人促红细胞生成素在大肠杆菌中融合高表达：稀有密码子对外源蛋白翻译速率的影响

本实验分别用两种融合表达载体（ｐＧＥＸ－２Ｔ及ｐＤＳ－６Ｈ）在大肠杆菌ＸＬ１－Ｂｌｕｅ中表达人促红细胞生成素（ｈ－ＥＰＯ）。结果发现，虽然ｈ－ＥＰＯ基因中大肠杆菌使用频率为０％或１％的密码子占密码子总量的１４．３％，但实验中却取得了较高的蛋白表达量。ｐＧＥＸ－２Ｔ和ｐＤＳ－６Ｈ中表达的融合蛋白（分子量：４４４００和２３８００）分别占细菌总蛋白的２９．７％和１７．５％。从而提示，一个基因中的密码子使用频率与翻译延长速率之间可能不是一种简单的对应关系。表达载体ｐＧＥＸ－２Ｔ中５＇融合基因长度达１３００ｂｐ，而ｐＤＳ－６Ｈ中仅为３６ｂｐ，而ｐＤＳ－６Ｈ但两者表达水平却无显著差异，因此作为翻译起始限制因素的翻译起始区的ＡＴＧ下游顺序仅需长约３６个核苷酸。     

A study on improvement of expression of human G－CSF cDNA transferred with retroviral double－copy vector

ＡｓｔｕｄｙｏｎｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔｏｆｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｈｕｍａｎＧ－ＣＳＦｃＤＮＡｔｒａｎｓｆｅｒｒｅｄｗｉｔｈｒｅｔｒｏｖｉｒａｌｄｏｕｂｌｅ－ｃｏｐｙｖｅｃｔｏｒＧｕｏＢａｏｙｕ（郭葆玉）；ＺｈａｎｇＳｕｙｉｎｇ（张淑英）；ＸｕＨｕｉ...     

恶性疟P190抗原保守区Ⅰ、Ⅴ基因的亚克隆及在大肠杆菌中高效表达

作者采用PCR方法克隆了我国海南省FCC1/HN株P190抗原两个保守区基因,分别定名为P190CRI和P190CRV。基因片段经纯化后连接到pUC18载体中进行DNA序列分析,结果显示:除了P190CRV中有5个碱基变换外,其余序列均与MAD20型序列一致。经序列分析的两个基因片段分别与pGEX-2T载体连接,经双酶切鉴定后转化感受态JM109(DE_3)大肠杆菌进行高效融合表达,并且用Sepharose 4B-谷胱甘肽层析柱进行亲和纯化,结果为:两个插入基因片段均得到高效融合表达,经一步亲和纯化后就取得高纯度的重组蛋白。     

免疫毒素构建的现状及未来

导向药物或称免疫毒素,由导向系统与“弹头”两部分组成,它能高效杀死癌细胞,又对正常细胞有很小损伤作用,然而近年来的研究表明,将导向系统与“弹头”偶连时存在着药效明显下降、鼠的单克隆抗体对人有免疫原性等一系列问题。对于这些涉及免疫毒素构建中的一些迫需解决的问题,国内外学者近来在这方面提出了一些克服的办法和崭新的设计思路——用基因工程技术制备嵌合抗体。本文综述了构建免疫毒素所应具备的理想条件、存在问题的解决途径及未来的发展方向。     

伤寒菌苗的研究概况

伤寒仍然是发展中国家的多发传染病,伤寒杆菌抗药性的产生给治疗带来了较大的困难。用菌苗免疫易感人群不失为控制伤寒流行的重要手段。目前普遍使用的灭活菌苗效果较差,且有副反应,不易被接受。国外研究V_1多糖菌苗经人群试验后有较好的免疫效果,且不产生副反应,有推广价值。伤寒减毒口服活菌苗Ty21a已有商品供应,人群试验表明有一定保护效果,但仍有许多不足之处。由于遗传工程技术的发展,已在鼠伤寒杆菌进行减毒机理及免疫应答研究,从而将构建出安全有效的无副反应的伤寒口服活菌苗株。     

Subcloning and expression of two conserved regions （Ⅰ，Ⅴ） onP190 antigen of Plasmodium falciparum in E．coli

Ｓｕｂｃｌｏｎｉｎｇａｎｄｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｔｗｏｃｏｎｓｅｒｖｅｄｒｅｇｉｏｎｓ（Ⅰ，Ⅴ）ｏｎＰ１９０ａｎｔｉｇｅｎｏｆＰｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍｉｎＥ．ｃｏｌｉＰａｎＷｅｉｑｉｎｇ（潘卫庆）；ＹａｎｇＳｈｕｔｏｎｇ（杨树桐），...     

恶性疟原虫红内期疫苗研究进展

T淋巴细胞在疟疾免疫中起重要作用,因此在疫苗设计时应注重掺入T细胞表位。活的减毒细菌或病毒载体在携带异源抗原和诱生细胞免疫方面具有重要作用。红内期MSA1,MSA2,RESA和EBA-175抗原等被列为重要疫苗候选抗原,它们的一些保护性表位也已鉴定。SPf.66合成肽疫苗目前受到很大关注,并已进入人体临床试验。本文还展望了红内期疫苗的发展前景。     

Studies on the homogeneity between high-and lowaffinity glucocorticoid receptor

The homogeneity between the high-and low-affinity glucocorticoid receptors(GR_H and GR_L)was testified by immunoaffinity chromatography using Mab N250(recognizing the immunogenic domain at the N terminal of GR_H)and Mab BuGR1(recognizing the DNA binding domain of GR_H).The specific binding peak of 0.98μmol/L[~3H]triamcinolone acetonide(TA)was higher than that of 52.50nmol/L[~3H]TA.The re-sult suggests that the antigenic determinants of GR_L are similar to those of GR_H.ThecDNA of rat liver GR_H was introduced into GR_H-and GR_L-negative mouse fibroblast cellline E82.A3 by calcium phosphate coprecipitation.A number of clones which expressGR_H were selected with G418(400μg/ml).The results of radioligand binding assay indicatethat GR_H gene is expressed successfully and GR_L also may be encoded by GR_H gene.     

原癌基因K-ras mRNA的体外核酶定点切割

目的：确定人工设计的梅核Ｒｘ１９９对原癌基因Ｋ－ｒａｓ ｍＲＮＡ的体外切割活性，为Ｋ－ｒａｓ特异性核酶的体内应用提供依据。方法：利用ＤＮＡ重组技术构建Ｋ－ｒａｓ外显子１及核酶Ｒｚ１９９的体外转录质粒，以Ｔ７ＲＮＡ聚合酶进行转录获得核酶Ｒｚ１９９对其靶ＲＮＡ分子进行切割。结果：Ｋ－ｒａｓ体外转录体为２５４ｎｔ的ＲＮＡ分子，能被核酶Ｒｚ１９９切割成大小分别为９０，１６４ｎｔ的２个片段。结论：梅核Ｒａ１     

恶性疟P190抗原双态区三肽重复序列基因的缺失

恶性疟P190(亦称裂殖子表而抗原1,MSA1)是疟原虫红内期裂殖体产生的一种塘蛋白,分子量约190 kD。由于该抗原在疟疚病人和实验动物中均能诱生很强的保护性免疫力,因而已将它列入重要的疟疾疫苗候选抗原。P190存在株间抗原差异,但该变异属于等位基因双态变异。至今经序列分析鉴定的虫株中只发现两种变异类型序列,MAD20型和Kl型。比较不同虫株该基因序列可将该分子划分为保守区、双态区和多态区。近来研究提示,双态区可能是该分子重要保护性免疫控制区。我们克隆了我国恶性疟FCC1/HN株该双态区的基因。方法为设计和合成一对引物,在引物的5’端设有