小鼠Nanog基因的克隆及对人宫颈癌上皮细胞的作用

目的:克隆小鼠Nanog基因并构建带绿色荧光蛋白的真核表达载体pG-Nanog,观察其对人宫颈癌上皮细胞(Hela细胞)中的表达,旨在为进一步观察其对成体细胞的表型变化及细胞增殖奠定前期实验学基础。方法:实验于2006-03/09在西北农林科技大学陕西省干细胞研究中心完成。Nanog基因的克隆参照庄淑珍的方法。Nanog基因真核表达载体的构建参照GeneBank中的小鼠Nanog基因序列,以pNA992为模板扩增Nanog基因,PCR产物以BglⅡ和SacⅡ双酶切,同时将pEGFP-C1用BglⅡ和SacⅡ鉴定,将该质粒命名为pG-Nanog。Hela细胞用含10%新生牛血清的Dulbecco’s改良培养基(Dulbecco’sModifiedEagleMedium,DMEM)培养,转染Hela细胞。转染前1d,在6孔板的每个孔中接种1.2×105个细胞,待细胞生长至60%～70%汇合时,取pG-Nanog与空载体各4μg分别加入500μL无血清无抗生素的DMEM培养液中,同时将6μL稀释于500μL无血清无抗生素的DMEM(干粉)培养液中,将两者混合,室温静置20min,将复合物加入到细胞中,置37℃,体积分数0.05的CO2培养箱中转染24h后吸出复合物加入完全培养基,48h后观察荧光。合成内源对照β-actin,收集转染4d后的细胞提取RNA,反转录为cDNA,然后分别扩增Nanog基因和β-actin基因。采用RT-PCR的方法检测Hela细胞中Nanog基因的表达。结果:①pEGFP-C1载体经双酶切后获得约1kbp的Nanog基因真核表达载体片段,同预期结果相一致,测序结果同GeneBank中的序列同源性达到99.7%。②将转染48h后的Hela细胞置于荧光显微镜下观察,可见明显的荧光,转染pG-Nanog的细胞绿色荧光蛋白集中于细胞核,将转染4d后Hela细胞的总RNA进行RT-PCR检测,产物经琼脂糖电泳分析,只有转染pG-Nanog的细胞中才能够检测到Nanog基因的相应条带。③转染48h后,对细胞进行抗增殖细胞核抗原免疫组化染色,未转染细胞和转染空质粒细胞及转染pG-Nanog细胞染色结果均呈阳性,转染了pG-Nanog的Hela细胞与正常细胞和转染空载体的细胞相比细胞形态发生了一定的改变,细胞表面形成了许多突起。结论:小鼠Nanog基因的克隆、真核表达载体的构建及在Hela细胞中的表达均获得成功,并观察到Hela细胞发生了形态的改变。     

免疫细胞在动脉粥样硬化中的代谢重编程现象

动脉粥样硬化是以动脉血管壁脂质沉积为特征的慢性炎症性疾病,其中固有免疫细胞和适应性免疫细胞都参与疾病进程并发挥不同作用。这些免疫细胞的代谢重编程通过调节免疫细胞表型和功能进而调控疾病的进展。文章综述了动脉粥样硬化病程相关的主要免疫细胞的代谢途径变化,并对这些免疫细胞间代谢重编程的种类和机制进行总结。     

G蛋白偶联受体120激动剂促进巨噬细胞胆固醇流出的研究

目的:探讨G蛋白偶联受体120(GPR120)在巨噬细胞胆固醇流出中的作用及机制。方法:培养Raw264.7巨噬细胞,以50-200μmol/L的GPR120激动剂GW9508处理Raw264.7细胞18h。NBD-胆固醇负载法检测细胞胆固醇的流出率;MTS方法检测细胞的存活率;定量PCR和Western blot方法检测胆固醇流出相关转运体ABCA1、ABCG1和SR-B1的mRNA及蛋白表达水平;定量PCR检测核受体LXRα、LXRβ和PPARα、PPARγ的mRNA水平。结果:与对照组相比,100、150和200μmol/L的GW9508均提高Raw264.7细胞NBD-胆固醇流出率,分别提高了8%、10%和18%;ABCA1的蛋白水平分别上调了1.4倍、1.8倍和4.8倍, ABCG1的蛋白水平分别上调了1.3倍、3.2倍和5.1倍,但是不影响SR-B1的蛋白水平;而且,100和200μmol/L的GW9508分别上调ABCA1的mRNA水平3.6倍和6.8倍,上调ABCG1的mRNA水平1.6倍和3.3倍;同时,LXRα的mRNA水平也分别上调了0.6倍和1.25倍,且差异有统计学意义;但是不影响SR-B1及LXRβ、PPARα和PPARγ的mRNA水平。另外,50-200μmol/L的GW9508均不影响Raw264.7细胞的存活率。结论:GPR120通过LXRα上调ABCA1和ABCG1的表达而促进Raw264.7巨噬细胞的胆固醇流出。     

冠状动脉支架置入术后患者的心理护理

总结冠状动脉支架置入术后患者常见的心理问题,并提出相应护理对策。提出护理措施包括抗凝药物教育、有关植入支架再狭窄的教育、生活方式的教育、心理护理、医务人员充分尊重患者权利、放松疗法等。总结出现代护理职能已不再是单纯性照顾治疗患者,除注重患者本身的心脏疾病护理,同时还应给予心理护理、健康教育等多方面护理措施以提高患者的生活质量。     

miR-301a调节小鼠巨噬细胞中炎症因子的表达

目的探讨miR-301a对巨噬细胞炎症因子表达水平的影响,从microRNA角度阐明动脉粥样硬化的发病机制,为动脉粥样硬化的防治提供新的思路。方法高脂喂养Apo E-/-小鼠建立动脉粥样硬化模型,收集小鼠主动脉血管,利用real-time PCR检测组织中miR-301a的表达水平;利用脂质体在RAW264.7细胞中转染miR-301a mimic和miR-301a inhibitor,用real-time PCR检测细胞中miR-301a水平,并检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)和单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)的表达水平,用Western blot检测NF-κB抑制因子(NKRF)蛋白水平,用免疫荧光染色检测p65细胞定位。结果在高脂喂养的Apo E-/-小鼠主动脉血管壁组织中miR-301a的表达水平升高;在RAW264.7细胞中过表达miR-301a可抑制NKRF蛋白水平,促进p65细胞核定位,升高细胞中TNF-α、IL-6和MCP-1的mRNA表达;在RAW264.7细胞中低表达miR-301a可升高NKRF蛋白水平,促进p65细胞质定位,减少细胞中TNF-α、IL-6和MCP-1的mRNA表达。结论在高脂喂养的Apo E-/-小鼠主动脉血管壁组织中miR-301a表达水平升高;在RAW264.7细胞中miR-301a通过调节NKRF的表达影响p65活性进而调控TNF-α、IL-6和MCP-1的mRNA表达,提示microRNA在动脉粥样硬化发病的炎症机制中具有重要作用。     

间接测热法比较不同证型呼吸衰竭患者的静息能量消耗

目的应用间接测热法(IC)所测得数据比较ICU病房中呼吸衰竭的患者在不同中医证型下静息能量消耗(REE)。方法选入33例ICU病房中呼吸衰竭并采用机械通气辅助呼吸的患者,将纳入研究的患者进行中医辨证分型:痰热蕴肺型11例、肺气虚耗型11例、正虚喘脱型11例。分别用间接测热法测量出3组患者入院后第1、4、7天的静息能量消耗,比较3组患者之间静息能量消耗的差异,研究呼吸衰竭中不同症候的患者对能量的需求有无差异。结果 3次测量的各证型之间静息能量比较具有统计学意义(P0.05),其中患者入院后第1天静息能量消耗的测量值比较为:痰热蕴肺型肺气虚耗型正虚喘脱型(F=16.72,P0.05),患者入院后第7天静息能量消耗测量值比较为:痰热蕴肺型肺气虚耗型正虚喘脱型(F=4.22,P0.05),患者入院后第4天静息能量消耗测量值比较为:痰热蕴肺型正虚喘脱型肺气虚耗型(F=7.64,P0.05)。结论呼吸衰竭的患者在不同证型中静息能量消耗差异具有统计学意义,这为营养供给的准确性提供了客观指标,也为中医学辨证分型提供了客观依据和新的研究思路。     

重度子痫前期并发产后HELLP综合征及多脏器损害1例

1 病例资料患者张某,初产妇,30岁,孕1产0,孕29+4周,患者于2011年1月3日因"双下肢水肿,血压升高1个月"入院.入院前1月无明显诱因出现双下肢水肿,休息后无缓解,于外院查血压180/120mmHg,尿蛋白(++++),肝功能、出凝血指标、乙肝等化验均未见异常,无头晕头痛及视物模糊,无发热,为求进一步诊治收入住院(天津第一中心医院妇产科).入院查体:T36.5℃,HR72次/min,R16次/min,Bp 180/100mmHg;神清,浅快呼吸,皮肤黏膜无黄染及出血点,浅表淋巴结未触及,心、肺听诊未闻及异常,肝脾肋下未触及,腹膨隆,双下肢重度水肿(+++),神经反射正常.     

肿瘤坏死因子基因多态性与脓毒症易感性及预后间的关系

目的：确定肿瘤坏死因子基因多态性与脓毒症易感性及细胞因子产量间的相关性。方法：采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）分析正常人群和脓毒症患者肿瘤坏死因子（TNF）-α启动子-308位点及TNF-β第一内含子＋252位点基因的单碱基突变多态性之间的异同。采用双抗夹心酶联免疫吸附（ELISA）方法检测脓毒症患者血浆TNF-α和白细胞介素6（IL-6）的浓度。结果：45例脓毒症患者的TNFB2等位基因频率为67.78%,高于正常对照组的53.33%（P〈0.05）,TNFB2纯合子患者血浆TNF-α、IL-6浓度和病死率高于杂合子及TNFB1纯合子患者（P〈0.05）;而脓毒症组和对照组的TNF1和TNF2的基因频率差异无统计学意义（P〉0.05）,TNF1纯合子和TNF1/2杂合子之间的血浆TNF-α、IL-6浓度以及病死率的差异亦无统计学意义（P〉0.05）。结论：TNF-β第一内含子＋252位点的等位基因TNFB2与脓毒症的易感性和体内TNF-α、IL-6浓度有关。