A study on improvement of expression of human G－CSF cDNA transferred with retroviral double－copy vector

ＡｓｔｕｄｙｏｎｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔｏｆｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｈｕｍａｎＧ－ＣＳＦｃＤＮＡｔｒａｎｓｆｅｒｒｅｄｗｉｔｈｒｅｔｒｏｖｉｒａｌｄｏｕｂｌｅ－ｃｏｐｙｖｅｃｔｏｒＧｕｏＢａｏｙｕ（郭葆玉）；ＺｈａｎｇＳｕｙｉｎｇ（张淑英）；ＸｕＨｕｉ...     

NOD.Scid过继性1型糖尿病小鼠模型的建立

目的:建立能反应自身免疫特点的1型糖尿病动物模型,为进一步研究该病发病机理奠定基础。方法:将16只NOD.Scid小鼠随机分为两组,实验组小鼠腹腔注射发病NOD小鼠脾细胞,对照组注射未发病NOD小鼠脾细胞;每日测定血糖和体重;当出现重度糖尿病临床表现时处死,其余小鼠细胞过继后10周处死,经组织学观察和细胞因子ELISA测定。结果:实验组小鼠发病率为8/8,对照组为0/8;胰岛炎性积分分别为2.5±0.2,0;实验组IL-2、IL-10、IFN-γ水平分别为60.7pg/ml、15.5pg/ml、20.2ng/ml,对照组为2.4pg/ml、17.5pg/ml、3.2ng/ml。结论:在NOD.Scid小鼠体内一次性过继发病NOD小鼠脾细胞后5~10周可成功建立1型糖尿病的小鼠模型。     

用生物反应器制备Namalva细胞干扰素的实验研究

<正> 干扰素(IFN)主要通过有关细胞按正中心法则合成一类特殊蛋白质来阻止病毒的复制过程,同时又作用于T、B淋巴细胞和NK细胞来发挥免疫调节作用。我室从八十年代初对Namalwa细胞IFN进行了系列化研究,包括制备工艺、IFN纯化、核酸检测、抗肿瘤、抗病毒和临床试用。目前采用日本MSJ-U_3T型30立升带有“自动生物传感系统”的装置,通过该装置,可对细胞生长条件如T(温度)、pH、DO(溶氧)、AGIT(搅拌)     

人单核细胞趋化因子受体5〔CCR5）N—端膜外第一襻特异抗体F〔ab′）2的制备及鉴定

目的：研究人β趋化因子受体5(huCCR5)NH2端膜外第一襻特异抗体F(ab′)2的制备及鉴定方法。方法：计算机分析定位超基因家族中同源顺序最低的结构域NH2端膜外第一襻，PCR扩增出该基因片段后克隆到原核表达载体pGEX-1N中，经测序鉴定正确后，在E．coli中表达，纯化后免疫新西兰白兔。经A蛋白-Sepharose CL-4B亲和层析纯化后，用胃蛋白酶消化IgG，经S—200凝胶过滤柱分离制备F(ab′)2。结果：经还原和非还原聚丙烯酰胺凝胶电泳和ELISA阻断实验分析证明得到抗huCCR5NH2端的特异性抗体。结论：这一简捷快速的特定功能结构域抗体F(ab′)2的制备方法，对研究该基因在体内的表达及生物学功能提供了重要的实验材料，同时也对超基因家族中亚家族特异抗体研制提供了一种研究思路和方法。     

人单核细胞趋化蛋白受体5的基因克隆及该基因超家族成员氨基酸结构

目的：获取有重要生物功能的人单核细胞趋化蛋白受体５（ｈｕｍａｎ ｍｏｎｏｃｙｔｅ ｃｈｅｍｏｔａｃｔｉｃ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ５,ｈｕＣＣＲ５）。方法：从人ＰＢＭＣ中提取总ＲＮＡ和ｐｏｌｙ（Ａ）＾＋ＲＮＡ,而后经反转录合成ｃＤＮＡ第一链,再以ＰＣＲ扩增出ｈｕＣＣＲ５ ｃＤＮＡ并插入融合表达载体ｐｃＤＮＡ３．０的ＢａｍＨⅠ和ＨｉｎｄⅢ位点,转化大肠杆菌ＴＧ－１,挑取克隆,酶切鉴定,序列分析。结果：克隆出长度为１０５６ｂｐ,编码３５２个氨基酸的ｈｕＣＣＲ５ ｃＤＮＡ。并分析证明与该基因超家族氨基酸有８０％同源性,与国外发表资料比较有３个碱基突变。结论：克隆出人单核细胞趋化蛋白５受体,为今后基础研究提供了较有用的材料。     

一种新的胸腺素α原cDNA

我们克隆了有中国人特征的胸腺素α原全长ｃＤＮＡ,并进行测度分析。方法从健康中心人ＰＢＭＣＰｏｌｙ（Ａ）＾＋ＲＮＡ中采用ＲＴ－ＰＣＲ法克隆ｈｕＰＴＭＡαｃＤＮＡ,酶切鉴定,序列分析,结果经测序后发现该基因是一个国外的高加索人种胸腺素α原有８６．４％,同源性的新基因。结论从中国人中新发现了一个ｈｕＰＴＭＡα基因,并于日前被美国ＮＣＢＩ（ＮａｔｉｏｎａｌＣｅｎｔｅｒ ｏｆ ｂＩＯＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹｉＮ     

人胸腺素原α的克隆、表达和活性初步研究

目的:构建由免疫球蛋白结合分子单结构域随机组合的噬菌体展示文库,为应用各种类型免疫球蛋白对该文库进行体外分子进化筛选研究打下基础.方法:PCR扩增制备分别编码Protein A的A、D结构域、Protein G的B2结构域和Protein L的B3结构域的序列片段,片段两端引入Xba Ⅰ酶切位点,3′端引入分别编码0、1、2、3个氨基酸大小随机连接肽的序列,并克隆于pMD-18T载体构建重组质粒.以上述16种重组质粒为模板,PCR扩增分别制备各种单结构域片段及两端部分T载体序列,XbaⅠ酶切,各种酶切片段混合后连接,并克隆于噬菌体展示载体pCANTAB5S,构建噬菌体展示免疫球蛋白结合分子单结构域随机组合文库,挑取单克隆进行序列测定,评价文库的随机性.结果:噬菌体展示免疫球蛋白结合分子单结构域随机组合文库库容量为2×107,滴度为1.3×1011;文库中含77%以上的阳性克隆,其中由2个以上单结构域组成的阳性克隆占24%;序列分析显示组合文库包含上述4种单结构域序列,连接方式符合随机连接的特点,随机连接肽的编码核酸也呈随机分布.结论:成功构建了免疫球蛋白结合分子单结构域随机组合文库,该文库库容、多样性和随机性完全可满足进行体外分子进化研究的要求.     

趋化因子及其受体与肿瘤

趋化因子及其受体在肿瘤的发生、生长和转移等各个阶段都有复杂的网络性表达,研究表明趋化因子CXCL12及受体CXCR4介导乳腺癌、结肠癌、膀胱癌和前列腺癌等肿瘤的转移和发展,这为深入探讨肿瘤的发病及转移机制提供了新视角。现对近年来有关趋化因子及其受体与肿瘤之间的研究进展作一综述。     

重组人胸腺素α原生物活性的体外研究

目的　对本室克隆并表达的一种胸腺素α原 (humanprothymosinα ,ProTα)的生物活性进行体外实验研究。 方法　体外对其促进E 玫瑰花结形成率 ,在ConA存在下及单独使用ProTα对小鼠胸腺细胞的促增殖作用 ,以及对细胞活素IL 2 ,IFN γ的促诱生作用进行检测。结果　在高浓度时 (1× 10 -7mol·L-1) ,对人外周血单核细胞E 玫瑰花结形成的激活率可达 5 2 .7%。无论有无ConA ,1× 10 -7,1× 10 -8mol·L-1的ProTα明显刺激小鼠胸腺细胞增殖 (P <0 .0 1) ;此外 ,一定浓度的ProTα能促进IL 2 ,IFN γ的分泌 (P <0 .0 5 )。结论　ProTα具有明显刺激小鼠胸腺细胞增殖和促进IL 2 ,IFN γ分泌的生物活性