小鼠胚胎干细胞植入大鼠脑内分化的研究

观察小鼠胚胎干细胞植入大鼠隔区和海马内之后的分化状况。以 SD大鼠为宿主 ,将胚胎干细胞移植入宿主隔区和海马内 ,移植后在 l、2、3、4和 8周取脑 ,冰冻切片 ,进行 Nissl染色和 M6、NSE、GFAP免疫组织化学反应。胚胎干细胞移植入大鼠隔区和海马之后 ,从第 2周开始表达 M6、GFAP、NSE等抗原 ,持续至第 4周 ,主要位于移植区内 ,较少迁移。小鼠胚胎干细胞移植入大鼠隔区和海马内之后 ,分化为神经元和神经胶质细胞     

猴表皮干细胞的分离和培养

目的： 探索猴表皮干细胞分离纯化和培养方法。 方法: 将猴皮肤标本剪成皮条,加入0.25％胰酶浸泡过夜；然后去除角质层，刮上皮面获取表皮细胞进行培养。取第2-4代的细胞,经消化后，用Ⅳ型胶原黏附法获得为快吸附的表皮细胞。对快吸附的表皮细胞行流式细胞仪、免疫组化和RT-PCR检测。 结果: 快吸附细胞从mRNA转录水平及蛋白表达水平均呈现表皮干细胞的特性：β1整合素、K15和α6整合素阳性，而CD71和K1/K10阴性。 结论: 所采用的分离纯化方法和培养条件适合猴表皮干细胞的分离纯化及生长。     

小鼠胚胎切割及半胚体外培养

目的 为基因型完全相同的同卵双胞脂人类动物模型的建立积累基础资料。方法C57BI/6J雌性小鼠与KM雄性小鼠交配,见栓3．5d采集小鼠晚期桑椹胚和早期囊胚,应用显微手术刀直接分割法进行胚胎二等份分割,所得半胚体外培养,观察其发育情况。结果 晚期桑椹胚分割成功率是91．3％,半胚发育率为57.1％,早期囊胚分割成功率约为89．2％,半旺发育率为71.2％。结论 C57BI/6J小鼠与KM小鼠的F1代胚胎经切割后能在体外良好发育,该资料可用于同卵双胞胎分化发育的研究及人类双胞胎动物模型的制作。     

一种胚胎移植新方法的建立

在转基因动物制作中胚胎移植是一个关键性技术。胚胎的输卵管移植相比子宫移植来说,可以避免在体外较长时间培养,但从输卵管伞部移植卵又常常不可避免地因囊膜开口而不同程度的出血,而且由于伞口部位置较隐蔽,移卵时技术难度大要求高。因此．我们尝试在囊膜外靠近壶腹部附近开口于输卵管,将卵直接移入壶腹部,卵移行至子宫发育。此技术非常简单易行,有助于提高转基因动物的制作效率。     

PCR技术在鼠肺支原体检测中应用的初步研究

目的　研究不同培养条件对小鼠卵母细胞体外成熟及体外受精率的影响。方法　小鼠卵母细胞分别在含有FSH、BSA和胰岛素的培养液中体外成熟,在Whitten 氏液中体外受精,比较体外成熟率、体外受精率。结果　1- 裸卵(DO) 的体外成熟率、体外受精率(81-4% ,31-0 % ) 均高于卵丘卵母细胞复合体(COC)(48-6 % ,27-1% ) 。2- 在培养液中添加FSH、胰岛素和BSA,卵母细胞的体外成熟率为77-9 % ,82-3% 、60-7% ;体外受精率为77-2 % 、72-6 % 、26-7% ;2 - 细胞率为49-2 % 、34-2 % 、10-0% 。胰岛素组的卵母细胞IVM 率最高,但IVF率、2 - 细胞率低于FSH 组。3- 添加BSA的两组的体外受精率只有26-7 % 、25-8 % ,显著低于其他组,其体外成熟率也较添加FSH 和胰岛素的组成。4- 排出第一极体(PbI) 的卵母细胞的体外受精率和2 - 细胞率(85-9 % ,22-4% ) 均高于GV期卵母细胞(71-1 % ,12-9 % ) 。结论　1- 卵丘卵母细胞(COC) 较裸卵(DO) 的体外成熟率、体外受精率都低,差异显著(P成熟< 0-01;P受精< 0-05) 。2-FSH 和胰岛素均能提高小鼠卵母细胞的体外成熟率、体外受精率。3-BSA可以降低小鼠卵母细胞体外受精率,差异极显著。4-GV 期卵母细胞的体外受精率显著低于体外培养的排出第一极体的卵母细胞(P2 - cell < 0-05,P受精<0-05)     

猴血管缺血性脑损伤模型的建立及评价

目的建立猕猴血管缺血性脑损伤模型,为干细胞移植治疗脑损伤的研究提供实验模型。方法用导管介入法将聚乙稀醇(PVA)栓子输送至大脑中动脉使大脑中动脉分支动脉栓塞,诱发缺血性脑损伤,连续CT扫描观察脑损伤变化和血管栓塞对侧神经功能评定分析缺血性脑损伤后的神经功能变化。结果脑血管栓塞前造影明显可观察到左侧大脑中动脉血管树及其分支分布情况,栓塞后血管造影证实额颞区无血管显示,连续24hCT扫描发现栓塞后6h内可见脑细胞水肿,但无明显可见梗死灶。12h后见额颞叶区梗死灶,24h可见明显梗死灶,1个月后见梗死灶面积减小,此后1年内梗死面积未见明显变化。行为学观察可见血管栓塞对侧前后肢运动功能严重障碍,1个月内神经功能评分为3～4级,3个月后为3级。结论用大脑中动脉介入法注入PVA栓子,成功建立了血管缺血性脑损伤模型。     

BALB／c鼠自身免疫性睾丸炎动物模型的制作

 【目的】探讨BALB／c鼠睾丸炎动物模型的建立方法，观察睾丸炎形成后到生殖功能恢复的时间间隔，以及该动物模型的稳定性。【方法】BALB／c小鼠（10周）背脊皮下注射睾丸混悬液0．1mL，浓度2×10^7／mL，1次/周，共4次。同种睾丸混悬液（组1）、同种睾丸混悬液加完全免疫佐剂（组2）、异种睾丸混悬液（组3）、异种睾丸混悬液加完全免疫佐剂（组4）、空白对照（组5）。【结果】组3建模成功率80％，第5、8、11周按Johusen评分为5．2±1．44、6．2±0．79、8．1±0．87，组1、2、5评分均在9．0以上，组3生精功能明显降低（P〈0．05）。组4小鼠于第2次注射后3～5d，全部死亡。组3第5周生精上皮细胞减少至2～3层，曲细精管管腔中有稀疏的精子，间质出现水肿，淋巴细胞浸润约10％～25％。第5周组3附睾尾精子浓度为（11．0±6．2）×10^6，精子存活率（10．73±8．14）％，精子活动率（7．3±6．1）％，明显低于组1、2、5（P〈0．05），于第11周组3恢复至正常水平。睾丸炎生精障碍持续21～28d。【结论】异种小鼠生殖细胞可诱导建立BALB／c小鼠的EAO模型．模型有一定的持续稳定性，可用于精子发育生物学研究。     

视黄酸视网膜下腔注射未能逆转鼠视网膜变性

目的：探讨视网膜下腔注射视黄酸对视网膜变性发展的阻断作用。方法：14d龄视网膜色素变性鼠(retinal degeneration mouse，Rd鼠)各8只视网膜下腔分别注射10^-3，mol／L浓度视黄酸和磷酸盐缓冲液(phosphate buffered saline，PBS)，术后1个月对注射眼进行病理取材。并取7、14、28d和3个月龄Rd鼠各3只作正常对照。结果：视网膜下腔注射视黄酸和PBS，1个月后均可见部分眼视网膜内核层细胞增殖，视网膜下腔注射视黄酸较注射PBS未见有明显差异。结论：通过视网膜下腔注射视黄酸并不能使已经变性的视网膜恢复正常或阻断视网膜变性的发展。     

肝脏特异性可调控丙型肝炎病毒核心蛋白表达的转基因小鼠模型的建立

【目的】制备TRE-HCV-C转基因小鼠，为四环素调控系统的体内研究提供了反应部分的转基因小鼠。以便与本实验室同时建立的调控部分的小鼠共同作用，为进一步建立双转基因小鼠模型奠定基础，更为丙型肝炎病毒核心蛋白（HCV-C）的发病机制的研究提供一个实用方便的模型。【方法】重组构建含有目的基因HCV-C、TRE序列和SV40polyA的转基因载体pTRE-HCV-C．以显微注射的方法将l_153kb的转基因片段注人BALB／C母鼠的受精卵．出生动物及其后代经PCR初步筛选出阳性．再经Southern杂交对阳性鼠基因组DNA标本行进一步鉴定。用转基因阳性小鼠和整合有肝脏特异性启动子ApoE和胛A基因的另一品系转基因小鼠杂交，得到子代F1小鼠，通过免疫组织化学来初步检测HCV-C在肝脏中特异性的可调控性的表达。【结果】产生了5只整合有TRE-HCV-C基因的首建鼠，以及它的子代也带有此基因。与基因组上整合有肝脏特异性启动子ApoE和rtTA基因的转基因小鼠杂交后，得到子代F1小鼠。特定时问与DOX作用后，小鼠肝脏的免疫组织化学结果表明，TRE-HCV-C小鼠为丙型肝炎病毒核心蛋白的发病机制研究提供了一个良好的动物模型工具。【结论】成功制备了HCV-C转基因小鼠，可利用四环素调控系统来研究HCV中的C基因对小鼠的作用，为进一步建立四环素调控系统调控下表达HCV-C基因双转基因小鼠模型奠定基础．也是HCV-C基因功能研究及与肝细胞癌的关系的机制研究的一个有用工具。     

人表皮干细胞体外分选和培养对构建组织工程皮肤种子细胞的可能性

目的:探讨人表皮干细胞在体外分选和培养的可能性,为构建组织工程皮肤寻找理想的种子细胞。方法:实验于2002-01/12在中山大学基础医学院动物中心完成。根据表皮干细胞与Ⅳ型胶原蛋白的高黏附的特性,运用黏附实验将干细胞从培养在鼠Ⅳ型胶原包被的培养瓶的表皮细胞中分选出来,并从形态学、超微结构及免疫组化等方面进行了鉴定。结果:分选出来培养的细胞符合表皮干细胞的特征,说明分选培养的细胞是表皮干细胞。结论:预先在体外对表皮干细胞进行分选和培养是可行的,该细胞群有望成为构建组织工程皮肤的种子细胞,为下一步应用表皮干细胞构建组织工程皮肤奠定了牢固的基础。