转hCTLA4Ig树突状细胞诱导T细胞免疫耐受的实验研究

目的　通过逆转录病毒载体将人CTLA4Ig转染DCs ,探讨转人CTLA4Ig(hCTLA4Ig)树突状细胞 (DCsRev)诱导T细胞免疫耐受的可能性。方法　通过重组逆转录病毒将目的基因hCTLA4Ig转染到大鼠骨髓来源的DCs中 ,通过流式细胞检测目的基因hCTLA4Ig表达及DCs表面分子的改变 ;通过混合淋巴细胞反应 (MLR)检测DCsRev抑制T细胞免疫反应的能力。 结果　重组逆转录病毒转染DCs的最大效率为 91 2 5 % ;在功能上 ,DCsRev不但丧失了刺激MLR的能力 ,并且能够强烈抑制MLR中反应T细胞的增殖 ,而且抑制率与加入DCsRev的数量和DCsRev预处理反应T细胞的时间长短有关。具体来说 ,DCsRev数量在 10 3 ～ 10 4之间时 ,抑制率与剂量呈正相关 ,最高为 71 96%。而当DCsRev数量达到 5× 10 4抑制率下降为 5 9 2 %。在 12～ 48h之间 ,随着预处理时间的延长 ,抑制率却不断下降 ,预处理 12h抑制率最高 ,为 99 6%。但不做预处理 ,在反应开始时同时加入DCsRev ,则抑制率明显降低 ,仅为 5 9 2 %。对腹腔注射DCsRev大鼠脾T淋巴细胞体外分析表明 ,DCsRev也能在动物体内诱导耐受 ,但这种免疫耐受状态不能维持终身。结论　通过逆转录病毒载体将人CTLA4Ig转染DCs,不但DCs表面CD86分子被CTLA4Ig有效的封闭 ,并且能够诱导抗原特异性T细胞的免疫耐受     

异体皮肤移植后MIP-3α的表达及其抗体延长存活的研究

目的　研究异体皮肤移植后表皮MIP 3α的表达及其抗体延长移植皮肤存活的作用。方法　进行同种异体小鼠皮肤移植 ,免疫组化测定移植皮肤组织内MIP 3α的表达 ;局部应用MIP 3α抗体 ,观察其对移植皮肤存活的影响。结果　移植术后表皮MIP 3α表达增加 ,分别于术后 2 4h及第五天出现两个高峰 ,真皮及其皮下组织未见MIP 3α的表达 ;异体皮肤平均存活时间为 (7 5± 0 9)d ,MIP 3α单抗局部注射 1μg/ml治疗组存活 (8 3± 1 2 )d ,与对照组相比无明显差异 (P >0 0 5 ) ;10 μg/ml组与 5 0 μg/ml组分别为 (15 3± 2 3 )d与 (2 1 8± 1 6)d ,二者均显著延长移植皮肤的存活时间 (P <0 0 1)。结论　异体皮肤移植后表皮MIP 3α分泌增加 ,促进郎格罕细胞的迁移以进行抗原递呈 ,是移植排斥反应启动与进展的重要因素 ;应用MIP 3α抗体可有效延长异体移植皮肤的存活     

腺病毒载体介导CTLA4Ig基因治疗小鼠变应性鼻炎

目的 检测CTLA4Ig-重组腺病毒载体（Ad-CTLA4Ig）在变应性鼻炎治疗中的作用。方法 采用卵清蛋白（OVA）致敏和激发诱导小鼠变应性鼻炎。实验组在OVA激发前30min予以Ad-CTA4Ig腹腔注射。未转CTLA4IgcDNA的腺病毒载体（Adv）作对照。比较各组动物鼻部症状和鼻粘膜形态学改变，并采用ELISA法测定血清中OVA－特异性IgE水平。结果 CTLA4Ig重组腺病毒实验组小鼠鼻部症状和鼻粘膜病理改变不明显，并且血清中OVA－特异性IgE水平明显低于对照组（P＜0.05）。结论 Ad-CTLA4Ig可防治小鼠应变性鼻炎的发生，提示CTLA4Ig-重组腺病毒载体有可能运用于临床变应性鼻炎的治疗。     

载银磷酸锆纱布对烧伤创面常见细菌作用的实验研究

目的 了解载银磷酸锆纱布对烧伤大鼠创面感染常见细菌的抗菌效力。方法制作Wistar大鼠烫伤(以下称烧伤)感染模型，采用试管双倍稀释法测定载银磷酸锆及磺胺嘧啶银的最低抑菌浓度(MIC)及最低杀菌浓度(MBC)。观察大鼠创面用磺胺嘧啶银纱布、普通尢菌纱布、载银磷酸锆纱布(小水洗及水洗20次)后痂下组织的细菌计数和对创面愈合的作用。结果载银磷酸锆对金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠竹菌的MIC各为8、8、16mg／L，MBC各为16、8、32mg／L，为磺胺嘧啶银的2～8倍?大鼠创面用未水洗的载银磷酸锆纱布覆盖后，痂下细菌计数比用磺胺嘧啶银纱布低91％，比普通无菌纱布低99％未水洗的载银磷酸锆纱布对创面愈合的作用明显优于其他两种纱布，且其痂下组织细菌计数与水洗20次的效银磷酸锆纱布比较，差异无显著性意义(P＞0．05)。结论载银磷酸锆埘烧伤创面感染常见细菌有较强的抑制和杀灭作用，其敷料可作为治疗措施中新的选择。     

CTLA4Ig基因转染猪皮治疗中小面积浅Ⅱ度烧伤创面的随机对照试验

目的探讨CTLA4Ig基因转染猪皮治疗中小面积浅Ⅱ度烧伤创面的临床疗效与安全性。方法将自2005年5月～2007年5月我院收治的浅Ⅱ度烧伤患者60例随机分为2组，每组30例。基因转染猪皮治疗组：伤后创面简单清创，去除水疱，用复温后的基因转染猪皮覆盖创面。对照组：创面简单清创，除颜面、会阴部位创面外，均予包扎治疗，保留水疱皮，其后常规换药治疗。结果基因转染猪皮治疗组创面愈合时间5～10d，对照组为8～14d。基因转染猪皮治疗组疼痛明显减轻，未观察到寒战、高热等全身不良反应及局部排斥反应。两组均未出现瘢痕，但对照组部分病例出现色素改变。结论应用基因转染猪皮治疗中小面积浅Ⅱ度烧伤创面能明显缩短创面愈合时间，能明显减轻创面疼痛，减少换药次数，预防色素改变及瘢痕形成。     

人CTLA-4胞外区cDNA的克隆及Ig融合蛋白表达载体的构建

目的 克隆人ＣＬＴＡ－４胞外区ｃＤＮＡ－４胞外区与人免疫球蛋白ＩｇＧ Ｆｅ融合蛋白表达载体,为研究ＣＴＬＡ－４／Ｉｇ融合蛋白及其临床应用奠定基础。方法 从抗人ＣＤ３单克隆抗体和ＰＭＡ活化的健康人中国外周血淋巴细胞总ＲＮＡ中,扩增人ＣＴＬＡ－４基因胞外区ｃＤＮＡ片段,经ＨｉｎｄⅢ＋ＢｃｌⅠ双酶切后定向插入Ｉｇ融合蛋白表达载体。结果 从活化人Ｔ细胞中扩增出人ＣＴＬＡ－４胞外区ｃＤＮＡ片段,并将其正确插     

混合胸腺移植诱导免疫耐受和防止发生自身免疫性疾病的实验研究

目的：探讨混合胸腺移植诱导移植免疫耐受而不发生自身免疫性疾病的可行性。方法：BALB／c裸小鼠的肾包膜下植入胸腺，建立异种、同系与异种混合、同种与异种混合胸腺移植模型。4个月后，用流式细胞仪技术检测受者外周血中T细胞，用混合淋巴细胞培养了解T细胞对刀豆素A(ConA)以及同种异种淋巴细胞的反应性，异基因皮肤移植观察皮肤移植物存活期。术后6个月内比较各组发生自身免疫性疾病情况，观察胃的组织学变化，用ELISA法检测受者血清中抗DNA自身抗体。结果：胸腺移植后，受者T细胞重建良好；T细胞对ConA及无关的SD鼠淋巴细胞的反应强，而对移植胸腺供者来源的淋巴细胞无增殖反应；受者对胸腺供者来源皮肤移植物不发生排斥，而对无关的SD鼠皮肤移植物发生排斥。异种组发生自身免疫性疾病率高，异种组胃组织有明显的炎性损害，血清中自身抗体明显高，而混合组未观察到明显的炎性改变。结论：同系或同种、异种胎胸腺混合移植，可诱导供者特异性免疫耐受和防止器官特异性自身体免疫性疾病。     

细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4胞外区蛋白阻断小鼠变应性鼻炎的研究

目的探讨变应性鼻炎免疫治疗的新方法。方法构建细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4（cytotoxic T lymphocyte associated antigen-4，CTLA4）胞外区蛋白的酵母表达系统，以获取具有生物学活性的CTLA4胞外区蛋白；采用卵清蛋白（ovalbumin，OVA）致敏和激发诱导小鼠变应性鼻炎。CTLA4胞外区蛋白组在每次激发前予以CTLA4胞外区蛋白200μg／只腹腔注射，观察小鼠变应性鼻炎相关症状和鼻黏膜形态学改变。结果通过CTLA4胞外区蛋白的酵母表达系统可获得相对分子质量为28000、经蛋白免疫印迹（Western blot）鉴定的CTLA4胞外区蛋白。该纯化蛋白能显著抑制混合淋巴细胞反应中T细胞的增殖，抑制率为95．4％。变应性鼻炎组小鼠在OVA激发后出现流涕、喷嚏等症状；鼻黏膜出现组织水肿、充血、炎性细胞渗出等形态学改变。CTLA4胞外区蛋白组小鼠鼻部症状不明显，鼻黏膜无明显形态学改变。结论CTLA4胞外区蛋白可阻断小鼠变应性鼻炎的发生，其作用机理可能与其抑制T细胞活化有关。     

波形蛋白在增生性瘢痕中表达与作用的研究

目的 波形蛋白是中等纤维的主要成分之一，在细胞骨架与运动中起着重要的作用。探讨波形蛋白在增生性瘢痕中表达程度及对瘢痕增生与挛缩的作用。方法 收集患者不同时期增生与非增生瘢痕作为研究标本，利用基因芯片筛选出的差异基因，选择波形蛋白的基因特异片段，制成寡核苷酸探针与瘢痕组织切片原位杂交。同时，将各标本进行组织块培养，制成成纤维细胞爬片，进行原位杂交。结果 波形蛋白基因在3个月，6个月的增生性瘢痕中表达均明显强于9个月，12个月增生瘢痕及非增生瘢痕，阳性细胞比例也高于9个月，12个月增生瘢痕及非增生瘢痕。结论 瘢痕增生挛缩与细胞骨架运动的相关基因存在密切关系，而波形蛋白起到关键的作用。同时，抑制该基因的表达，可能实现减轻瘢痕增生与挛缩。     

同种与异种胎胸腺混合移植诱导供者皮肤移植免疫耐受

目的:探讨同种异种胎胸腺混合移植达到供者皮肤移植的耐受。方法:实验于2003-03/12在第三军医大学创伤、烧伤、复合伤实验室完成。将F344大鼠胎胸腺和C57BL/6小鼠胎胸腺混合移植到BALB/C裸小鼠的双肾包膜下4个月后,用流式细胞仪技术检测裸小鼠外周血中CD3+和CD4+T细胞,用单向混合淋巴细胞培养了解T细胞对ConA以及同种异种淋巴细胞的反应性,异基因皮肤移植观察皮肤移植物存活期。结果:①混合移植胎胸腺4个月后,受者裸小鼠外周血中CD3+和CD4+T细胞占总白细胞的25.9%,正常裸小鼠外周血中CD3+和CD4+量极少(2.43%)。②受者T细胞对ConA以及无关的SD鼠异种淋巴细胞的反应性强(刺激指数分别为23.23与12.75),而对供者F344及C57BL/6淋巴细胞不发生增殖反应(刺激指数分别为1.12与0.98)。③受者对供者F344及C57BL/6鼠皮肤移植物86d不发生排斥,而对无关的SD鼠皮肤移植物15d即发生排斥。结论:受体对胸腺供体来源的F344和C57BL/6皮肤及宿主本身的BALB/C皮肤移植耐受,而对无关的SD鼠皮肤移植物较短时间内即发生了排斥,并且抗DNA自身抗体水平与正常鼠相似。表明同种和异种胸腺混合移植后受体可重建有免疫功能的T淋巴细胞,并能诱导供者特异性免疫耐受的发生。