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目的:观察黄芪多糖对小肠上皮细胞(IEC-6)迁移过程多胺信号通路Ca2+调节指标的影响,以探讨益气健脾中药黄芪促进胃肠黏膜损伤修复的作用机制。方法:划痕法造细胞迁移模型并观察黄芪多糖在无钙培养时对细胞迁移的影响;荧光定量PCR法检测TRPC1、STIM1和STIM2 mRNA表达;免疫荧光法检测STIM1蛋白分布及表达;Western Blot法检测TRPC1、STIM1和STIM2蛋白表达;免疫沉淀法检测STIM1/TRPC1、STIM1/STIM2蛋白复合体表达。结果:①无钙培养(去除胞外Ca2+内流来源)减弱了黄芪多糖促进细胞迁移的作用;②黄芪多糖对钙通道蛋白TRPC1的影响:能提高TRPC1mRNA和蛋白表达,逆转DFMO(多胺合成抑制剂)所致的TRPC1mRNA和蛋白表达降低;③黄芪多糖对Ca2+感受器正、负向调节蛋白(STIM1和STIM2)的影响:促进STIM1向胞膜移位并提高其表达,改善DFMO所致的STIM1向胞膜移位延迟及表达抑制;提高STIM1mRNA和蛋白表达,逆转DFMO对STIM1mRNA和蛋白表达的抑制;降低STIM2mRNA和蛋白表达,逆转DFMO对STIM2mRNA和蛋白表达的提高;④黄芪多糖对Ca2+调节蛋白复合体(STIM1/TRPC1、STIM1/STIM2)的影响:提高STIM1/TRPC1表达,逆转DFMO对STIM1/TRPC1表达的抑制;通过提高复合体中STIM1表达和降低STIM2表达而调节STIM1/STIM2表达,并能拮抗DFMO对STIM1/ STIM2表达的影响。结论:黄芪多糖促进IEC-6细胞迁移的作用与其影响Ca2+调节蛋白及蛋白复合体表达有关。 相似文献
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