纳米血管生成素-2小干扰RNA质粒制备及功能研究

[目的]制备血管生成素-2小干扰RNA(Ang-2siRNA)质粒纳米微粒,并观察其基因转染能力和基因沉默效果.[方法]应用分子克隆的方法构建Ang-2siRNA质粒,将其与聚乳酸、O羧甲基壳聚糖用水/油/水(W/O/W)双乳化溶剂蒸发法制备纳米微球,扫描电镜观察其形态和粒径.然后转染原代人脐带静脉内皮细胞,观察纳米Ang-2siRNA微粒干扰Ang-2基因表达的效果及其细胞保护功能.[结果]扫描电镜观察到Ang2siRNA纳米微球呈球形和椭球形,粒径150～200 nm,大小分布均匀,包封完整,分散性良好.有较强转基因能力,良好的RNA干扰效果和血管内皮细胞保护功能.[结论]成功制备纳米Ang-2siRNA微粒,并证实其载基因能力和RNA干扰效果,对血管内皮细胞损伤因素有良好保护作用,为进一步研究心肌梗死的血管修复机制奠定了坚实的基础.     

中医药治疗老年胆道术后61例临床体会

中医药治疗老年胆道术后６１例临床体会汤志华关键词中医药，老年，胆道术后随着人民物质文化生活水平的提高，我国人口年龄结构逐步趋向老龄化，临床上老年胆道疾患也逐渐增多，其中大部分需手术治疗．由于老年人特殊的生理病理特点，使之较青壮年更易出现手术后不适反应...     

P21Cip/WAF1及P27Kip1与增殖细胞核抗原在人骨髓间充质干细胞向

背景：P21Cip/WAF1、P27Kip1是两种重要的细胞周期的负调控因子，增殖细胞核抗原是反映干细胞增殖的指标。 目的：观察体外诱导人骨髓间充质干细胞向肝细胞分化过程中P21Cip/WAF1，P27Kip1及增殖细胞核抗原的表达变化。 设计、时间及地点：细胞学基因水平观察，于2006-12/2007-06在中山大学附属第二医院林百欣医学研究中心实验室完成。 材料：骨髓来源于中山大学附属第二医院行骨髓穿刺的健康供者。 方法：全骨髓贴壁筛选法体外分离培养人骨髓间充质干细胞，传至第5代后，加入含20 μg/L肝细胞生长因子、10 μg/L成纤维细胞生长因子4的opti-MEM I低血清培养基向肝细胞诱导分化。 主要观察指标：诱导后RT-PCR检测细胞内P21Cip/ WAF1，P27 Kip1及增殖细胞核抗原基因 mRNA的表达。 结果：骨髓间充质干细胞向肝细胞定向诱导后0，1，3，5，7 d，细胞内P21Cip/WAF1 mRNA表达的相对量逐渐升高(P < 0.01)，P27Kip1 mRNA表达的相对量无明显差异(P > 0.05)，增殖细胞核抗原mRNA表达的相对量除诱导后0，1 d无明显差异(P > 0.05)外，其余各时间点均逐渐降低(P < 0.01)。 结论：P21Cip/WAF1高表达抑制了骨髓间充质干细胞增殖，同时在其向肝细胞分化过程中起一定调控作用，P27Kip1可能并不起作用，增殖细胞核抗原的表达则与P21Cip/WAF1相反，呈逐步减少趋势。     

Livin基因在胆管癌组织中的表达及其临床意义

Livin基因是新近发现的凋亡抑制蛋白(inhibitor ofapoptosis protein,IAP)基因家族的新成员.它的表达产物Livin蛋白是迄今为止抗凋亡作用最强的IAP之一[1],在多数肿瘤组织中发现有Livin的异常高表达现象[2].我们采用免疫组化的方法检测Livin基因在肝外胆管癌组织中的表达,分析了其表达与临床病理和预后间的关系.     

顿服胺碘酮与静脉注射胺碘酮治疗阵发性心房纤颤的疗效观察

目的观察顿服胺碘酮与静脉注射胺碘酮对阵发性心房颤动(房颤)的治疗效果。方法选择67例阵发房颤患者随机分为2组:顿服胺碘酮组34例,给予胺碘酮30mg/kg,最大剂量为1800mg,一次性口服。静脉注射胺碘酮组33例,给予胺碘酮负荷量150mg静注后,继以1mg/min维持静点,依心室率情况调整胺碘酮剂量。转复率:顿服胺碘酮组88.2%(30/34),静脉注射胺碘酮90.9%(30/33),2组转复率比较无显著性差异(P>0.05)。结论顿服胺碘酮与静脉注射胺碘酮转复持续性心房纤颤效果相似但比静脉注射胺碘酮更方便。     

纳米血管生成素-2小干扰RNA质粒制备及功能研究

[目的]制备血管生成素-2小干扰RNA(Ang-2siRNA)质粒纳米微粒，并观察其基因转染能力和基因沉默效果。[方法]应用分子克隆的方法构建Ang-2siRNA质粒，将其与聚乳酸、O-羧甲基壳聚糖用水／油／水(W／O／W)双乳化溶剂蒸发法制备纳米微球，扫描电镜观察其形态和粒径。然后转染原代人脐带静脉内皮细胞，观察纳米Ang-2siRNA微粒干扰Ang-2基因表达的效果及其细胞保护功能。[结果]扫描电镜观察到Ang-2siRNA纳米微球呈球形和椭球形，粒径150～200nm，大小分布均匀，包封完整，分散性良好。有较强转基因能力，良好的RNA干扰效果和血管内皮细胞保护功能。[结论]成功制备纳米Ang-2siRNA微粒，并证实其载基因能力和RNA干扰效果，对血管内皮细胞损伤因素有良好保护作用，为进一步研究心肌梗死的血管修复机制奠定了坚实的基础。     

体外诱导人骨髓间充质干细胞分化为肝细胞样细胞的特征及功能

目的：观察人骨髓间充质干细胞体外培养定向分化为肝细胞样细胞的过程及其特征。方法：实验于2003—12／2004—05在中山大学附属第二医院林百欣医学研究中心实验室完成。人骨髓取自髂后上嵴骨髓穿刺的健康供者，来源于中山大学附属第二医院儿科患儿健康家属。全骨髓贴壁筛选法分离出骨髓间充质干细胞，体外扩增后以流式细胞仪鉴定其表面标志。取扩增5代的骨髓间充质干细胞，分为2组，分化组于加入20μg／L肝细胞生长因子和10μg／L成纤维细胞生长因子4的opti-MEMI低血清培养基中诱导分化，空白对照组则不加任何细胞因子。2周后，行细胞形态学观察，并检测成热肝细胞的糖原合成和尿素分泌功能(免疫细胞化学法检测甲胎蛋白、白蛋白及细胞角蛋白18，19表达，反转录-聚合酶链式反应检测甲胎蛋白、白蛋白基因mRNA转录水平，高碘酸-Schiff染色检测糖原及紫外分光光度法测定尿素氮合量)。结果：①流式细胞仪显示第5代骨髓间充质干细胞高表达表面抗原白细胞分化抗原29，不表达白细胞分化抗原34，11b。②分化组骨髓间充质干细胞至第14天，部分细胞分化为多角形的肝细胞样细胞。③免疫细胞化学法检测到细胞特异性表达甲胎蛋白、白蛋白及细胞角蛋白18，19，反转录-聚合酶链式反应显示有甲胎蛋白和白蛋白mRNA转录。④高碘酸-Schiff糖原染色可见胞浆内存在红色颗粒，呈阳性反应，培养液内尿素氮含量亦明显升高。⑤空白对照组骨髓间充质干细胞则未见上述各项变化。结论：在低血清培养体系中，采用成纤维细胞生长因子4和肝细胞生长因子联合诱导，证明人骨髓间充质干细胞在体外能定向分化为肝细胞样细胞，诱导后的骨髓间充质干细胞上有了成熟肝细胞的糖原合成和分泌尿素的特征性功能，表明骨髓间充质干细胞可作为肝细胞移植和人工肝的新型种子细胞。     

体外诱导人骨髓间充质干细胞分化为肝细胞样细胞的特征及功能

目的:观察人骨髓间充质干细胞体外培养定向分化为肝细胞样细胞的过程及其特征。方法:实验于2003-12/2004-05在中山大学附属第二医院林百欣医学研究中心实验室完成。人骨髓取自髂后上嵴骨髓穿刺的健康供者,来源于中山大学附属第二医院儿科患儿健康家属。全骨髓贴壁筛选法分离出骨髓间充质干细胞,体外扩增后以流式细胞仪鉴定其表面标志。取扩增5代的骨髓间充质干细胞,分为2组,分化组于加入20μg/L肝细胞生长因子和10μg/L成纤维细胞生长因子4的opti-MEMI低血清培养基中诱导分化,空白对照组则不加任何细胞因子。2周后,行细胞形态学观察,并检测成热肝细胞的糖原合成和尿素分泌功能(免疫细胞化学法检测甲胎蛋白、白蛋白及细胞角蛋白18,19表达,反转录-聚合酶链式反应检测甲胎蛋白、白蛋白基因mRNA转录水平,高碘酸-Schiff染色检测糖原及紫外分光光度法测定尿素氮合量)。结果:①流式细胞仪显示第5代骨髓间充质干细胞高表达表面抗原白细胞分化抗原29,不表达白细胞分化抗原34,11b。②分化组骨髓间充质干细胞至第14天,部分细胞分化为多角形的肝细胞样细胞。③免疫细胞化学法检测到细胞特异性表达甲胎蛋白、白蛋白及细胞角蛋白18,19,反转录-聚合酶链式反应显示有甲胎蛋白和白蛋白mRNA转录。④高碘酸-Schiff糖原染色可见胞浆内存在红色颗粒,呈阳性反应,培养液内尿素氮含量亦明显升高。⑤空白对照组骨髓间充质干细胞则未见上述各项变化。结论:在低血清培养体系中,采用成纤维细胞生长因子4和肝细胞生长因子联合诱导,证明人骨髓间充质干细胞在体外能定向分化为肝细胞样细胞,诱导后的骨髓间充质干细胞上有了成熟肝细胞的糖原合成和分泌尿素的特征性功能,表明骨髓间充质干细胞可作为肝细胞移植和人工肝的新型种子细胞。