大肠杆菌O157:H7的分离鉴定及应用复合PCR法同时检测其三个毒力因子

[目的]对驻滇部队感染性腹泻患者、猪和污水进行大肠杆菌O157：H7(E O157：H7)的分离鉴定。[方法]用O157免疫磁珠富集后，接种S-MAC琼脂平板培养，用MUG试验初筛，VlATEK32全自动微生物鉴定仪鉴定，应用复合PCR法同时检测其三个毒力因子。[结果]从腹泻患者和猪中检出E coli O157：H7，该菌具有三个毒办因子。[结论]云南战区部队存在E coli O157：H7感染。复合PCR法的建立，为腹泻研究领域的病原学监测和流行病学调查提供了新手段。     

血液制品病毒灭活／去除技术平台的建立与应用

目的：建立血液制品病毒灭活／去除技术并应用于血液制品的病毒灭活／去除工艺验证。方法建立指示病毒库以及S／D处理法、低pH孵放法、干热法、巴氏消毒法、纳米膜过滤法等血液制品病毒灭活／去除技术,采用细胞病变法测定病毒滴度,Spearman和Karber法计算病毒滴度,病毒滴度降低量（ LRV）≥4判为有效,对企业的血液制品样品进行病毒灭活／去除验证。结果 S／D处理法和低pH孵放法可有效灭活有包膜指示病毒,干热法和巴氏消毒法可有效灭活有、无包膜指示病毒,纳米膜过滤法可在一定过滤量范围内去除PPV指示病毒。结论所建立的血液制品病毒灭活／去除技术可用于血液制品的病毒灭活／去除工艺验证,以提高血液制品的病毒安全性。     

发色底物法在酶促反应初速度内测定α1抗胰蛋白酶的活性

目的：优化发色底物法,使其在酶促反应初速度内测定α1抗胰蛋白酶（ AAT）的活性并用于血浆蛋白纯化过程中各样品活性的检测。方法采用酶标仪动态监测模式观察酶浓度和反应时间对酶促反应的影响;计算初速度并确定被底物饱和的最大酶浓度。将AAT与胰蛋白酶孵育,剩余靶酶和底物作用产生的光密度可反映AAT的活性。通过△D与AAT标准品活性进行拟合建立标准曲线,测定相关样品的活性,进行精密度和准确度验证。结果胰蛋白酶浓度为0．0625 mg／ml,20 min内酶促反应处于初速度内。 AAT标准曲线范围为200～1200 IU／ml, r＞0．99。该法测定Cohn Ⅳ、前处理液、洗脱峰样品中AAT的活性分别为（720．59±18．63）、（601．84±19．18）、（568．09±24．83）IU／ml。每个样品之间的RSD＜10％,加样回收率均在90％～110％。结论发色底物法经优化后,准确度和精密度大幅度提高,更适于实验室制备AAT或不同生产阶段样品的活性检测。     

改良Korthof培养基

使用Korthof培养基分离培养钩端螺旋体是钩端螺旋体病的实验诊断技术之一,已用多年,效果尚良好。为简化培养基的制备,我们据Babuidieri氏法对Korhof培养基作了改进,去掉了氯化钙,解决了制备干燥粉剂后因溶解而产生大量沉淀问题,使之较易制成干燥粉剂。增加微量的维生素、烟碱酸及少量酚红,现场分离可加适量5—氟脲嘧啶。减少兔血清用量,可简化操作程序。经与Korthof原方进行效果比较及三十余年的使用,效果尚好。改良Korthof培养基之优点:因无钙,可避免沉淀产生,较易制作浓缩培养基,也较容易干燥成功。节省兔血清。加入酚红,便于观察pH。现将改良Korthof培养基的成份及制备程序报告如下:(月示)胨(或蛋白陈、胰     

γ射线终末辐照对同种异体肌腱病毒灭活效果及生物力学性能影响的研究

目的研究γ射线终末辐照灭菌对同种异体肌腱病毒灭活的效果及对肌腱生物力学性能的影响。方法采用细胞培养法,检测γ射线辐照(照射剂量25 kGy)灭活PRV、VSV、PPV、EMCV、HIV-1病毒的效果。取正常供体手部肌腱12根,直径4~5 mm,随机分为实验组(辐照组)和对照组(新鲜不处理),进行病毒滴度检测,MTS力学试验机检测两组极限拉伸载荷。结果经过γ射线辐照可使污染在同种异体肌腱上的病毒滴度下降超过4 Log值,且盲传3代无病毒检出。辐照前后,同种异体肌腱极限拉伸载荷和组织结构差异无统计学意义(P0.05)。结论终末辐照灭菌(照射剂量25 kGy)是同种异体肌腱病毒灭活的有效方法,可避免引入其它化学试剂,且该工艺不会影响肌腱的极限拉伸载荷和组织结构。     

纤维蛋白止血敷料的生物相容性研究

目的评价纤维蛋白止血敷料的生物相容性。方法对纤维蛋白止血敷料进行如下生物学检测:细胞毒性试验(MTT法)、急性全身毒性试验、皮肤刺激试验、皮内刺激试验和溶血试验,根据标准对实验数据进行分析和评估。结果纤维蛋白止血敷料的细胞毒性分级0—1级;无急性全身毒性作用,无皮肤刺激反应、皮内刺激反应,无溶血性。结论纤维蛋白止血敷料具有良好的生物相容性。     

生物条形码检测技术与超微量病毒抗原蛋白检测

基于纳米材料的生物条形码检测技术,以其超灵敏度检测特性大大推动了超微量蛋白免疫学检测技术的发展,并在痕量病毒抗原蛋白超灵敏检测研究中得到较好的应用.本文主要介绍传统生物条形码检测技术和新型生物条形码检测技术,并阐述该技术在人免疫缺陷病毒(HIV)、蓝舌病病毒(BTV)和其他病原标志蛋白中的应用情况.     

聚合酶链反应(PCR)检测水中钩体DNA方法的建立和初步应用

目的:为了建立一个检测水中钩体DNA的技术方法。方法:本研究采用了根据1993年C.Gravekamp设计的引物G_1G_2序列自行合成的引物G_1G_2建立了检测致病钩体DNA的PCR方法。运用此方法并结合“优筛法”对采自云南河口、蒙自等地区108份水样进行检测,并与分离培养后经中国药品生物制品检定所鉴定结果进行了比较。结果:两组方法检测所有水样呈阴性,其精确度和一致性达100％,但分离培养方法漏检率为8.3％(9/108)。结论:建立了PCR检测水中钩体DNA方法。此方法简单、快速、准确,适用于一般实验室及大规模水样钩体DNA的检测,值得推广应用。     

简易改装暗视野显微镜

暗视野显微镜是检查钩端螺旋体培养物的必须装备。目前国内医疗、科研基层单位及部队甚缺,致使钩端螺旋体病的培养、诊断、菌型研究工作不能广泛开展。为解决此问题,我们用遮光片改装暗视野显微镜,经推广20余年,效果颇为满意。遮光片法简单易制,应用方便,效果亦佳,现将改装方法介绍如下。 普通无色透明玻璃一小块,磨成圆形,直径与显微镜滤光片大小相仿。将黑纸剪成直径为滤光片之2/3—3/4的圆片,粘于圆玻璃片中心,即成遮光片。将遮光片置于明视野聚光器滤光片之位置上,即成暗视野,拉开遮光片,即成明视野,一镜二角,且可固定长期使用。     

针刺麻醉施行脾切除113例效果观察(摘要)

体会1.113例针麻脾切除术,成功率99.1%,优良率81.3%,失败率0.09%,在农村应用突出了针麻的安全,经济,简便的优点。2.针麻本身有抗痛及抗病作用,对机体生理功能有调节作用,所以针麻下实行晚期血吸虫病脾切除术,安全幅度大,对机体生理功能干扰小,术后血压平稳、呼吸、循环、消化、排泄功能恢复较快,深受贫下中农的欢迎。3.晚期血吸虫病人身体条件差,针刺