人参总皂甙溶血作用的研究

本实验研究了人参总皂甙在体外对人红细胞及在体内对狗红细胞的溶血作用。结果表明：人参总皂甙在体外对人的红细胞有溶血作用，表现为游离血红蛋白升高，人参总皂甙在体内对狗的红细胞有溶血作用，表现为游离血红蛋白升高，结合珠蛋白下降，网织红细胞升高等。同时，人参总皂甙对肾脏有一定毒性，表现为血尿及蛋白尿，但这种损伤可能为可逆性的。     

TIMP-1对人卵巢癌A2780细胞生长的抑制作用

[目的]观察基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)基因表达水平对人卵巢癌细胞生长的影响.[方法]采用质脂体法将正、反义TIMP-1表达载体体外转染到卵巢癌A2780细胞中,用G418筛选稳定表达外源基因的克隆并用RT-PCR鉴定后扩大培养.以未转染组细胞作为对照,分别用直接计数法、四氮唑蓝(MTT)比色法、平皿克隆形成试验测定3组细胞的增殖活性,利用流式细胞术检测肿瘤细胞周期与凋亡的变化.[结果]与对照组相比,转染TIMP-1对卵巢癌细胞A2780呈现增殖抑制效应:生长曲线示增殖速度减慢(P＜0.01);在平皿上的集落形成能力下降(38±3.05)%;MTT法结果显示增殖抑制率增加(P＜0.01);细胞周期显示G0/G1期比例增加(58.41±0.94)%.转染反义TIMP-1对卵巢癌细胞A2780呈现促增殖效应:生长曲线示增殖速度加快(P＜0.01);在平皿上的集落形成能力增强(59±2.08)%;MTT显示增殖抑制率减小(P＜0.01);细胞周期显示G0/G1期比例减小(44.82±0.31)%.[结论]体外转染TIMP-1基因提高TIMP-1的表达可抑制卵巢癌细胞的增殖,TIMP-1可能成为卵巢癌基因治疗的一个新靶点.     

介绍一种简易快速过氧化酶染色法

过氧化酶存在溶酶体内,即A颗粒中,但事实上有A颗粒过氧化酶可为阴性;没有A颗粒,此酶也可为阳性。如淋巴细胞有A颗粒,但颗粒中没有此酶所以阴性;此外原粒细胞在光镜下,没A颗粒,但是此酶的溶酶体在生成中,所以过氧化酶可为阳性。过氧化酶对FAB白血病及MDS分型转型有重要价值,成为FAB白血病及MDS分型必不可少的     

大鼠肾小球系膜细胞活性氧簇JAK2/STAT5通路与TIMP-1之间的关系及对其凋亡的影响

目的:探讨高糖(HG)条件下大鼠肾小球系膜细胞(RMC)活性氧簇(ROS)、JAK2/STAT5信号通路与金属蛋白酶1组织抑制剂(TI MP-1)之间的关系及对其凋亡的影响。方法:在HG培养条件下的RMC中,根据是否使用DPI(NADPH氧化酶特异性抑制剂,可抑制ROS产生)和AG490(JAK2特异性抑制剂)刺激24 h,将RMC分为HG组、HG+AG490组、HG+DPI组和HG+AG490+DPI组四组。采用流式细胞技术检测各组细胞的凋亡率,RT-PCR检测各组RMC Bcl-xl、Cyclin D1、P27kip1、JAK2和TI MP-1 mRNAs的表达,Western blot检测胞浆中JAK2、STAT5及相应磷酸化蛋白的表达。结果:HG组、HG+AG490组、HG+DPI组和HG+AG490+DPI组的细胞总凋亡率分别为:(10.69±0.26)%、(20.52±0.51)%、(24.56±0.36)%和(26.01±0.28)%;加入AG490和(或)DPI后RMC总凋亡率明显升高(P<0.01),Bcl-xl、Cyclin D1、JAK2和TI MP-1 mRNAs表达显著减少,P27k...     

姜黄素对肝癌细胞株SMMC7721凋亡的研究

[目的]探讨姜黄素对人肝癌SMMC7721细胞株的生长凋亡作用及机制。[方法]用MTT法检测姜黄素对肝癌细胞系SMMC7721增殖的影响;应用流式细胞术检测不同浓度姜黄素对SMMC7721细胞凋亡及线粒体膜电位的影响。[结果]姜黄素对SMMC7721细胞具有明显的增殖抑制作用,在6.25～50μmol/L范围内成剂量依赖性,与对照组相比差异具有显著性意义,P〈0.01。姜黄素6.25、12.5、25、50μmol/L诱导SMMC7721细胞24 h的凋亡率为6.3%、7.2%、37.3%、72.3%,线粒体膜电位下降为6.3%、13.8%、47.8%和87.9%。[结论]姜黄素可通过诱导细胞凋亡而有效抑制肝癌细胞SMMC7721增殖,并与线粒体膜电位降低相关。     

华蟾素注射液对人肝癌HepG-2细胞增殖及凋亡的影响

[目的]探讨华蟾素注射液对人肝癌HepG-2细胞增殖及凋亡的影响。[方法]采用四甲基偶氮唑蓝还原法（MTT）观察华蟾素注射液对HepG-2细胞增殖的影响;采用倒置显微镜观察细胞形态学的变化;采用原位缺口末端标记法（TUNEL）及AnnexinV/PI双染色法检测细胞凋亡情况;采用逆转录—多聚酶链反应技术（RT-PCR）检测华蟾素注射液对HepG-2细胞TopoⅠ、TopoⅡmRNA水平表达的影响。[结果]华蟾素注射液对HepG-2细胞增殖具有抑制作用,其抑制效应具有时间和浓度依赖性;华蟾素注射液作用HepG-2细胞后可见凋亡形态学变化,部分细胞体积变小,染色质浓缩边集,呈时间和浓度依赖性（P〈0.05）;PT-PCR法检测表明华蟾素注射液抑制HepG-2细胞TopoⅠ、TopoⅡmRNA表达,表现浓度依赖性。[结论]华蟾素注射液能够抑制人肝癌HepG-2细胞增殖,诱导癌细胞凋亡,可能通过下调TopoⅠ、TopoⅡ表达实现的。     

肾小球系膜细胞金属蛋白酶1组织抑制剂对血管内皮生长因子及转化生长因子β1表达的影响

目的:探讨高糖(葡萄糖25mmol/L)条件下大鼠肾小球系膜细胞(RMC)金属蛋白酶1组织抑制剂(TIMP-1)对血管内皮生长因子(VEGF)及转化生长因子β1(TGF-β1)表达的影响。方法:用高糖培养基体外培养未转染及分别用pcDNA3空载体、人反义TIMP-1基因重组真核表达载体转染的RMC24h,将细胞分为未转染组、空载体组及反义组,并设正常培养条件下的RMC作为正常对照组。RT-PCR检测各组RMC TIMP-1、VEGF及TGF-β1mRNA的表达。Western印迹检测胞质中TIMP-1、VEGF及TGF-β1蛋白的表达。免疫荧光检测各组RMC胞质中VEGF的表达。结果:高糖培养条件下未转染组及空载体组RMC大鼠TIMP-1、VEGF及TGF-β1mRNA表达均较对照组明显增加(P<0.01),而此两组间相应指标表达差异无统计学意义;反义组大鼠TIMP-1、VEGF mRNA表达较未转染组显著降低(P<0.01),而TGF-β1 mRNA表达则无变化。Western印迹也得到相同的结果。免疫荧光检测发现,未转染组及空载体组VEGF荧光表达较对照组显著增强,反义组荧光则较未转染组明显减弱。结论:高糖可促进RMC TIMP-1、VEGF及TGF-β1表达增加。在高糖条件下,TIMP-1可能位于VEGF上游,促进其表达;而TGF-β1表达并不受TIMP-1调控,高糖可能通过其他途径上调其表达。     

肺癌患者外周血Survivin mRNA和CK19 mRNA的表达及临床研究

目的通过对非小细胞肺癌（Non-small cell lung cancer,NSCLC）患者外周血生存素（Survivin）mRNA及细胞角蛋白19（CK19）mRNA的检测;探讨其对NSCLC诊断的临床价值和意义。方法采用逆转录聚合酶链反应法（RT-PCR）检测55例非小细胞肺癌患者、60例对照组的外周血Survivin mRNA和CK19 mRNA的表达情况。结果 Survivin mRNA和CK19 mRNA在NSCLC组的阳性率显著高于对照组（P〈0.01）。阳性表达率与临床TNM分期有关（P〈0.01）,与性别、年龄、病理组织类型无关（P〉0.05）。Survivin mRNA和CK19 mRNA联合检测,高于任一单一指标的检测（P〈0.05）。结论外周血Survivin、CK19 mRNA可作为早期辅助诊断NSCLC及微转移的一个有价值的肿瘤标志物。联合检测有较高的检出率。     

逆转录病毒滴度测定新方法的实验研究

[目的]研究一种简便、快速的能获取较高病毒滴度的体外培养方法.[方法]用质脂体转移法将逆转录病毒载体pLXIn转染到包装细胞PA317中,用G418筛选出抗性克隆,扩大培养,再收集上清,并测定病毒滴度.比较不同方法产生病毒的多少,为提高病毒滴度而进一步感染靶细胞奠定良好的实验基础.[结果]改良后的新方法(低温32℃、无CO2条件以及反复冻融法)较常规方法(37℃、5% CO2)可提高病毒滴度至少10倍.PTs,Ptas和PLXIn组病毒颗粒数分别提高到1.3×105CFU/ mL、1.2×105CFU/ mL、1.5×105 CFU/ mL.[结论]逆转录病毒滴度测定新方法简便、快捷,能获取较高病毒滴度.