通过基因芯片筛选创伤修复差异表达基因

目的通过基因芯片筛选同真皮间充质干细胞相关的创伤修复差异表达基因。方法利用贴壁生长的特性分离大鼠真皮间充质干细胞，用Hpure提取伤口液刺激前后dMSCs和创伤前后大鼠皮肤组织中总RNA。PCR扩增已构建抑制消减杂交差异表达文库中485个克隆的插入片断，送北京博奥制作基因芯片。提取的RNA反转录后分别同芯片杂交，找出在细胞水平和组织水平同时高表达的克隆。将这些克隆测序，进行生物信息学分析。结果分离的大鼠真皮间充质干细胞呈纺锤形，在体外显示多向分化潜能。抽提伤口液刺激前后dMSCs和创伤前后大鼠皮肤组织中总RNA，反转录后和基因芯片杂交，发现可能同创伤愈合相关的13条基因，其中热休克蛋白70（HSP70），基质金属蛋白酶3（MMP3），白细胞蛋白酶抑制因子（SLPI）等可能在创伤愈合中有重要意义。结论抑制消减杂交和基因芯片结合是筛选差异表达基因的一种有效方法。伤口液刺激前后dMSCs中差异表达基因的发现能为从基因水平探讨dMSCs参与创伤愈合的分子机制提供新的研究靶点。     

PBL教学模式在呼吸内科见习中的应用研究

目的探讨以问题为基础的教学法(PBL)和以授课为基础的教学法(LBL)在呼吸内科见习教学中的应用效果。方法随机将进入呼吸内科见习的100名学生均分为PBL教学组和LBL教学组,通过教学考核比较两种教学方法的效果,并对两组学生进行问卷调查。结果 PBL教学组学生的理论和实践考试成绩均优于LBL教学组,说明PBL教学模式能调动学生学习的积极性,提高学生解决临床问题的能力。结论 PBL教学模式优于LBL教学模式,它有助于激发学生学习兴趣和培养学生临床思维。     

美罗培南治疗医院获得性肺炎的临床观察

目的评价使用美罗培南治疗医院获得性肺炎(HAP)的安全性和有效性。方法使用前瞻性、开放性、非比较的方法研究美罗培南治疗医院获得性肺炎的安全性和有效性,在进入研究前,通过支气管肺泡灌洗或者血液培养进行病因学调查;入选病例使用美罗培南1g/8h静脉内给药,大部分患者的治疗时间是3~7 d。结果35例(66.04%)患者治愈或好转,6例(11.32%)死亡,有11例(21%)出现临床并发症,但同美罗培南无明显关系。结论美罗培南是有效、耐受性良好的药物,本研究中死亡率较低同诊断后首先使用美罗培南控制感染有关。     

创伤早期伤口液对体外培养真皮多能干细胞增殖迁移特性的影响

目的 探讨真皮多能干细胞在创伤修复启动中的作用.方法 采用前期建立的技术分离、纯化并扩增真皮多能干细胞、真皮成纤维细胞和血管内皮细胞;利用四唑盐比色试验(MTT法)检测不同时间、不同浓度伤口液对上述细胞的影响.在此基础上,观察伤后1 d伤口液对真皮多能干细胞贴壁力和迁移力等与创伤修复密切相关的指标变化.结果 伤后不同时相不同浓度伤口液对真皮多能干细胞增殖均具有显著刺激作用,但以伤后早期的伤口液作用最为明显.成纤维细胞和血管内皮细胞对伤口液反应均显著弱于真皮多能干细胞.伤口液作用后真皮多能干细胞贴壁力和迁移能力较对照组细胞显著增加.结论 真皮多能干细胞是创伤愈合,特别是创伤修复启动过程中的一种重要的间充质干细胞,对其深入研究有望为阐明创伤修复启动分子机制提供依据.     

血浆NGAL对哮喘慢阻肺重叠的诊断价值研究

目的：探讨血浆中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白（neutrophil gelatinase-associated lipocalin,NGAL）水平对哮喘慢阻肺重叠的诊断价值。方法：选择哮喘-慢阻肺重叠（asthma-COPD overlap,ACO）患者30例,哮喘患者35例,慢性阻塞性肺病（chromic obstructive pulmonary disease,COPD）患者60例及健康未吸烟者（对照）25例。收集受试者一般资料,完善肺功能检查,应用ELISA法检测受试者血浆NGAL水平。单因素方差分析评价血浆NGAL水平在ACO组、哮喘组、COPD组和对照组中的表达差异,分析NGAL与各混杂因素的相互关系,应用受试者操作特征曲线评价血浆NGAL水平对于区分ACO和非ACO的诊断学价值。结果：①ACO组和COPD组的血浆NGAL水平分别为（110.50±22.81） ng/mL和（127.40±27.57） ng/mL,均高于哮喘组[（85.79±20.02） ng/mL]和对照组[（86.54±23.46） ng/mL]。血浆NGAL水平在ACO组和哮喘组、ACO组和COPD组之间均有统计学差异（P=0.000,P=0.015）。②血浆NGAL水平与药后一秒钟用力呼气容积（forced expiratory volume in one second,FEV1）呈负相关（r=-0.422,P=0.000）,与吸烟指数呈正相关（r=0.500,P=0.000）。③血浆NGAL水平的AUC为0.565（P=0.273）。结论：血浆NGAL对于ACO、哮喘和COPD的鉴别有一定的参考价值,可能是ACO潜在的生物标志物。     

未吸烟人群慢性阻塞性肺疾病与肺癌危险关系的系统评价

目的:探讨未吸烟人群慢性阻塞性肺疾病与肺癌之间的相互关系,为预防决策提供依据。方法:计算机检索Pub Med、中文科技期刊数据库(VIP)、中国期刊全文数据库(CNKI)、万方数字化期刊全文数据库,筛选研究未吸烟人群慢性阻塞性肺疾病与肺癌之间关系的文献,对纳入的文献进行质量评价,采用Review Manager 5.3软件进行Meta分析。结果:共纳入9篇文献,包括肺癌组2 089例,对照组4 519例。Meta分析结果提示,未吸烟人群慢性阻塞性肺疾病与肺癌关系明显,合并OR值为1.46(95%CI=1.26~1.70)。这种联系在白种人明显(OR=1.58;95%CI=1.20~2.08),亚洲人中无统计学意义(OR=1.25;95%CI=0.98~1.59)。慢阻肺、慢性支气管炎、肺气肿合并OR值分别为1.46(95%CI=1.04~2.03)、1.64(95%CI=1.15~2.36)和1.47(95%CI=1.17~1.83)。结论:慢性阻塞性肺疾病与肺癌可能密切相关。     

白细胞蛋白酶抑制因子在真皮多能干细胞中的表达

目的研究白细胞蛋白酶抑制因子(secretory leukocyte protease inhibitor,SLPI)在真皮多能干细胞中的表达以及同伤口液刺激的关系。方法采用前期建立的技术分离、纯化并扩增真皮多能干细胞,收集伤后1d伤口液,比较伤口液刺激前后真皮多能干细胞和创伤前后大鼠皮肤组织中SLPI mRNA表达的变化。通过Western blot了解伤口液刺激前后真皮多能干细胞中SLPI蛋白表达的变化。结果分离、纯化的真皮多能干细胞形态较为均一,增殖能力强,RT-PCR和Western blot提示,SLPI在真皮多能干细胞中表达,伤口液刺激后表达增强。同时检测到SLPI在创伤后1d大鼠皮肤组织中表达升高。结论SLPI高表达可能是真皮多能干细胞参与创伤修复的重要途径之一。     

白介素13通过FOXA2调控气道上皮细胞粘液分泌

目的:研究白介素13(Interleukin-13,IL-13)对气道上皮细胞粘液分泌的效应并探讨其作用机制。方法:HBE16细胞在无血清培养基中培养24小时后加入IL-13刺激24小时,ELISA检测粘蛋白(MUC)5AC的表达;Western检测磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(Extracellular signal-regulated kinase 1/2,ERK1/2)和磷酸化c-Jun氨基端激酶1/2(c-Jun N-terminal kinase 1/2,JNK1/2的表达;使用SP600125阻滞JNK信号通路后检测MUC5AC蛋白表达;RT-PCR检测STAT4和STAT6的表达变化;EMSA检测通路下游核蛋白FOXA2的表达。结果:IL-13刺激24小时后MUC5AC和p-JNK1/2表达升高,而p-ERK1/2表达无显著变化;使用SP600125阻断JNK通路表达后,MUC5AC表达减弱;IL-13刺激后STAT4表达无显著变化,STAT6表达显著升高,FOXA2表达显著降低。结论:IL-13通过JNK-STAT6-FOXA2通路调控粘液分泌。     

氯胺酮对急性肺损伤大鼠HMGB1及TLR4表达的影响

目的研究氯胺酮对急性肺损伤大鼠肺组织中高迁移率族蛋白(HMGB1)及Toll样受体4(TLR4)表达的影响。方法创建大鼠脓毒症致急性肺损伤模型,随机分为对照组、脓毒症组、氯胺酮组。观察建模后大鼠的一般状态。于6h、12h、24h颈椎脱臼法处死大鼠,取肺组织,HE染色显微镜下观察大鼠肺组织结构改变。RT-PCR法检测大鼠肺组织HMGB1及TLR4表达的变化。结果对照组大鼠健康正常,肺组织结构清晰;脓毒症组大鼠30min后逐渐出现肺损伤症状,肺组织结构破坏;氯胺酮组大鼠肺损伤症状轻微,组织破坏程度轻。脓毒症组与氯胺酮组大鼠肺组织HMGB1、TLR4的表达均高于对照组;随着建模时间延长,脓毒症组及氯胺酮组大鼠肺组织HMGB1、TLR4表达均逐渐升高,且氯胺酮组两者的表达均低于脓毒症组。结论氯胺酮能够减轻脓毒症所致的急性大鼠肺损伤,这可能与其降低了肺组织的HMGB1、TLR4表达相关。