四引物突变特异性扩增系统法检测巨噬细胞移动抑制因子基因-173位点单核苷酸多态性分布

目的探讨中国浙江地区汉族人群巨噬细胞移动抑制因子（macmphage migration inhibitory factor，MW）基因-173位点单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism，SNP）分布。方法收集浙江地区142名无血缘关系健康个体的静脉血，提取DNA，分别应用四引物突变特异性扩增系统（amplification refractory mutation sysntem，ARMS）法和限制性片段长度多态性．PCR方法对MIF基因-173位点SNP多态性进行分型，并将PCR产物克隆及测序鉴定。结果MIF基因-173位点检测到3种基因型，其基因型分布皆符合Hardy-Weinberg平衡定律。四引物ARMS法和限制性片段长度多态性-PCR两种方法结果完全一致。统计分析显示，中国汉族人MIF基因-173位点等位基因和基因型频率分布与欧洲白人差异有统计学意义（P〈0．01），与日本人群的差异无统计学意义（P〉0．05）。结论四引物ARMS法是一种准确、快速和经济的SNP测定方法。MIF基因-173位点等位基因频率分布具有种族的差异性。     

黏质沙雷菌耐药性及碳青霉烯类抗生素耐药机制研究

目的 探讨黏质沙雷菌分离株的整体耐药特点,研究其对碳青霉烯类药物耐药的主要机制.方法 收集2007至2010年从宁波市第一医院不同病区分离(剔除重复菌株)黏质沙雷菌247株,用Vitek2 -Compact及配套革兰阴性杆菌药敏卡(GNS)检测其药敏情况,对筛选出的20株耐碳青霉烯类菌株进行PCR检测其耐药基因.结果 黏质沙雷菌对头孢曲松、氨曲南、环丙沙星的耐药率较高,分别为70.4％( 174/247)、64.8％ (160/247)、57.4％ (142/247)；对阿米卡星、庆大霉素、亚胺培南、美罗培南的耐药率较低,分别为:3.5％( 8/229)、5.4％( 13/241)、5.9％(14/237)、8.1％ (20/247).PCR检测20株对碳青霉烯类抗生素耐药的黏质沙雷菌中,1、7、12和16号的AmpC染色体基因表达是阴性参考菌株的98.3、102.3、121.5、87.3倍；共有12株黏质沙雷菌分离株同时携带CTX-M型超广谱β内酰胺酶(ESBLs)和KPC-2型碳青霉烯类酶.黏质沙雷菌所携带的CTX-M以CTX-M1、CTX-M2、CTX-M9为主；2株菌携带有SHV基因；2株菌携带有SME基因；2株菌携带有TEM基因；5株菌膜孔蛋白基因ompC和ompF均缺失；仅1株ompC基因缺失；2株菌ompF基因缺失.结论 黏质沙雷菌对β内酰胺类药物耐药的原因比较复杂,以产β内酰胺酶为主.开展对耐药菌株的进化和多耐药基因的研究,有利于合理应用抗菌药物,降低抗生索对耐药菌的选择压力及控制耐药菌株的蔓延.     

大肠癌IFN-γ基因+874位点的单核苷酸多态性

目的：探讨中国浙江地区汉族人群中IFN-γ基因 874位点多态性分布,分析其与大肠癌的相关性.方法：应用突变特异性扩增系统(ARMS)- PCR对健康者132例和大肠癌患者92例IFN-γ基因 874位点多态性进行分析,并将PCR产物克隆及测序鉴定.结果：大肠癌患者IFN-γ 874位点AA基因型频率为70.6%,显著高于正常人中的57.6% (P＜0.05).进一步分析显示IFN-γ 874位点AA基因型与患者的年龄、性别、肿瘤部位、Dukes分期无关.结论：IFN-γ 874位点AA基因型可能与大肠癌的发生相关.     

大肠癌的肿瘤坏死因子和白细胞介素-1基因多态性研究

大肠癌是常见的消化道恶性肿瘤之一，其发病机制仍不清楚。目前免疫遗传素质与大肠癌的关系越来越受到重视，肿瘤坏死因子（TNF）和白细胞介素-1（IL-1）是体内具有多种生物活性的重要细胞因子，有抗肿瘤、抗病毒感染及免疫调节作用。因此，本文对浙江地区汉族人群TNF-α和IL-1基因多态性分布进行研究，并分析其与大肠癌的相关性，阐明TNF—α和IL-1基因多态性在大肠癌发病中的作用。     

肠球菌的分离率及耐药性分析

肠球菌是人和动物肠道的正常菌群，但肠球菌也可定植在健康人上呼吸道、胆道和阴道等部位，在需氧的革兰阳性球菌中，肠球菌是仅次于葡萄球菌的重要医院感染致病菌。近年来，由于肠球菌对多种抗菌药天然耐药，对几乎所有临床常用的抗菌药能够产生获得性耐药，其已成为多重耐药的重要条件致病菌和医院感染的常见病原菌，由其引起的感染有逐年上升趋势，且对多种抗生素包括高剂量的氨基糖甙类抗生素的耐药性逐步升高，尤其耐万古霉素肠球菌的出现已引起广泛重视。因此我们对我院临床分离的264株肠球菌进行分类和耐药性分析，以期为临床防治肠球菌感染提供帮助，现报道如下。     

乙酸钙-鲍氏不动杆菌临床分离与耐药性的7年监测

目的了解1998~2004年乙酸钙-鲍氏不动杆菌在临床标本中的分离情况及其耐药趋势,为临床感染的预防和治疗提供参考资料。方法回顾分析1998~2004年间所有标本中乙酸钙-鲍氏不动杆菌的分离率,菌株在标本和病区的分布以及对14种抗菌药物的耐药率。结果乙酸钙-鲍氏不动杆菌的分离率有逐年升高的趋势,从1998年的0.18%增至2004年的1.48%;其在呼吸道标本的分离率最高(70.58%),其次是尿液(9.42%)、血液(4.63%);病区分布以重症监护室最高(47.28%),乙酸钙-鲍氏不动杆菌对14种抗菌药物的耐药率,1998年仅有氨曲南>50%,而到2004年仅头孢哌酮/舒巴坦的耐药率<50%,其他13种均>50%;其耐药率均呈递增的趋势,耐药性增幅列前3位分别为:头孢他啶11.1%~88.9%、亚胺培南0~64.8%、复方新诺明0~64.0%。结论乙酸钙-鲍氏不动杆菌的临床分离率在增加,其对多数抗菌药物有较高的耐药性,且耐药率呈逐年上升趋势,尤其是对亚胺培南耐药率的快速增长,应引起临床抗感染治疗的高度重视。     

危重病患者中的输血相关性移植物抗宿主病

目的分析ICU患者中输血相关性移植物抗宿主病(TA_GVHD)的发病情况并对影响因素进行探讨。方法女性患者输血前后自身对照,采取静脉血样,用PCR技术进行TA_GVHD插入基因片段及人Y染色体特异基因荧光检测。结果26例患者中,有14例患者输血后出现Y染色体特异基因片段检测阴性而同时TA_GVHD插入基因片段检测阳性的结果,发生率为53.8%。结论ICU中TA_GVHD发生率较文献报道明显增多,可能与ICU中危重症患者的免疫功能低下等有关。     

荧光定量RT-PCR法检测胃癌患者腹腔洗出液中CEA-mRNA含量的临床意义

目的探讨用荧光定量RT-PCR法检测胃癌患者腹腔洗出液中癌胚抗原mRNA(CEA-mRNA)含量的临床意义.方法采用荧光定量RT-PCR法检测98例胃癌患者及10例胃溃疡患者(对照组)手术中病灶切除前后腹腔洗出液中CEA-mRNA的含量,对不同病期及切除前后所测得的CEA-mRNA含量进行统计分析.结果本法可检测的下限约为10copies/ml,上限约为1.0×108copies/ml.检测所得荧光信号基线的循环数(CT值)与CEA-mRNA拷贝数对数值的相关系数为-1.0,错误率为0.0731.对照组腹腔洗出液CEA-mRNA的含量少于10copies/ml.胃癌患者腹腔洗出液中CEA-mRNA的含量病灶切除前为(0.0～5.62)×106copies/ml,几何均数为(172.11±63.07)copies/ml;切除后(256.4～4.67)×107copies/ml,几何均数为(606.32±76.21)copies/ml,两组的差别有显著性意义(P=0.008);切除前Ⅰ a Ⅰ b期与Ⅱ期、Ⅱ期与Ⅲa Ⅲb期、Ⅲa Ⅲb期与Ⅳ期比较,其CEA-mRNA含量的差别均有显著性意义(P=0.007、0.015、0.027);同样,切除后各期比较,其差别也均有显著性意义(P=0.004、0.012、0.023).切除前后未侵及浆膜与侵及浆膜者比较,其CEA-mRNA含量的差别有显著性意义(P=0.0008、0.0007);切除前后有淋巴结转移者与未转移者比较,其CEA-mRNA含量的差别有显著性意义(P=0.045、0.044);不同分化程度者切除前后其CEA-mRNA含量的差别均无显著性意义(P=0.17、0.12).结论荧光定量RT-PCR法检测腹腔洗出液中CEA-mRNA的含量有较好的线性范围,在临床应用中,对病期的确定、预后的估计以及术后的治疗方案制定均有一定的价值.     

重症监护室阴沟肠杆菌感染的耐药监测

目的对近年耐第三代头孢的阴沟肠杆菌进行β-内酰胺酶监测，以指导临床用药。方法收集来自重症监护室的各种标本中对第三代头孢耐药的阴沟肠杆菌165株，用三维试验检测ESBLs与AmpC酶。结果165株阴沟肠杆菌中，产ESBLs 120株，占72．7％，产AmpC酶40株，占24．24％。结论我院重症监护室对第三代头孢耐药的阴沟肠杆菌主要产ESBLs，体外试验表明对亚胺培南敏感率为97．66％，对其他抗生素敏感性差。     

前列腺液16s rDNA表达与慢性前列腺炎/慢性骨盆疼痛综合征疗效的关系

目的:探讨前列腺液16s rDNA的表达与慢性前列腺炎/慢性骨盆疼痛综合征(CP/CPPS,Ⅲ型前列腺炎)疗效的关系。方法:选择符合美国国立卫生研究院(NIH)诊断标准的CP/CPPS患者70例,其中Ⅲ_A型36例,Ⅲ_B型34例。门诊行前列腺液常规镜检和细菌、支原体,衣原体病原学检查,并对前列腺液中的16s rDNA进行PCR检测,参考病原学结果实施抗生素为主的综合治疗。以慢性前列腺炎症状指数(NIH-CPSI)为疗效指标进行治疗前后疗效比较。结果:CP/CPPS抗生素治疗组中,16s rDNA阳性者治疗显效率(81.4%)明显高于16s rDNA阴性者(63%)(P<0.01)。16s rDNA阴性的Ⅲ_A组总显效率较Ⅲ_B组低(P<0.05),而16s rDNA阳性的两组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:前列腺液16s rDNA的表达与CP/CPPS的疗效有相关性,16s rDNA的表达对前列腺炎的分型可能有一定参考意义。