人SREBP-1c启动子报告基因的构建和功能验证

目的 构建人SREBP-1c启动子的荧光素酶报告基因载体并进行功能的初步验证。 方法 提取人血基因组DNA,PCR扩增SREBP-1c的启动子,构建SREBP-1c启动子双荧光素酶的报告基因载体;用双荧光素酶活性检测其功能。Western blotting检测FoxO1对SREBP-1c蛋白的抑制作用。 结果 成功构建了pGL3-Basic-SREBP-1c-promoter的报告基因载体,共转染FoxO1明显抑制了人SREBP-1c启动子的活性,同时过表达FoxO1抑制了SREBP-1c的蛋白表达。 结论 FoxO1通过抑制SREBP-1c的转录来抑制SREBP-1c的表达。     

PGC-1α协同ERRα在人肝癌细胞中调节小鼠SHP转录

目的 检测PGC-1α和ERRα在人肝癌细胞（HepG2）中对小鼠SHP转录的影响,鉴定ERRα调节SHP启动子利用的顺式元件。 方法 在HepG2细胞和人胚肾细胞（293A）中瞬时转染ERRα和/或PGC-1α,双荧光酶报告基因实验检测小鼠SHP启动子的活性。构建5′删切和顺式元件突变的启动子报告基因,结合HepG2细胞中的双荧光酶报告基因实验,检测ERRα作用的结合位点。 结果 在HepG2和293A细胞中,共表达ERRα和PGC-1α能促进SHP转录。分析SHP启动子序列发现5个潜在的ERRα结合位点。通过删切启动子5′端,筛选出其中3个元件参与SHP的转录调节。进一步突变以上3个结合元件,鉴定到其中2个位点参与PGC-1α协同ERRα调节SHP转录的过程,另一个位点参与了SHP基本水平的转录。 结论 在HepG2 细胞中,除核受体FXR、ERRγ之外,发现,ERRα可以作为调节SHP基因转录的新途径,但需共激活因子PGC-1α同时存在。     

过氧化物酶体增生物激活受体γ共激活因子1,能量代谢的共激活因子

转录共激活因子过氧化物酶体增生物激活受体γ共激活因子1(PGC1)家族是一类特异性存在于高能量代谢组织器官的因子,它们通过对转录因子的辅助作用促进下游基因的表达,从而调节糖异生、脂肪酸氧化、脂蛋白的合成与分泌、线粒体生物合成及氧化磷酸化解耦联等.PGC1蛋白序列无DNA结合结构域,通过与转录因子的相互作用完成对基因的表达调控.机体对PGC1的活性调节可以通过转录水平或蛋白磷酸化、乙酰化/去乙酰化、甲基化、泛素化等多种共价化学修饰完成.PGC1的表达失调与糖尿病、肥胖、高血脂症、动脉硬化、脑神经元坏死性疾病等有密切关系.     

全反式维甲酸对胶质瘤细胞细胞间缝隙连接通讯的作用

目的：探讨全反式维甲酸（ATRA）对胶质瘤细胞细胞间缝隙连接通讯（GJIC）的调节作用。方法：分别用1,10,100umol/L三种浓度的ATRA作用于培养的大鼠C6胶质瘤细胞,24,48及72h后,通过细胞间染料传输实验检测缝隙连接功能,以半定量RT－PCR检测ATRA作用下C6胶质瘤细胞Cx43基因的转录。结果：对照组C6胶质瘤细胞GJIC功能很低,经1,10,100umol/L三种浓度的ATRA作用后,增强了GJIC。这种增强作用在ATRA作用24h后即十分明显,在1,10umol/L两种浓度下,ATRA对GJIC的增强作用可以持续到ATRA作用72h后,而经100umol/L的ATRA作用48h后,GJIC功能的增强则不如低浓度ATRA作用下明显,结论：对于C6胶质瘤细胞,ATRA是有效的GJIC功能增强剂,此种增强作用可能是通过转录后途径实现的。     

黄河三角洲农村居民伤害现况调查

目的 调查黄河三角洲地区农村居民伤害发生的现况。方法 采用分层整群抽样方法,对山东省东营市20个村庄的15276名农村居民在2002年3月1日至2003年2月28日期间的伤害情况进行回顾性问卷调查;数据统计采用Excel 2000软件录入,转入SPSS 11.0软件分析。结果 伤害粗发生率为5.90％,标化发生率为5.93％;其中男性7.79％,女性4.03％,死亡19例(标化死亡率为122.56/10万),致残20例;以钝/锐器伤、交通伤、跌/坠落伤和动物伤为高,分别占24.61％、24.17％、22.62％和13.08％。发生率以25～54岁和0～4岁年龄组为高(>6.0％);住院治疗267例(29.60％),平均住院15.89天,休息19.20天,医疗费用904.85元,其他费用221.88元,留人陪护时间10.15天。平均每例伤害死亡潜在寿命损失年数为24年,潜在工作损失为19.6年,潜在价值寿命损失为8.7年,标准时间期望寿命损失为31.73年。结论 该地区农村居民伤害发生率较高,给农村居民的健康造成较大威胁,并导致了严重的社会和家庭经济负担,预防和控制农民伤害已迫在眉睫。     

山东省利津县人口老龄化趋势研究

为了解山东利津县人口老龄化趋势，笔者选择山东省利津县人口作为调查对象，通过对2000-2005年人口构成现况研究，测算出今后20a人口构成趋势。     

利津县中青年超重和肥胖与高血压及高同型半胱胺酸血症相关性的研究

目的通过观察利津县中青年体质量指数(BMI)、血压及血清同型半胱胺酸(HCY)水平,探讨中青年超重和肥胖与高血压及高HCY血症的相关性。方法选择利津县750例健康查体的中青年,计算BMI、监测血压及检测血清HCY(采用循环酶法)水平,根据分组情况进行统计学分析。结果①750例中青年超重和肥胖的检出率为43.20%,其中超重31.07%、肥胖12.13%;男性超重和/或肥胖的检出率均明显高于女性(P<0.01)。②750例中青年高血压及高HCY血症的检出率分别为17.07%、9.73%;超重和肥胖者分别为28.09%(91/324)和19.75%(64/324),分别显著高于正常组(P<0.01);超重组、肥胖组分别显著高于正常组(P<0.01);肥胖组也分别显著高于超重组(P<0.01)。③血压(收缩压、舒张压)及血清HCY水平与BMI值呈显著正相关(r=0.639、0.515、0.497,P<0.01),其相关性良好。结论利津县中青年尤其是男性超半数存在超重或肥胖,高血压及高HCY血症与BMI相关,超重和肥胖者高血压及高HCY血症的发生率高,应积极防治高血压及高HCY血症。     

两个多发性内分泌腺瘤病2A型家系RET基因突变研究

目的总结2个多发性内分泌腺瘤病2A（MEN2A）型家系的临床特点,及MEN2A家系RET基因突变类型。方法对2个MEN2A家系进行临床调查,分析其临床特点。提取2个家系成员外周血基因组DNA,扩增先证者RET原癌基因的外显子10、11,13—16,并行Sanger测序,测得突变所在的外显子后,将其亲属相应外显子的扩增产物进行测序。结果家系1的先证者及其哥哥的10q11．2外显子11（密码子634）RET原癌基因发生点突变：Cys643Trp。家系2的先证者其兄长存在10q11。2外显子11（密码子634）RET原癌基因发生点突变：Cys643Arg,筛查出1个家系成员为基因突变携带者。结论RET原癌基因第11外显子Cys643Trp杂合突变及Cys634Arg杂合突变,均为MEN2A的致病基因．此2个家系患者虽然突变类型不同,但两家系患者在起病方式、发病年龄及临床表现均相似。基因检测是诊断MEN2A的有效方法。     

PGC-1β调节大鼠ALAS-1基因表达机制的初步探讨

目的 检测PGC-1β在人肝癌细胞（Hep G2）和大鼠肝原代细胞中调节大鼠ALAS-1基因表达。方法 在Hep G2细胞中瞬时转染PGC-1β,用双荧光报告系统,检测过表达PGC-1β时,大鼠ALAS-1启动子报告基因的活性变化。同时构建了5'端顺式元件系列截短和突变的ALAS-1启动子报告基因,检测并分析介导PGC-1β作用的转录因子结合元件。分离肝原代细胞并检测PGC-1β对ALAS-1转录的影响。构建干扰NRF-1基因的siRNA腺病毒,证明,NRF-1介导PGC-1β激活ALAS-1启动子转录的作用。结果 在Hep G2细胞中,过表达PGC-1β显著促进ALAS-1表达。分别构建了FoxA2和NRF1结合元件突变的ALAS-1启动子,发现PGC-1β对NRF1突变的ALAS-1启动子的激活作用显著下降,而FoxA2作用不明显。在肝原代细胞中过表达PGC-1β促进了ALAS-1的转录。当用小RNA干扰NRF-1的表达后,则抑制了PGC-1β对ALAS-1转录的促进作用。结论 在Hep G2 和大鼠肝原代细胞中,PGC-1β能够促进ALAS-1基因的表达,并且这种作用是通过NRF-1介导完成的。