褪黑素减轻浸水-束缚应激大鼠胃黏膜损伤

目的探讨褪黑素(MT)对大鼠应激性胃溃疡的保护作用及对胃黏膜MMP-9、MMP-2和TIMP-2表达的影响。方法用浸水-束缚应激(WIRS)建立大鼠应激性溃疡模型。应激前30 min,分别腹腔注射褪黑素10、20、40和60 mg/kg。应激3 h后,观察大鼠胃黏膜病变,对溃疡指数(UI)进行评分;组织学观察胃出血;用real-time PCR及Western blot检测胃黏膜MMP-9、MMP-2和TIMP-2的mRNA及蛋白表达。结果 WIRS应激3 h能成功诱导大鼠应激性胃溃疡。预先注射MT可明显降低应激性胃溃疡大鼠的UI(P0.01),明显降低黏膜层炎性细胞浸润数(P0.01)。WIRS诱导大鼠胃黏膜MMP-9和MMP-2 mRNA和蛋白表达上调(P0.01),TIMP-2则下降;MT预处理后,MMP-2/MMP-9明显下降(P0.05或P0.01);而TIMP-2的mRNA及蛋白表达增加(P0.05或P0.01)。结论MT可能通过下调MMP-9和MMP-2表达,及增加TIMP-2表达,减轻WIRS诱导的大鼠应激性胃溃疡。     

高清胃镜下早期胃癌筛检策略的单中心前瞻性研究

目的　验证高清胃镜下早期胃癌筛检策略的效能。方法　前瞻性纳入2018年12月—2019年1月在解放军总医院第七医学中心行胃镜检查的849例年龄≥35岁的患者。在胃镜检查时,从未感染过幽门螺杆菌者对任何可疑病灶活检;溃疡型病灶于溃疡边缘活检;萎缩区域外,贲门部对白光下呈红色的病灶活检,非贲门部对具有清晰边界或白光下呈白色的病灶活检;萎缩区域内,隆起型病灶中具有清晰边界或顶部有不规则凹陷者活检,平坦/凹陷型病灶中边界不规则或窄带光下呈赭色者活检。此外,可对不符合上述策略但认为有必要活检的任何病灶进行活检。其后根据活检或手术病理,对胃癌高危患者进行胃镜随访,分析该策略对胃部早期肿瘤性病变的检出及漏诊情况,明确该策略的敏感度和阳性预测值。结果　共对548例患者的781处病灶进行了活检。在符合上述策略的327处病灶中,诊断上皮肿瘤性病灶16处（4.9%,16/327）,其中高级别肿瘤10处（3.1%,10/327）;而在不符合上述策略的454处病灶中,诊断上皮肿瘤性病灶仅1处（0.2%,1/454）,无高级别肿瘤。该筛检策略对胃上皮肿瘤性病灶和高级别肿瘤的阳性预测值均高于不符合策略而取活检者（4.9%比0.2%,χ2=19.49,P<0.001;3.1%比0,P<0.001）。共有146例（17.2%,146/849）患者接受胃镜随访,随访中发现2处黏膜内高级别肿瘤,符合筛检策略。该筛检策略在初次胃镜检查中检出了84.2%（16/19）的上皮肿瘤性病灶和83.3%（10/12）的高级别肿瘤。结论　高清胃镜下早期胃癌筛检策略可以高效地检出早期胃癌。     

高清胃镜下早期胃癌筛检策略初探

目的 初步总结高清胃镜下早期胃癌的筛检策略。方法 对2013年1月—2020年1月期间于解放军总医院第七医学中心行高清晰度胃镜检查且术后病理证实为早期胃癌或胃高级别上皮内瘤变（high grade intraepithelial neoplasia，HGIN）的469处病灶的胃镜图像进行重新判读，分析患者幽门螺杆菌（Helicobacter pylori，HP）感染状态，病灶是否位于萎缩区域内、是否位于贲门部、形态学类型、有无清晰边界、边界是否规则、病灶颜色等信息，总结早期胃癌和胃HGIN在高清胃镜下的形态学规律。 结果 469处早期胃癌或HGIN中，无HP感染史的病灶占2.1%（10/469），溃疡型病灶占7.7%（36/469）。可疑HP感染的非溃疡型病灶（423处）中，萎缩区域外病灶57处，其中贲门部病灶共28处，白光内镜下呈红色调者占82.1%（23/28）；非贲门部病灶共29处，具有清晰边界或白光内镜下呈白色调者占82.8%（24/29）；萎缩区域内病灶366处，其中隆起型病灶共73处，具有清晰边界或顶部有不规则凹陷者占95.9%（70/73）；平坦/凹陷型病灶共293处，边界不规则或窄带光成像下呈茶褐色调者占90.8%（266/293）。结论 根据胃内有无HP感染、病灶发生的部位和形态学类别的不同，以上内镜下形态特征可以作为高清胃镜下发现早期胃癌和HGIN的线索。     

Bmi1基因在内皮细胞促进胶质瘤细胞干性表型中的作用

目的 探讨B细胞特异的莫洛尼病毒插入位点1(Bmi1)基因在内皮细胞促进胶质瘤细胞干性表型中的可能作用.方法 以小鼠胶质瘤细胞系GL261和小鼠脑内皮细胞系b.END3为材料,采用Transwell双室细胞共培养、极限稀释法成球实验、实时定量PCR、Western印迹、流式细胞术、体内移植瘤实验以及siRNA基因干扰等方法,检测内皮细胞对胶质瘤细胞体外成球能力和体内成瘤能力、CD133阳性细胞比例、Bmi1基因表达的影响以及抑制Bmi1基因表达对上述现象的影响.结果 与胶质瘤细胞单独培养的对照组相比:(1)胶质瘤细胞与内皮细胞共培养后其体外成球能力明显增强,形成干细胞球数目明显增多(40个细胞/孔的浓度时为62.5％±1.5％比25.0％±4.6％,P=0.000),体积明显增大;内皮细胞与胶质瘤细胞共同移植后所形成的移植瘤出现早、体积更大[(0.798±0.297)比(0.362±0.123) cm3,P=0.000].(2)胶质瘤细胞与内皮细胞共培养后其CD133阳性细胞群比例增大(8.48％±0.78％比4.81％±0.37％,P=0.000).(3)胶质瘤细胞与内皮细胞共培养后Bmi1基因的mRNA(2.72±0.18比1.00±0.15,P=0.000)和蛋白表达明显增加.(4)利用siRNA干扰胶质瘤细胞Bmi1基因表达后,内皮细胞促进胶质瘤细胞干性表型的上述作用明显减弱,敲低Bmi1基因的GL261细胞共培养的CD133阳性比例显著低于共培养的普通GL261细胞(0.34％±0.21％比1.70％ ±0.69％,P=0.025).结论 内皮细胞可能通过上调胶质瘤细胞Bmi1基因表达促进胶质瘤细胞的干性表型.     

外周血SEPT9基因甲基化检测在老年结直肠癌筛查中的意义

目的探讨外周血SEPT9基因甲基化检测在老年结直肠癌筛查中的意义。方法筛查对象为1 407例军队退休干部体检者。IFOBT、TF、SEPT9基因甲基化检测三者任一结果为阳性,通知受试者行结肠镜检查。分别计算IFOBT、TF、IFOBT+TF(双联)、SEPT9基因甲基化检测和三者联合检测在老年结直肠癌筛查的性能指标。结果 1 407例军队退休干部体检者中1 369例体检者均进行了TF、IFOBT和SEPT9基因甲基化检测,至少1项结果为阳性者有176例(12.9%),其中96例(54.5%)接受了结肠镜检查,共检出9例结直肠癌和15例进展性腺瘤。使用IFOBT、TF、IFOBT+TF(双联)检测、SEPT9基因甲基化和三种方法联合检测对结直肠癌和进展期腺瘤的检出率分别为0.4%、0.1%、0.5%、1.2%、1.8%;SEPT9基因甲基化检测对结直肠癌和进展期腺瘤的检出率优于IFOBT+TF(双联)(1.2%vs 0.5%,P=0.04),但三者联合检出率较单纯SEPT9基因甲基化检测,差异无统计学意义(1.8%vs 1.2%,P=0.27),对筛查对象进行性别和年龄分层分析显示,各项检测指标男女差别不大,但SEPT9基因甲基化检测在70岁以上患者中筛查优势明显。结论 SEPT9基因甲基化是一种简单无创的结直肠癌筛查新技术,单独使用对结直肠癌和腺瘤的检出率显著高于IFOBT和TF联合检测,因此SEPT9基因甲基化检测可作为老年人结直肠癌早期筛查的首选策略。     

旋毛虫成虫排泄?分泌蛋白对卵清蛋白诱导的小鼠变应性鼻炎的保护作用

目的　探讨旋毛虫成虫排泄?分泌蛋白（Adult?worm excretory?secretory protein, AES）对卵清蛋白（Ovalbumin, OVA）诱导的小鼠变应性鼻炎的保护作用。方法　18只雌性BALB/c小鼠随机分为3组：A组为空白对照组，B组为变应性鼻炎组，C组为AES治疗组。A组小鼠给予PBS；B组小鼠经腹腔注射抗原佐剂混悬液进行基础致敏，隔日1次，共7次，后以5% OVA溶液滴鼻进行局部激发，每日1次，共7次，诱导建立变应性鼻炎模型；C组小鼠在诱导变应性鼻炎基础上，于基础致敏和局部激发时分别加入25 μg AES进行干预。末次激发后观察各组小鼠30 min，并进行行为学评分；采用酶联免疫吸附试验检测小鼠血清中IFN?γ、IL?4、IL?5、IL?10及TGF?β水平变化，HE染色后镜下观察小鼠鼻黏膜病理改变。结果　3组小鼠行为学评分差异有统计学意义（F = 110.12, P < 0.01）；B组小鼠行为学评分显著高于A组[（7.17 ± 0.75）分和（1.33 ± 0.52）分，P < 0.01]，且鼻黏膜病理损伤更为显著；经AES治疗后，C组小鼠行为学评分[（3.83 ± 0.75）分]显著下降（P < 0.01），鼻黏膜病理损伤亦显著缓解。3组小鼠血清中IFN?γ水平差异有统计学意义（F = 7.50，P < 0.01），B组小鼠血清中IFN?γ水平显著低于A组（P < 0.05）；经AES治疗后，C组小鼠血清中IFN?γ水平较B组显著升高（P < 0.05）。3组小鼠血清中IL?4 （F = 470.81，P < 0.01）、IL?5水平（F = 68.20，P < 0.01）差异均有统计学意义，B组小鼠血清中IL?4、IL?5水平均显著高于A组（P均 < 0.01）；经AES治疗后，C组小鼠血清中IL?4、IL?5水平均较B组显著降低（P均 < 0.01）。3组小鼠血清中IL?10（F = 174.91，P < 0.01）、TGF?β水平（F = 9.39，P < 0.01）差异均有统计学意义；经AES治疗后，C组小鼠血清中IL?10、TGF?β水平均显著高于B组（P均 < 0.05）。结论　旋毛虫AES对OVA诱导的小鼠变应性鼻炎有显著的保护作用。     

人食管鳞癌细胞系EC109中肿瘤干细胞的分离（富集）与鉴定

目的运用无血清成球培养法从人食管鳞癌细胞系EC109中分离/富集肿瘤干细胞,并对其＂干性＂特性进行鉴定。方法将EC109细胞接种至添加1XB27的干细胞培养基（DMEM/F12 1：1,无血清）,于poly-Hema包被的培养皿或低黏附培养板中培养,获取细胞球。采用实时定量PCR方法检测其干性相关转录因子的基因表达,连续传代和平板克隆形成实验评价其自我更新能力,免疫荧光细胞化学法检测其分化前后干性相关转录因子和分化标志物的表达变化,以裸鼠移植瘤实验检测其体内成瘤能力。结果培养5d能获得EC109细胞的细胞球。细胞球细胞高表达Oct4等干性相关转录因子,具有自我更新能力、分化潜能。裸鼠体内1×104个细胞球细胞能启动肿瘤形成,而单层培养细胞则需要1×105个细胞,且同数量级的细胞球细胞较单层培养细胞所形成的肿瘤体积大。结论无血清成球培养法能从食管鳞癌细胞系EC109获得细胞球,细胞球富集了肿瘤干细胞。     

口腔慢性移植物抗宿主病患者唾液中CXCL9、CCL17水平及临床意义

目的 探讨异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)后发生口腔慢性移植物抗宿主病(cGVHD)患者唾液中CXC-趋化因子配体9(CXCL9)、CC类趋化因子17(CCL17)表达及临床意义。方法 选择2017年3月—2021年5月贵州医科大学附属医院收治的98例接受allo-HSCT治疗的患者,其中36例发生口腔cGVHD(口腔cGVHD组),余27例cGVHD未累及口腔(其它cGVHD组),35例未发生cGVHD(非cGVHD组)。另选择25例体检健康志愿者为对照组。根据口腔表征评分将口腔cGVHD患者分为轻度组(12例)、中度组(13例)、重度组(11例)。检测唾液中CXCL9、CCL17水平,Spearman分析CXCL9、CCL17与口腔表征评分分级的相关性,受试者工作特征曲线(ROC)分析CXCL9、CCL17诊断口腔cGVHD的价值。结果 与其它cGVHD组、非cGVHD组、对照组比较,口腔cGVHD组唾液中CXCL9、CCL17水平均明显升高(F=110.610、233.494,P<0.05)。重度组唾液中CXCL9、CCL17水平高于中度组和轻度组,且中度组高于轻...     

TLR2在胶质瘤细胞GL261的高表达及其激活后增强迁移的作用

目的探讨小鼠胶质瘤细胞系GL261主要高表达的Toll样受体（TLRs）家族成员及其在GL261细胞迁移中的作用。方法运用实时荧光定量PCR检测TLRs在GL261细胞的表达情况;GL261细胞经TLR2配体Pam3CSK4刺激后,应用Transwell迁移实验检测其对迁移能力的影响;慢病毒稳定干扰TLR2表达后,观察Pam3CSK4刺激对GL261细胞迁移能力的改变。结果GL261细胞主要高表达TLRs家族中的TLR2;Pam3CSK4激活TLR2后显著增强GL261细胞迁移能力;沉默TLR2基因表达后,Pam3CSK4促进GL261细胞迁移能力的作用消失。结论小鼠GL261胶质瘤细胞TLRs家族中主要高表达TLR2,其激活具有促进GL261细胞迁移的作用,下调TLR2可抑制该细胞的迁移。     

旋毛虫成虫排泄?分泌蛋白对卵清蛋白诱导的小鼠变应性鼻炎的保护作用

目的　探讨旋毛虫成虫排泄?分泌蛋白（Adult?worm excretory?secretory protein, AES）对卵清蛋白（Ovalbumin, OVA）诱导的小鼠变应性鼻炎的保护作用。方法　18只雌性BALB/c小鼠随机分为3组：A组为空白对照组,B组为变应性鼻炎组,C组为AES治疗组。A组小鼠给予PBS;B组小鼠经腹腔注射抗原佐剂混悬液进行基础致敏,隔日1次,共7次,后以5% OVA溶液滴鼻进行局部激发,每日1次,共7次,诱导建立变应性鼻炎模型;C组小鼠在诱导变应性鼻炎基础上,于基础致敏和局部激发时分别加入25 μg AES进行干预。末次激发后观察各组小鼠30 min,并进行行为学评分;采用酶联免疫吸附试验检测小鼠血清中IFN?γ、IL?4、IL?5、IL?10及TGF?β水平变化,HE染色后镜下观察小鼠鼻黏膜病理改变。结果　3组小鼠行为学评分差异有统计学意义（F = 110.12, P < 0.01）;B组小鼠行为学评分显著高于A组[（7.17 ± 0.75）分和（1.33 ± 0.52）分,P < 0.01],且鼻黏膜病理损伤更为显著;经AES治疗后,C组小鼠行为学评分[（3.83 ± 0.75）分]显著下降（P < 0.01）,鼻黏膜病理损伤亦显著缓解。3组小鼠血清中IFN?γ水平差异有统计学意义（F = 7.50,P < 0.01）,B组小鼠血清中IFN?γ水平显著低于A组（P < 0.05）;经AES治疗后,C组小鼠血清中IFN?γ水平较B组显著升高（P < 0.05）。3组小鼠血清中IL?4 （F = 470.81,P < 0.01）、IL?5水平（F = 68.20,P < 0.01）差异均有统计学意义,B组小鼠血清中IL?4、IL?5水平均显著高于A组（P均 < 0.01）;经AES治疗后,C组小鼠血清中IL?4、IL?5水平均较B组显著降低（P均 < 0.01）。3组小鼠血清中IL?10（F = 174.91,P < 0.01）、TGF?β水平（F = 9.39,P < 0.01）差异均有统计学意义;经AES治疗后,C组小鼠血清中IL?10、TGF?β水平均显著高于B组（P均 < 0.05）。结论　旋毛虫AES对OVA诱导的小鼠变应性鼻炎有显著的保护作用。