异种神经脱细胞移植物修复周围神经缺损的实验研究

目的 探讨异种神经脱细胞移植物桥接大鼠坐骨神经缺损后的神经再生及其再生过程中免疫排斥反应. 方法用脱细胞兔周围神经作为移植物桥接大鼠坐骨神经1 cm缺损;术后3、5、8、11、15天检测血液中淋巴细胞占白细胞百分比;3个月后取移植物及腓肠肌,用甲苯胺蓝、乙酰胆碱酯酶（AchE）、琥珀酸脱氢酶（SDH）组化染色,光、电镜观察神经再生及腓肠肌运动终板的恢复情况. 结果术后大鼠血液中淋巴细胞占白细胞的百分比与正常大鼠相比较无显著性差异,3个月后大鼠术侧下肢足趾能分开,行走时后蹬动作有力,针刺足底有逃避反应,桥接物内见有大量再生的坐骨神经纤维,腓肠肌肌纤维上见有呈AchE阳性的运动终板和神经纤维.结论 异种神经脱细胞移植物桥接大鼠坐骨神经缺损具有促进其再生的作用.     

髓磷脂相关糖蛋白对周围神经影响的研究进展

髓磷脂相关糖蛋白(myelin associated glycoprotein,MAG)是一种定位于髓鞘轴突旁的施万细胞和少突胶质细胞上的跨膜糖蛋白,并在胶质和轴突之间发挥作用。它属于免疫球蛋白超家族中的唾液酸亚群,包含着5个免疫球蛋白样区域。MAG分为大、小两个亚型,这两个亚型在髓鞘形成和维持的不同阶段有着不同的表达。MAG的信号转导通路发生在髓鞘形成的少突胶质细胞或施万细胞以及有髓鞘轴突的轴浆中。它是一个双功能蛋白,对大多数神经元有抑制作用而对发育早期的背根神经节神经元有促进作用,即在神经发育的不同时期发挥不同的作用。随着对MAG研究的不断深入,通过调节其信号转导通路来促进神经再生成为这个领域研究的一个重点。     

μ阿片受体在大鼠结肠肠肌丛的神经化学特性

目的:探索μ阿片受体(MOR)在大鼠结肠肠肌丛的分布及化学神经解剖学特性。方法:取大鼠结肠右曲和左曲之间肠管行全层铺片,剥离粘膜层、粘膜下层和环形肌层,保留纵行肌层。运用免疫荧光组织化学双重标记技术染色,共聚焦显微镜下观察MOR在大鼠结肠肠肌丛的分布及与一氧化氮合酶(NOS)、肠血管活血肽(VIP)、P物质(SP)或降钙素基因相关蛋白(CGRP)等在肠神经细胞的共存关系。结果:免疫荧光组织化学染色显示:在大鼠结肠肠肌层,MOR阳性细胞聚集形成神经节,其阳性突起穿行于神经节之间形成网格状神经丛。在肠肌丛神经细胞内,可见MOR分别与NOS、VIP、SP、CGRP共存。MOR阳性神经纤维和终末分布于NOS阳性神经细胞周围,也可见部分NOS、VIP阳性神经纤维和终末分布于MOR阳性神经细胞表面。有大量SP和CGRP阳性神经纤维穿行于MOR阳性神经细胞之间并包绕于MOR阳性神经细胞的胞体周围。结论:在结肠的肠肌丛,MOR与抑制性和感觉性神经递质在肠神经细胞有共存,且相互之间有纤维联系,推测MOR可能介导了阿片类调节肠神经细胞内抑制性神经递质的释放,并可能对肠感觉信息的传递有调节作用。     

脱细胞异种神经移植体复合BMSCs修复大鼠坐骨神经缺损的研究

目的：对脱细胞异种神经的生物相容性进行评价,证明应用其复合BMSCs促进神经再生和功能恢复的效果。方法：采用化学萃取法制备兔的脱细胞神经,应用扫描电镜观察其超微结构;将BMSCs种植到神经支架构建神经移植体,体外培养后观察细胞形态;用构建的异种神经移植体桥接大鼠坐骨神经缺损,术后8周,检测胫前肌湿重比率,对再生神经进行组织形态学分析;并应用免疫荧光染色检测神经内NGF的表达。结果：脱细胞异种神经较完整地保留了天然立体的施万细胞基底膜管结构,完全地移除了神经内的施万细胞、轴突和髓鞘成分;在体外培养中支持种植的BMSCs黏附和生长。神经移植术后,与单纯异种脱细胞神经移植组相比,复合BMSCs的异种神经移植体移植能使胫前肌湿重比率增加、有髓神经纤维数目、髓鞘厚度和轴突直径增加;增加再生神经内NGF的表达。结论：异种脱细胞神经移植体具备天然的立体结构,移除了施万细胞、髓鞘等抗原成分;神经支架无细胞毒性,具有良好的细胞相容性;复合BMSCs的异种神经移植体可显著地促进神经再生及功能恢复。     

宁夏无果枸杞芽提取物对自然衰老小鼠SOD、MDA及NCAM的影响

目的观察宁夏无果枸杞芽醇提取物(FLE)对老年小鼠学习、记忆功能、血浆和脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量及神经细胞黏附分子(NCAM)在海马和皮质表达的影响。方法将60只13个月龄自然衰老KM小鼠分为老年对照组和FLE低剂量组(FLE1组)、FLE中剂量组(FLE2组)、FLE高剂量组(FLE3组),每组15只;另将15只6个月龄KM小鼠做为成年对照组。FLE1、FLE2、FLE3组分别用质量/体积百分比为5%、10%、20%FLE灌胃,0.2mL.(10g.d)-1,老年对照组和成年对照组灌胃等量生理盐水,连续8周。用Morris水迷宫实验检测各组小鼠学习记忆能力;黄嘌呤氧化酶法测定血清和脑组织SOD活性,硫代巴比妥酸法测定MDA水平;免疫组化SP法检测小鼠脑组织中NCAM的表达。结果与成年对照组比较,老年对照组小鼠的空间搜索平台停留时间百分比降低,血清SOD活性降低,MDA水平提高(P<0.01),脑组织中NCAM表达下调(P<0.01)。与老年对照组比较,FLE2、FLE3组的学习记忆能力均提高、血清和脑组织中SOD活性均增加,MDA水平降低,脑组织中NCAMs表达均上调(P<0.05)。结论 FLE能够改善自然衰老KM小鼠的学习记忆能力,其机制可能与FLE的抗氧化和上调脑组织中NCAM表达有关。     

S100β基因修饰的大鼠嗅鞘细胞与脱细胞异种神经桥接体共培养体系的生物学特性研究

目的:通过观察S100β基因修饰的SD乳鼠嗅鞘细胞(OECs)在脱细胞异种神经桥接体(ANX)的黏附情况及分泌功能,研究S100β修饰的OECs与ANX共培养体系的生物学特性。方法:用表达S100β的重组慢病毒感染SD乳鼠的OECs (S100β-OECs),利用流式细胞术检测细胞的感染效率;将感染成功的细胞注入通过化学萃取法制作的ANX内,通过扫描电镜及免疫荧光染色法观察各组OECs的黏附情况及分泌功能。结果:GFPOECs及S100β-OECs的感染效率分别为(73. 10±2. 69)%和(73. 50±4. 59)%;通过扫描电镜观察到ANX内原有细胞主要结构基本完全去除,仅保留了细胞的的基膜结构,GFP-OECs及S100β-OECs在ANX内沿基膜纵轴方向聚集生长;免疫荧光染色结果发现,生长在ANX上的OECs、GFP-OECs、S100β-OECs均表达NGF、BDNF等神经营养因子,且S100β-OECs组S100β蛋白表达高于其他两组(P 0. 05)。结论:S100β-OECs可稳定的过表达S100β蛋白,在S100β-OECs与ANX共培养体系中,S100β-OECs与ANX的生物相容性良好。     

宁夏无果枸杞芽水提物对老年小鼠心肌细胞抗氧化及凋亡蛋白表达的影响

目的 观察宁夏无果枸杞芽水提物对老年小鼠心肌细胞抗氧化能力及凋亡相关蛋白表达的影响.方法 将13个月龄自然衰老的C57BL/6J小鼠分为老年对照组和AEFLS低剂量组(AEFLS1组)、AEFLS中剂量组(AEFLS2组)、AEFLS高剂量组(AEFLS3组).AEFLS1组、AEFLS2组、AEFLS3组分别给予5、10、20 mg/kg的AEFLS灌胃,老年对照组灌胃生理盐水,连续8周.分别用黄嘌呤氧化酶法和硫代巴比妥酸法测定心脏组织SOD和MDA的水平;Western-blot技术和免疫组织化学方法检测小鼠心肌组织Bcl-2、Bax和Capase-3的表达.结果 与老年对照组比较,AEFLS2和AEFLS3组MDA水平降低,SOD活性升高,差异有统计学意义(P＜0.01).Western-blot结果:与老年对照组比较,AEFLS2和AEFLS3组的Bcl-2蛋白光密度值升高,Bax和Capase-3蛋白光密度值降低(P＜0.01);免疫组化结果:与老年对照组比较,AEFLS2和AEFLS3组Bcl-2蛋白免疫阳性表达均升高,Bax和Capase-3蛋白免疫阳性表达降低(P＜0.01).结论 中、高剂量的AEFLS能提高衰老小鼠的心肌组织抗氧化能力,上调Bcl-2的表达,下调Capase-3和Bax的表达,发挥抗心肌细胞凋亡的作用.     

喉癌组织中VEGF-D表达与淋巴管生成及预后的关系

目的 探讨血管内皮生长因子-D(Vessel endothelium growth factor D,VEGF-D)在喉癌组织中的表达规律及与淋巴管密度(LVD)和淋巴转移之间的关系及其在喉癌预后中的意义.方法 以45例经病理确诊的喉癌组织为实验组,以20例喉良性病变组织为对照组,采用免疫组化SP法对上述组织中VEGF...     

黄芪皂甙Ⅳ联合骨髓间充质干细胞移植对大鼠脑缺血/再灌注损伤海马神经元凋亡及相关基因表达的影响

目的 探讨黄芪皂甙Ⅳ联合骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植对缺血再灌注大鼠海马神经细胞凋亡及Bcl-2、Bax、Caspase-3表达的影响.方法 实验动物随机分为假手术组、模型组、BMSCs组、BMSCs+黄芪组.采用线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血(MCAO)模型,BMSCs组、BMSCs+黄芪组分别于建模成功后3 h...     

VEGF在小剂量超短波促进种植骨髓间充质干细胞脱细胞支架修复大鼠坐骨神经损伤中的表达

目的 探讨血管内皮生长因子(VEGF)在小剂量超短波对种植骨髓间充质干细胞(BMSC)脱细胞支架修复大鼠坐骨神经损伤中的表达.方法 将培养至第3代的大鼠BMSC注入已制备的脱细胞支架内,然后置于培养箱内联合培养3 d,无茵条件下缝合到神经缺损处.实验鼠分为3组,即达尔伯克改良伊格尔培养基(DMEM)组、支架内注射BMSC组和注射BMSC后应用超短波(USW)治疗组;超短波治疗组在术后2 d用小剂量超短波对移植动物的神经缺损处治疗;移植后第2,4,8和12周检测再生的神经中VEGF、S-100蛋白表达.结果 各组VEGF在损伤后再生即有表达,并随时间延长呈上升趋势,在第4周达到顶峰,超短波治疗组表达高于其他组(P<0.05).结论 VEGF在超短波治疗早期的高水平表达可加速种植的BMSC分化或迁移的速度,并能促使再生神经周围的血供增加.