈下降趋势,最低有效浓度(MEC)为640μg/ml;荧光显微镜下经B07处理的精子呈橙色,而N9处理的精子呈红色;电子显微镜显示B07组精子头部肿胀起泡,尾部针孔样损伤,N9组精子呈溶解性改变。结论:B07具有体外杀精作用,且该作用有时间和浓度依赖性,且其对精子质膜的影响小于N9。     

流式细胞术在外用避孕药精子功能评估中的应用

流式细胞术(flow cytometry,FCM)是一种单细胞快速定量分析技术,为精子功能研究提供了一种高通量、多参数的检测手段。FCM在外用避孕药对精子功能评估中的应用,主要包括精子质膜完整性、DNA完整性、顶体反应、线粒体功能、氧化应激和精子凋亡等方面。表明FCM是精子功能研究的有效工具,有助于阐明新型外用避孕药的药效和作用机制。     

老龄兔骨髓间充质干细胞移植治疗心肌梗死最佳剂量的研究

目的 探讨老龄兔骨髓间充质干细胞移植治疗心肌梗死的最佳剂量,为细胞移植治疗心肌细胞坏死性相关疾病提供前期的实验依据.方法 选择≥36个月龄的新西兰大耳白兔30只,建立心肌梗死模型,将造模成功兔随机分为4组(空白对照组、4×104低剂量组、4×105中剂量组、4×106高剂量组),每组5只;在心肌梗死1天后,用微量注射器抽取200 μl密度为2×105/ml、2×106/ml、2×107/ml标记后的细胞悬液(剂量分别为4×104、4×105、4×106个),分别多点注射在心肌梗死区,空白对照组注射等量生理盐水,8 w后进行心功能参数、心脏房室瓣血流率及血液动力学指标检测.观察心肌梗死后相同时间,不同细胞剂量的移植对心功能的影响.结果 与对照组比较,4×104低剂量组细胞移植治疗后心功能虽有提高,但差异无显著性(P＞0.05);4×105中剂量组心功能参数、心脏房室瓣血流率及血液动力学指标高于对照组(P＜0.05);4×106高剂量组心功能参数、心脏房室瓣血流率及血液动力学指标明显高于对照组(P＜0.01);4×106高剂量组心功能参数、心脏房室瓣血流率及血液动力学指标高于4×105中剂量组(P＜0.05).结论 相同心肌梗死时间、不同移植细胞剂量时,以移植4×106个高剂量组心功能改善更明显.     

uPA-/-小鼠肝纤维化模型中的a-SMA、MMP13表达分析与模型评价

目的 采用uPA基因缺失(uPA-/-)小鼠构建肝纤维化动物模型,经a-平滑肌肌动蛋白(a-SMA)与金属基质蛋白酶-13(MMP13)的表达分析,评价其可行性.方法 选取成年雄性BL/6J野生型和uPA-/-基因缺失型小鼠,分为4组:对照组(Con-WT,Con-uPA-/-)和模型组(Mod-WT,Mod-uPA-/-),每组20只.模型组小鼠腹腔注射10％ CCl4,对照组小鼠腹腔注射橄榄油,每周2次,连续6周,诱导小鼠肝纤维化.用Real-time PCR方法检测小鼠肝脏组织中a-SMA和MMP13的mRNA表达,Western blot及免疫组化分析a-SMA和MMP13的蛋白表达.结果 Real-time PCR结果显示,uPA-/-小鼠的肝脏中a-SMA、MMP 13的mRNA表达量显著高于WT小鼠；Western blot结果显示,a-SMA蛋白和MMP13蛋白在对照组小鼠肝脏中几乎不表达,在Mod-WT中有少量表达,在Mod-uPA-/-中表达明显增多；免疫组化结果显示,Mod-uPA-/-的a-SMA和MMP13表达高于Mod-WT.结论 a-SMA的mRNA和蛋白表达在uPA-/-小鼠中均明显升高,uPA基因的缺失促进了肝星型细胞向肌成纤维细胞的转化,从而加速了细胞外基质蛋白在肝脏中的沉积；MMP13蛋白表达在肝纤维化模型小鼠中均有明显升高.uPA基因缺失(uPA-/-)小鼠是建立肝纤维化模型的易感品系.     

壬苯醇醚-9诱导小型猪阴道黏膜免疫炎症反应模型的建立

目的 探索建立广西巴马小型猪阴道黏膜免疫炎症反应模型的方法.方法 将6只雌性小型猪随机分为基质对照组和壬苯醇醚-9(N-9)模型组(40 mg/mL)(每组3只).肌肉注射苯甲酸雌二醇12d后,各组阴道给药5 mL/d,连续7d.造模后取阴道黏膜组织进行病理检查,并根据上皮溃疡、坏死、细胞浸润、出血、充血、水肿等指标进行病理评分;造模后24 h与72 h,采集阴道灌流液(CVL),采用流式细胞术对CVL沉淀细胞中的中性粒细胞比例和CD45+细胞百分率进行分析;免疫组织化学法(IHC)检测阴道黏膜组织中CD45+细胞的表达及分布.结果 组织病理学观察显示,N-9模型组阴道黏膜上皮损伤明显,出现不同程度的溃疡、坏死、炎性浸润、出血、水肿等.病理评分结果显示,N-9模型组病理总分值(18.0士3.2)与基质对照组(3.3±0.2)相比明显升高(P＜0.01).N-9模型组CVL的中性粒细胞比例为41.70％±1.63％ (24 h)和51.17％±3.81％(72 h),CD45+细胞比例为58.5％±4.73％(24 h)和88.0％±3.57 ％(72 h),与基质对照组相比均显著增高(P＜0.01).N-9模型组阴道黏膜CD45+细胞表达明显增多,累积光密度值为33.95士6.69,显著高于基质对照组(23.42±3.30)(P＜0.05).结论 阴道连续给予N-9凝胶7d可以诱发小型猪阴道黏膜明显的炎性反应,符合阴道黏膜免疫炎症反应模型的特征.     

采用优化家兔阴道刺激模型评价乙酸阴道热敏凝胶剂的阴道免疫炎症毒性研究

目的 采用优化家兔阴道刺激模型评价乙酸阴道热敏凝胶剂(Acetic acid vaginal thermosensitive in situ gel,Acid-TISG)对家兔阴道黏膜的免疫炎症毒性。方法 将24只雌性家兔随机分为空白凝胶组、Acid-TISG组(12.11mg.ml_-1)、阳性壬苯醇醚(Nonoxynol-9,N-9)凝胶对照组(5.6 mg.ml_-1),阴道给予3 ml凝胶,每天一次,连续10天,给药前和给药后24h收集家兔阴道灌洗液(Cervicovaginal Lavage,CVL),检测CVL中白介素6(Interleukin-6,IL-6)和肿瘤坏死因子α(Tumor Necrosis Factor α,TNF-α)的含量。家兔处死后取阴道组织做病理学检查,HE染色观察家兔阴道黏膜组织损伤并进行评分。运用免疫组化技术检测阴道黏膜内白细胞共同抗原-CD45RB和核增殖抗原(Proliferating Cell Nuclear Antigen, PCNA)的表达。结果 与空白凝胶组相比,Acid-TISG组黏膜上皮完整,无明显炎症浸润、充血和水肿(P＞0.05),N-9凝胶组黏膜上皮出现脱落,固有层炎性细胞明显增多(P＜0.05);空白凝胶组和Acid-TISG组阴道黏膜无明显CD45RB阳性表达,N-9凝胶组阴道粘膜固有层出现较多的CD45RB阳性表达细胞。与空白凝胶组相比,Acid-TISG组的阴道黏膜PCNA表达增多,但无显著性差异(P＞0.05),N-9凝胶组的阴道黏膜PCNA阳性表达细胞明显增多(P＜0.05)。与给药前相比,给药后24h时CVL中IL-6和TNF-α含量在空白凝胶组和Acid-TISG组无明显改变(P＞0.05),N-9凝胶组明显升高(P＜0.05)。结论Acid-TISG对家兔阴道黏膜无明显免疫炎症毒性,优化的家兔阴道刺激模型可用来评价生殖道外用药物对阴道黏膜的免疫炎症毒性。     

dl-扁桃酸热敏凝胶对兔阴道黏膜炎症反应的研究北大核心CSCD

目的探讨dl-扁桃酸热敏凝胶(dl-mandelic acid thermosensitive in situ gel,MA Gel)对兔阴道黏膜的刺激性及炎症反应情况。方法将40只雌兔随机分为基质对照组、MA Gel低剂量组(10 g/L)、MA Gel中剂量组(20 g/L)、MA Gel高剂量组(40 g/L)和市售壬苯醇醚凝胶(nonoxynol 9,N-9 Gel)组,每组8只,阴道给药2.5 mL,qd,连续10 d。在给药前、给药第4日以及末次给药后24 h与72 h,收集基质对照组、MA Gel高剂量组和N-9 Gel组阴道灌流(cervicovaginal lavage,CVL)液,流式细胞仪计数CVL中炎性细胞和中性粒细胞数目,并对CD45^+细胞进行分析。取阴道组织做组织病理切片,免疫组织化学检测阴道黏膜内CD45的表达。结果 MA Gel高剂量组CVL液中炎性细胞、中性粒细胞以及CD45^+细胞数目显著低于N-9 Gel组(P=0.036)。MA Gel各剂量组与基质对照组相比,阴道黏膜CD45^+表达无显著上升,主要表达在黏膜上皮层。结论 dl-扁桃酸热敏凝胶仅引起家兔阴道黏膜较轻微的炎症反应,未诱导局部炎性细胞的明显活化,安全性较好,具有研发成为阴道外用避孕药的前景。     

枯草芽胞杆菌1.88株抗真菌物质的分离纯化与性质研究

[目的]分离纯化枯草芽胞杆菌1.88株抗真菌物质并研究其抗真菌活性.[方法](1)使用生理生化法和16SrDNA法鉴定杆菌1.88株.(2)通过将1.88菌株的发酵液离心,酸沉淀,乙醇抽提以及反相高效液相层析分离纯化真菌成份并对其做理化性质分析.(3)测定抗真菌活性物质对5种常见皮肤真菌的最小抑菌浓度(MIC),并与氟康唑,两性霉素B做比较.[结果](1)杆菌1.88株为枯草芽胞杆菌.(2)分离纯化得到2种抗真菌物质,暂命名为G-1和G-2,为多肽类物质.(3)G-1抗真菌的作用远高于氟康唑,与两性霉素B类似.[结论]此抗真菌物质具有很强的抗真菌的作用,在医药以及农业领域可能会有效好的潜在应用价值     

dl-扁桃酸对人精子与阴道黏膜上皮VK2/E6E7细胞的毒性研究

目的探讨dl-扁桃酸对人阴道黏膜上皮细胞(VK2/E6E7)与精子的细胞毒性损伤。方法不同浓度的dl-扁桃酸处理高活力精子20 s,计算机辅助精子分析仪测定精子活率,扫描电子显微镜检测精子受损情况。1.25,2.5 g·L?1 dl-扁桃酸和4.0 g·L?1壬苯醇醚(nonoxynol-9,N-9)处理VK2/E6E7细胞,MTT法检测细胞活性,ELISA试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)释放率,并用流式细胞法检测细胞凋亡率。结果 dl-扁桃酸抑制精子活率的半数有效浓度约为1.25 g·L?1,最低有效浓度约为2.5 g·L?1。扫描电镜结果显示,dl-扁桃酸处理组精子表面结构与对照组形态相似,无明显受损特征,N-9组精子严重受损。MTT实验结果表明,1.25 g·L?1 dl-扁桃酸组细胞存活率>95%,2.5 g·L?1 dl-扁桃酸组细胞存活率约为50%。1.25,2.5 g·L?1 dl-扁桃酸处理组LDH释放量只有微量检出,远低于N-9组。流式细胞检测表明,1.25,2.5 g·L?1 dl-扁桃酸处理组中活细胞和晚期凋亡比例与对照组相近,早期凋亡细胞略少于对照组,死亡细胞稍多于对照组,N-9组大量细胞死亡。结论 dl-扁桃酸对VK2/E6E7细胞毒性远低于N-9,其对精子的抑制作用不是通过破坏精子质膜与鞭毛来实现。