小鼠CCL20 mRNA实时荧光定量PCR检测方法的建立

目的:建立检测小鼠脂肪组织中趋化因子CCL20(CC chemokine ligand 20)mRNA的实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR,qRT-PCR)的方法。方法:分离小鼠脂肪组织细胞,经PMA和离子霉素刺激4 h后收集细胞提取总RNA并逆转录为cDNA。采用qRT-PCR方法检测趋化因子CCL20 mRNA的表达水平。评价该方法的特异性,同时应用该方法检测小鼠脂肪组织中趋化因子CCL20mRNA相对表达水平。结果:建立了小鼠脂肪组织中趋化因子CCL20的SYBR Green实时荧光定量PCR检测方法,结果显示该方法的熔解曲线为单峰,同时核酸电泳显示一条特异性条带。检测结果表明高脂饮食诱导的肥胖小鼠脂肪组织中趋化因子CCL20的相对表达水平明显高于正常饮食对照组(t=3.02,P<0.05)。结论:建立了检测小鼠脂肪组织中趋化因子CCL20 mRNA的实时荧光定量PCR方法,特异性好、灵敏性强,为进一步研究小鼠CCL20的生物学功能提供了实验基础。     

三种国产化学发光免疫分析仪在性激素检测中的应用价值

目的 对三种国产化学发光免疫分析仪(新产业、迈瑞、安图,随机标定为A、B、C)的配套性激素六项[包括孕酮(P)、雌二醇(E2)、促黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)、泌乳素(PRL)和睾酮(T)]定量检测试剂盒进行应用评价,评价其性能是否符合要求及目前国产化学发光免疫分析仪在性激素检测中的应用价值.方法 对三种国...     

干细胞标志分子LGR5研究:肿瘤治疗新靶点

背景:近期研究表明,肿瘤干细胞在肿瘤的发生发展中起关键性作用,因此对其标记分子的研究必将对肿瘤发生发展的了解及肿瘤的临床诊断、治疗都带来深远的影响。目的:综述干细胞标志分子LGR5在干细胞和肿瘤干细胞中的研究进展。方法:由第一作者在PubM ed数据库及万方数据库中检索1998年1月至2014年12月有关LGR5与干细胞/肿瘤干细胞研究的相关文献。英文检索词为"LGR5,stem cell,cancer stem cells",中文关键词为"LGR5,干细胞,肿瘤干细胞"。计算机初检得到178篇文献,阅读标题和摘要进行初筛,排除与研究目的相关性差及内容陈旧、重复的文献123篇,纳入55篇符合标准的文献。结果与结论:LGR5是肠道、胃、毛囊等干细胞的表面标志分子,并与结直肠癌、胃癌、肺癌、卵巢癌、肝癌、基底细胞癌等多种肿瘤的发生发展预后密切相关,是肿瘤干细胞的候选标志分子,有望成为肿瘤治疗的新靶点。研究发现R-spondins(RSPOs)是LGR5的高亲和力配体,二者相结合参与Wnt信号通路,调节细胞增殖分化。     

构建急诊肌钙蛋白检测项目的风险管理程序

使用失效模式和效应分析(FMEA)模型确定医学实验室风险管理工作流程和关键环节。根据ISO15189认可准则,识别出实验室急诊肌钙蛋白检测工作流程中关键环节的风险。针对急诊肌钙蛋白检测的评估活动,采取积极的纠正措施,通过检测系统周期性的审核性能数据,可以对急诊肌钙蛋白检测的质量持续改进。     

2种国产化学发光检测系统与电化学发光检测系统检测CA72-4的一致性评价

目的评价电化学发光检测系统和2种国产化学发光检测系统检测糖类抗原72-4(CA72-4)结果的一致性。方法根据美国临床实验室标准化协会(CLSI)EP09-A3文件,以cobas e601电化学发光免疫分析仪及配套试剂组成的检测系统(简称e601检测系统)作为参比系统(X),以MAGLUMI 4000全自动化学发光分析仪及配套试剂组成的检测系统(简称MAGLUMI 4000检测系统)作为待评系统1(Y1),以CL-2000i化学发光分析仪及配套试剂组成的检测系统(CL-2000i检测系统)为待评系统2(Y2)。收集42例覆盖线性范围的临床血清样本,每份样本用3种检测系统进行单次检测。使用广义极端学生化偏差(ESD)法进行离群值检验,选择最优的回归模型拟合回归方程,计算医学决定水平处的偏移,以1/2室间质评平均偏移(±7.65%)作为可接受标准。结果散点图显示e601检测系统(X)与MAGLUMI 4000检测系统(Y1)和CL-2000i检测系统(Y2)的相关性均良好,目测各发现1个离群值,广义ESD法确认CA72-4检测结果无离群值。通过Deming回归分析(X和Y1)和Passing-Bablok回归分析(X和Y2)得回归方程分别为Y1=5.020 6+1.149 8X,Y2=0.726 3+0.830 0X。将CA72-4的医学决定水平(6.9 U/mL)代入回归方程,计算得e601检测系统(X)和MAGLUMI 4000检测系统(Y1)的相对偏移为60.96%,其相对偏移大于1/2室间质评偏移,比对不可接受;e601检测系统(X)与CL-2000i检测系统(Y2)的相对偏移为-6.74%,比对结果可以接受。结论 e601检测系统与MAGLUMI 4000检测系统之间CA72-4的检测结果不具有可比性,e601检测系统与CL-2000i检测系统之间CA72-4的检测结果具有可比性。CLSI EP09-A3文件可用于不同标记免疫检测系统之间的可比性研究。     

实验性自身免疫性甲状腺炎小鼠体内Th17细胞检测的意义

目的:研究Th17细胞及相关细胞因子IL-17在实验性自身免疫性甲状腺炎(experimental autoimmune thyroiditis,EAT)小鼠体内的变化.方法:利用小鼠甲状腺球蛋白(Tg)建立小鼠EAT模型.应用流式细胞术(FCM)分析小鼠脾脏细胞中Th17细胞的比例.采用qRT-PCR检测小鼠脾脏细胞...     

小鼠白介素17受体A胞外段的表达、纯化及鉴定

目的:分别克隆小鼠白介素17受体A胞外段(mIL-17RAaa32-322)及小鼠IgG2AFc(mIgG2AFc)基因,构建mIL-17RAaa32-322-mIgG2AFc融合蛋白原核表达载体,并在体外表达、纯化及鉴定。方法:利用基因重组技术构建pET32a(+)-mIL-17RAaa32-322-mIgG2AFc原核表达载体,并在E.coli Rosetta中表达mIL-17RAaa32-322-mIgG2AFc融合蛋白,经镍离子螯合层析分离纯化后,用SDS-PAGE电泳和蛋白质印迹法进行鉴定。结果:成功构建pET32a(+)-mIL-17RAaa32-322-mIgG2AFc原核表达载体,获得高效表达的融合蛋白,且蛋白质印迹证实为目的蛋白。结论:获得mIL-17RAaa32-322-mIgG2AFc融合蛋白,为进一步研究其生物学功能奠定基础。     

国产化学发光法评估围孕期妇女TORCH感染情况及其IgM假阳性结果的分析

目的 探讨苏州地区围孕期女性TORCH感染情况及流行特点,并对TORCH-IgM假阳性检测结果进行分析,为本地区围孕期女性保健提供参考依据.方法 回顾性分析、统计2018年6月至2020年9月在南京医科大学附属苏州医院就诊的17984例围孕期女性TORCH检查结果,利用国产化学发光免疫分析法(CLIA)对TORCH的IgG以及IgM抗体进行检测,分析感染率.利用ELISA法对129例TORCH-IgM和IgG抗体双阳性血清进行IgG亲和力检测,分析IgM抗体假阳性结果.结果 17984例TORCH检测结果中,IgG抗体阳性率由高到低依次为CMV(97.58％)、HSV-1(89.54％)、RV(78.81％)、HSV-2(10.88％)和TOX(2.83％).IgM抗体阳性率由高到低依次为CMV(1.22％)、HSV-1(1.18％)、HSV-2(0.77％)、RV(0.57％)和TOX(0.36％),TOX感染阳性率最低,CMV感染阳性率最高.RV、CMV和HSV-1感染模式以IgM-/IgG+为主,TOX和HSV-2主要表现为IgM-/IgG-模式.按照季节统计,HSV-1-IgM在冬季阳性率最高(χ2值8.36,P值0.04),TOX-IgM、RV-IgM、CMV-IgM和HSV-2-IgM各季节阳性率差异无统计学意义(χ2值分别为2.51、4.16、1.84和5.12,P值分别为0.48、0.25、0.61和0.16).TORCH-IgG抗体阳性率四季差异均无统计学意义.按照年龄分组统计,<35岁组CMV-IgG、HSV-1-IgG和HSV-2-IgG阳性率明显低于≥35岁组(χ2值分别为12.34、15.04和238.36,均P<0.01),低年龄组TOX-IgG感染率明显高于高年龄组(χ2值为10.01,P<0.01),两年龄组间RV-IgG和TORCH-IgM抗体阳性率差异无统计学意义.化学发光免疫分析法检测129例TORCH-IgM和IgG抗体双阳性标本中,仅19例(14.73％)检测结果为IgG低亲和力.结论 苏州地区围孕期女性TORCH感染普遍,建议育龄女性孕前进行常规筛查,防止TORCH近期感染,预防出生缺陷.对于TORCH-IgM和IgG抗体双阳性结果可进一步联合IgG亲和力检测,排除TORCH感染假阳性.