生物素标记HBV DNA探针在肝石蜡切片上作原位杂交技术的研究——各型肝病时HBV DNA的定位及形态

报告用生物素标记HBV DNA探针原位杂交技术,现察75例慢性肝病者肝石蜡切片上HBV DNA定位及形态。共检出HBV DNA阳性者25/75例(33.33％)。其中:CPH2/7例、CAH10/21例、肝硬化0/3例、SS4/11例、无症状HBsAg携带者4/21例和HCC5/12例。HBVDNA在肝切片上呈棕黄色粗颗粒状,主要分布于肝细胞浆内,个别核内亦可见少数浅染棕黄色颗粒。阳性肝细胞分布有三种形式:Ⅰ型(弥漫型):25例中有4例(16％),Ⅱ型(局灶型):20例(80％),Ⅲ型(散在型):仅1例(4％)。颗粒在胞浆内亦有a型(密集)和b型(稀疏)之分。各型乙型肝炎HBV DNA在肝切片上定位与分布不完全相同,可能表示不同的病毒感染状态和复制的活跃程度。HCC只在癌旁肝组织内查见HBV DNA。     

热体克蛋白70在肝细胞癌中的表达及其意义

目的　探讨热休克蛋白 70 (HSP70 )在肝细胞癌 (HCC)中的表达及其意义。方法　采用免疫组化技术对 4 4例HCC和癌旁组织中HSP70的表达进行检测。结果　HCC中HSP70阳性率明显高于癌旁组织 (阳性率分别为 6 8.2 %和2 7.3% ,χ2 =7.3,P <0 .0 1)。HSP70表达与癌周淋巴细胞浸润 (χ2 =3.2 ,P >0 .0 5 )和转移 (χ2 =2 .3,P >0 .0 5 )无关 ,但与癌组织分化程度有关 (χ2 =4 .5 ,P <0 .0 5 )。结论　HSP70的异常表达与HCC的发生、发展有关 ,且可能是HCC发展、恶化的重要标志     

重型肝炎中甲、乙型肝炎病毒合并感染的探讨

报告经血清免疫学抗HAVIgM、抗-HBcIgM、HBV-DNA、HBsAg/IgM复合物以及乙肝三种抗原抗体系统检测48例重型肝炎中甲、乙型肝炎病毒感染情况。结果:31例为HBV感染,1例为HAV感染,1例未定型,15例(31.25％)为甲、乙型合并感染(混合感染7例、重叠感染8例)。15例中亚急性10例、慢性5例;死亡或恶化10例,与同期“单纯”感染的重肝比较,包括主要临床生化指标均无显著差异。有7例患者病程中有近期出现“急黄肝”症状的历史,随后病情突然加重;1例发生在住院期间,且血清抗-HAVIgM转阳,最后死亡。认为合并感染可使部分急、慢性肝炎病情加重,甚至发展成重型。应注意发现。     

维生素E对培养肝细胞抗脂质过氧化作用的影响

目的：观察维生素E对体外培养大鼠肝细胞抗脂质过氧化影响,探讨维生素E抗肝纤维化作用。方法：以TBA反应法观察4种不同浓度的维生素E对培养大鼠肝细胞上清丙二醛的影响;细胞计数观察合适浓度维生素E对肝纤维化大鼠肝细胞的保护作用。结果：不同浓度维生素E抗脂质过氧化作用不一,浓度过大或太小,其抗脂质过氧化作用均降低;合适浓度的维生素E对大鼠肝细胞有一定的保护作用。结论：在合适浓度下,维生素E对体外培养肝细胞有较强的抗脂质过氧化及保护作用。     

剪切HCV RNA的HDV核酶的设计及活性测定

目的：探讨丁型肝炎病毒（Hepatitis D virus,HDV）核酶用于抗丙型肝炎病毒（Hepatitis C virus,HCV）基因治疗的可能性。方法：以HDV基因组核酶的假结样结构为基础,优化其茎IV区,改建基底物结合区,获得3种针对HCV RNA的HDV核酶RzC1、RzC2和RzC3。体外转录获取含HCV RNA5‘－非编码区（5‘-noncoding region,5‘-NCR）及部分C区在内的底物RNA（HCV RNA 5‘－NCR－C）,并进行5‘端放射性标记。在pH7.5、37℃、Mg^2 20mmol/L和去离子甲酰胺2.5mol/L等条件下,将核酶和底物按摩尔比100：1混合,在不同的时间点观察剪切百分率。结论：RzC1、RzC2对底物的剪切百分率随时间延长而递增,90min分别达24.9％、20.3％;未观察到RzC3有剪切活性。结论：经过结构构优化的HDV基因组核酶在合适的位点能够剪切异源性RNA分子HCV RNA。     

HDV/HBV体外感染原代培养人胎肝细胞的实验研究

目的：建立ＨＤＶ／ＨＢＶ感染人胎肝细胞体外培养系统。方法：利用ＨＤＶ／ＨＢＶ阳性血清同时感染体外２的人胎肝细胞;应用ＥＬＩＳＡ、免疫组化法、原位杂交法和斑点法检测上清液和细胞中ＨＢｓＡｇ、ＨＤＡｇ、ＨＢＶＤＮＡ和ＨＤＶｃＤＮＡ。结果：上清液和细胞中ＨＢｓＡｇ、ＨＤＡｇ、ＨＢＶＤＮＡ和ＨＤＶｃＤＮＡ在感染后第２天至第１６天均可测出,其中上清液中ＨＢｓＡｇ、ＨＤＡｇ以感染后第４天至第１２天达高峰,结论     

原代培养人胎肝细胞体外感染HBV的研究

目的建立HBV感染人胎肝细胞体外培养系统。方法 首先分离、培养人胎肝细胞，然后应用HBV阳性血清感染体外培养的人胎肝细胞；每隔2d收集上清液和肝细胞，应用ELISA,免疫组化法、原位杂交法和斑点杂交法检测上清液和细胞中HBsAg和HBV DNA。结果 上清液中HBsAg在感染后2d～20d均可测出，以感染后4d～16d达高峰(A值在0．22左右)。免疫组化检测细胞中HBsAg呈阳性表达，原位杂交和斑点杂交检测细胞和上清液中HBV DNA也呈阳性表达。结论 HBV在原代培养人胎肝细胞中能稳定复制和表达至少达16d。     

57例HDV/HBV合并感染者的随访观察

为了解我国乙型肝炎患者感染HDV后临床及血清学变化,我们将血清HDV检测阳性,确诊合并HDV感染的57例患者进行20mo至108mo后的随访,现报告如下.     

生物素标记HBVDNA探针在肝石蜡切片上作原位杂交技术的初步研究

应用生物素标记探针的原位杂交技术,检测肝石蜡切片上HBVDNA,国内尚未见报道。本文用美国Enzo Biochem公司生产的生物素标记HBVDNA探针,成功地用原位杂交技术,观察了75例慢性乙型肝病患者肝石蜡切片上HB V DNA的定位和形态。 操作步骤参照M.Rijntjes方法,并作部分修改。简述如下:肝切片常规脱蜡至80％酒精去内源酶