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1.
目的 研究针对HBV X基因区设计的小干扰RNA(siRNA)表达载体质粒pGenesil-siHBV X 对HepG2.2.15细胞HBV表达和复制的抑制效果及特异性。方法 针对HBV X区设计siRNA表达载体质粒pGenesil- siHBV X。分别用培养液(空白对照)、脂质体Metafectene、pGenesil 空载体、pGenesil-siHK(阴性对照)、pGenesil-siAFP(特异性对照)、pGenesil-siHBV X处理或转染HepG2.2.15细胞各3次。于每次转染后24 h,取各组细胞培养上清液,用时间分辨荧光免疫测定技术检测上清液中HBsAg和HBeAg含量,用化学发光法检测AFP含量,用PCR荧光定量技术检测HBV-DNA复制水平。
结果 pGenesil-siHBV X转染能抑制HepG2.2.15细胞对HBV标志物的表达,且抑制作用随转染次数增加而增强。第3次转染后,pGenesil-siHBV X组细胞上清液中 HBsAg、 HBeAg和HBV-DNA检测结果分别为(6.26 ± 1.07)ng/ml 、(0.13 ± 0.05)Ncu/ml和(3.01 ± 0.40)×107拷贝/ml,与空白对照组的(22.50 ± 1.39)ng/ml、(1.12 ± 0.11)Ncu/ml和(12.33 ± 1.28)×107拷贝/ml比较,差异有统计学意义(t值分别为12.80、12.21、9.71,P < 0.05);pGenesil-siHBV X 转染不影响细胞对AFP的表达(t = 0.18,P = 0.86)。结论 pGenesil-siHBV X可以有效和特异地抑制HepG 2.2. 15细胞HBV-DNA的复制及HBsAg和HBeAg表达。 相似文献
2.
目的:探讨雷帕霉素抑制LPS诱导小鼠RAW264.7细胞表达和释放HMGB1的作用机制。方法:传代培养的小鼠RAW264.7细胞分5组接种于6孔板,即仅加培养液的对照组;加250 μg/L LPS的诱导组; 诱导组基础上加100 μg/L雷帕霉素的干预组;干预组基础上加rTNF-α 50 μg/L的抗干预组;及抗干预组基础上加抗鼠TNF-α 100 μg/L的抗体中和组。培养4 h后,ELISA法检测对照组、诱导组和干预组上清液中TNF-α水平;培养24 h后,RT-PCR和Western blotting法分别检测各组细胞内HMGB1 mRNA表达水平和上清液中HMGB1含量。结果:培养4 h,干预组上清液中TNF-α水平与对照组比无显著差异(P>0.05),但明显低于诱导组(P<0.05);培养24 h, 与对照组比,诱导组细胞内HMGB1 mRNA表达明显增强(P<0.05),上清液中HMGB1含量也明显增多(P<0.05);干预组明显减少了HMGB1 mRNA表达及上清液中HMGB1含量(P<0.05); 与干预组比,抗干预组细胞HMGB1 mRNA表达及上清液中HMGB1含量明显增加(P<0.05);抗体中和组细胞HMGB1 mRNA表达水平及上清液中HMGB1含量和干预组无显著差异(P>0.05)。 结论:雷帕霉素抑制LPS诱导RAW264.7细胞表达和释放HMGB1,可能部分地与其抑制TNF-α的表达有关。 相似文献
3.
循证医学是临床医学研究的新方法 总被引:1,自引:0,他引:1
循证医学(evidence-based medicine,EBM)是遵循证据的临床医学.其核心思想是医务人员应该认真地、明智地、深思熟虑地运用在临床医学研究中得到的最新、最有力的科学研究证据来诊治病人[1].EBM是研究证据、医生的临床实践和病人价值三者之间的结合.循证医学要求临床医生应在仔细采集病史和体格检查的基础上,根据临床实践需要解决问题,进行有效的文献检索,并对其进行系统评价,确定最有行力、最适宜的证据;通过严谨的判断,将最适宜的诊断方法、最精确的预后估计和最安全有效的疗法服务于每一个具体的病人. 相似文献
4.
目的了解山西省乙型肝炎病毒(HBV)基因型流行病学分布特征,并分析不同基因型与HBV感染谱的相关性。方法用S基因巢式聚合酶链反应-限制片段长度多态性(PCR-RFLP)的基因型分型方法,对44例携带者、70例慢性乙型肝炎、34例慢性重症乙型肝炎、29例肝硬化患者感染的HBV进行分型,并分析了不同感染谱中HBV基因型的分布。结果①177例感染者HBV基因型C型130例(73.5%)和B型43例(24.3%),偶见D型1例(0.6%),未定型3例(1.7%)。②各种乙型肝炎患者的HBV基因型以C型为主,HBV携带者的基因型主要为B基因型。结论山西省乙型肝炎病毒感染者以C型和B型为优势基因型,与我国北方地区HBV基因型分布相似,但亦有少数其他基因型存在。HBV基因型C可能是乙型肝炎病情进展的相关因素。 相似文献
5.
目的:探索慢性乙型肝炎(CHB)患者并发非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的临床特征及分析NAFLD发生的相关危险因素.方法:选取感染科及内分泌科住院或门诊就诊的CHB患者或高血糖或高血脂患者为研究对象,并选择健康体检非CHB的人群为同期对照.所有患者(653例)行血清生化学检查、乙肝五项测定、HBV-DNA定量测定并获取其身高和体重,对其NAFLD发病率及病毒载量指标等临床资料进行统计学分析.结果:CHB组NAFLD发病率(26.9%)与非CHB组(26.6%)差异无统计学意义(P>0.05);肥胖合并高血糖、肥胖合并高血脂、高血糖合并高血脂、肥胖合并高血糖高血脂、CHB均是NAFLD发生的危险因素,且前4位因素与第5位因素均有交互作用;HBV-DNA、HBsAg、HBeAg在CHB合并NAFLD组均低于单纯CHB组,差异有统计学意义(P<0.05).结论:NAFLD的发生与CHB、肥胖、高血糖和高血脂密切相关,CHB患者合并NAFLD时其病毒复制水平以及HBsAg、HBeAg降低,其可能机制有待进一步探究. 相似文献
6.
目的:探讨不同剂量大黄素对肝纤维化大鼠肺损伤的保护作用。方法:采用复合致病因素法(CCl 4、乙醇、高脂、高胆固醇和低胆碱)建立肝纤维化大鼠模型并以不同剂量(20 mg/kg和40 mg/kg)大黄素进行治疗。4周后,测定肝指数,检测血清内毒素、同型半胱氨酸、反映肝功能的指标白蛋白、天门冬氨酸氨基转移酶、丙氨酸氨基转移酶、总胆红素、总胆固醇、甘油三酯和肝纤维化指标透明质酸、层黏连蛋白、Ⅳ型胶原蛋白、Ⅲ型前胶原蛋白的含量,观察肝组织病理学改变; 测定肺指数,光镜下行肺组织病理学观察,检测肺组织匀浆肿瘤坏死因子α(TNF-α)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)和过氧亚硝基阴离子(ONOO-)含量。结果:大鼠肝纤维化模型复制成功,模型组大鼠肺指数明显增加,肺脏发生水肿、炎症反应,肺匀浆TNF-α、MDA、NO和ONOO-含量明显增加;大黄素治疗组肺指数较模型组下降,肺组织病理性损伤明显减轻,肺组织TNF-α、MDA、NO和ONOO-含量明显降低。结论:大黄素对肝纤维化大鼠的肺损伤具有一定的保护作用。 相似文献
7.
目的:克隆小鼠HMGB1基因,构建原核表达载体,在大肠杆菌中诱导表达并分离纯化获得His-HMGB1的融合蛋白.方法:脂多糖刺激后的RAW264.7细胞,提取总RNA,经RT-PCR扩增出含HMGB1的目的片段,克隆于pMD-19T载体,再亚克隆至含有pelB引导肽及His-标签肽的高效表达载体pET-26b( ),转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导后行SDS-PAGE鉴定目标蛋白表达,用镍鳌合琼脂糖凝胶亲和层析法分离纯化含His-标签肽的目的蛋白.结果:经PCR扩增出大小为648 bp的HMGB1基因片段,成功构建目标蛋白的融合表达载体,经诱导表达及分离纯化,获得了约30 kD的融合蛋白.结论:构建HMGB1的融合表达载体,获得分离纯化融合蛋白His-HMGB1,为进一步研究其生物学功能奠定了基础. 相似文献
8.
目的观察日本血吸虫DNA疫苗pcDNA3/SjSDISP免疫小鼠后可否引起自身免疫性疾病和免疫耐受。方法采用ELISA的方法检测pcDNA3/sjsDISP免疫小鼠后,SjSDISP特异性抗体的效价及自身免疫性抗体(抗核抗体和抗dsDNA抗体)的产生情况,同时通过体重变化及主要脏器病理切片观察质粒DNA的毒性作用。结果以ELISA的方法检测小鼠产生的抗s7SDISP特异性抗体的效价为1:400,未检出自身免疫性抗体。实验组与对照组小鼠体重变化无明显差异,组织病理学观察未见异常变化。结论DNA疫苗pcDNA3/SSDISP对小鼠无诱导自身免疫性疾病和免疫耐受的迹象。 相似文献
9.
目的 :归纳和探讨临床诊断SARS病例的临床特征、实验室检查及X线胸片变化规律。方法 :对 5 6例临床诊断为SARS病例的临床表现、血常规、血氧饱和度和X线胸片等资料进行收集整理、归纳总结和分析。结果 :本组病例全部以高热和全身不适、乏力和肌肉酸痛为主诉症状 ;2 0例有明确一次性接触史者的平均潜伏期为 ( 4 .70± 0 .92 )d(X±SD ) ;大部分病例有干咳 ( 71 .4% )、气短 ( 4 8.2 % ) ,少数病例在病程中有短暂的胸痛、头痛和鼻塞 ,但无 1例发生腹泻。血常规检查 ,1 0 0 %的患者有白细胞减少 ( <4× 1 0 9/L)和淋巴细胞计数减少 ( <1 .5× 1 0 9/L) ,5 3.6%的病例出现血氧饱和度降低 ( <90 % )。X线胸片异常改变中双侧云雾状阴影占 62 .5 % ,单侧病变占 32 .1 % ,单一肺叶病变的仅占 5 .4%。结论 :本组SARS病人的主要临床症状与WHO提示的有关症状基本符合 ,但未见腹泻和血小板下降者 ;X线胸片单侧病变也占相当比例 ( 32 .1 + 5 .4) %。胸片病变局限可能与及时治疗干预有关。 相似文献
10.
雷帕霉素抑制JAK/STAT通路对急性肝损伤大鼠肝组织HMGB1表达的影响 总被引:2,自引:0,他引:2
目的:探讨雷帕霉素抑制JAK/STAT通路对急性肝损伤大鼠肝组织HMGB1表达的影响.方法:采用D-Galn/LPS复制急性肝损伤(ALI)模型.大鼠随机分为正常对照组(n=30)、ALI组(n=30)、STAT抑制剂雷帕霉素(RPM)处理组(n=30).用Western blot方法测定肝组织HMGB41蛋白,全自动生化分析仪测定肝功能指标.结果:与正常对照组HMGB1表达水平(1.00±0.02)相比,ALI组24.72 h HMGB1表达显著升高(3.12±0.06,3.9±0.08,2.83±0.04,t值分别为16.01,3.86,10.46,均P<0.01),血清丙氨酸转氨酶(ALT)6和24 h有两个峰值,且24 h峰值高于6 h.与ALI组相比,RPM预处理组24-72h HMGB1蛋白表达均显著抑制(1.67±0.05 vs 3.12±0.06:1.93±0.06 vs 3.9±0.08:1.47±0.04 vs 2.83±0.04:t值分别为20.11,41.90,26.02,均P<0.01),ALT在24,48,72 h也均有不同程度下降(P<0.01).ALT与HMGB1呈正相关(r=0.741,P<0.01).结论:抑制JAK/STAT可明显下调肝组织中HMGB1蛋白表达,并有助于减轻D-Galn/LPS所致的急性肝损伤. 相似文献