ERK1/2 MAPK通路在TIMP-1抑制高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞凋亡中的作用

目的 探讨细胞外信号调节激酶(ERK1/2)丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)通路在基质金属蛋白酶1组织抑制剂(TIMP-1)抑制高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞凋亡中的作用。 方法 将人正义、反义TIMP-1用脂质体法转染大鼠肾小球系膜细胞，并将细胞分为正常对照组、未转染组、空载体组、正义转染组和反义转染组。各组细胞分别用高糖(25 mmol/L)和(或)MEK(ERK1/2通路中的MAPK激酶)特异性抑制剂PD98059(50 μmol/L)刺激24 h。应用透射电镜观察细胞内部结构变化。Western 印迹观察磷酸化(p)的ERK1/2、P90rsk、Bad及总的P90rsk、Bad、Bcl-2蛋白的表达。 结果 加入PD98059后，各组细胞内可见凋亡小体形成、细胞皱缩、核固缩、染色体边集及膜泡样突变等现象，与未转染组比较，以反义转染组最明显，凋亡细胞数目最多；正义转染组细胞形态改变不十分明显，凋亡细胞数目相对较少。此外，加入PD98059后，ERK1/2、P90rsk、Bcl-2及Bad的磷酸化明显减少(P < 0.05)，ERK1/2和P90rsk的磷酸化以正义转染组最明显(P < 0.01)；总P90rsk、总Bad表达量在各组之间无显著差异。 结论 ERK1/2 通路在TIMP-1抑制高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞凋亡过程中起重要作用。     

金属蛋白酶组织抑制剂1抑制高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞凋亡

目的 探讨金属蛋白酶组织抑制剂1(TIMP-1)在高糖诱导的肾小球系膜细胞(MC)凋亡中的作用及机制。方法 用流式AnnexinV/PI双染法及吖啶橙染色检测大鼠MC经不同浓度葡萄糖作用后的凋亡率。用脂质体法将正义、反义人TIMP(hTIMP)-1转染到MC中。采用PCR及RT-PCR检测hTIMP-1的整合及大鼠内源性TIMP-1(rTIMP-1)、bax和bcl-2表达。用CaspACETM Assay System检测半胱氨酸天胱氨酸蛋白酶(caspase-3)的蛋白活性。结果 高糖以剂量及时间依赖的方式诱导凋亡,相关系数r分别为0.925、0.9867, P均 < 0.01。在葡萄糖浓度为30 mmol/L培养条件下, hTIMP-1正义转染组的MC 24 h凋亡率为(4.30±1.11)%, 48 h为(7.78±0.92)%, 与正常对照组[24 h(14.95±1.60)%, 48 h(43.03±4.20)%]及空载体组[24 h(16.50±0.83)%,48 h(40.82±2.46)%]相比, 细胞凋亡显著减少(P < 0.01);hTIMP-1反义转染组MC 24 h凋亡率为(22.5±1.60)%, 48 h为(53.68±3.40)%,与正常对照组和空载体组相比,细胞凋亡显著增加(P < 0.01)。高糖作用后, 正义TIMP-1下调MC bax mRNA的表达, 反义hTIMP-1使之表达上调。与对照组(A值0.1407±0.007)相比, 正义hTIMP-1组caspse-3活性(A值0.086±0.009)显著降低,(P < 0.01),反义hTIMP-1组caspase-3活性(A值0.186±0.02)显著增高,(P < 0.01)。TIMP-1转染不影响bcl-2 mRNA水平的表达。结论 TIMP-1能够抑制高糖诱导的MC凋亡,这种作用部分是通过bax及caspase-3途径来实现的。     

肝病患者血脂变化的临床价值

目的：探讨肝病患者血清总胆固醇（TC），甘油三酯（TG），脂蛋白胆固醇（HDL－C，LDL－C），载脂蛋白（ApoA-I,ApoB100)的变化及临床意义。方法：测定肝病患者（肝炎，肝硬化，肝癌）153例的血清TC，TG，HDL－C，LDL－C，ApoA-I,ApoB100的水平。结果：与正常对照组比较，肝病患者血脂的各项指标均发生显著变化（P＜0．05）。结论：血清脂类水平可反映出肝脏脂类的代谢状况，对肝病的诊断和治疗具有一定的应用价值。     

ERK1/2通路在TIMP-1抑制大鼠肾小球系膜细胞凋亡中的作用

目的探讨细胞外信号调节激酶(ERK1/2)通路是否参与基质金属蛋白酶抑制剂(TIMP-1)抑制大鼠肾小球系膜细胞的凋亡。方法选择大连医科大学附属第一医院2005年8月至2006年2月应用人正、反义TIMP-1转染大鼠肾小球系膜细胞,分别用高糖(25mmol/L)和MEK1特异性抑制剂PD98059(50μmol/L)刺激24h,采用流式细胞仪检测细胞凋亡情况;逆转录聚合酶链式扩增(RT-PCR)观察细胞外信号调节激酶信使RNA(ERK1 messenger RNA)的表达;酶联免疫吸附实验(ELISA)方法检测胞浆中p-ERK1/2的表达情况。结果(1)未加PD98059的未转染组、空载体组、正义转染组及反义转染组各组细胞的凋亡率分别为(12.10±2.21)%、(11.90±3.34)%、(5.50±0.50)%和(20.70±3.41)%;正义转染组的凋亡率明显低于未转染组(P<0.01);反义转染组凋亡率高于未转染组(P<0.05)。加入PD98059后各组细胞的凋亡率明显增加。(2)加入PD98059后,各组细胞ERK1mRNA的表达较相应未加PD98059各组明显上调;以正义转染组上调最为明显。(3)ELISA结果显示:加入PD98059后,p-ERK1/2较相应未加PD98059各组明显下调(P<0.05),以正义组下调最为明显(P<0.01)。结论ERK1/2信号传导通路是TIMP-1抑制高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞凋亡的主要途径之一。     

大鼠重症急性胰腺炎时急性肺损伤的实验研究

目的　研究内毒素 (endotoxin ,ET)、细胞因子 (cytokine,CK)、氧自由基 (oxygenfreeradi cals ,OFR)等在重症急性胰腺炎 (severeacutepancreatitis,SAP)时急性肺损伤 (acutelunginjury ,ALI)发病机制中的作用。方法　采用胰管逆行注射 1 5 %去氧胆酸钠制成大鼠重症急性胰腺炎时ALI模型。选用纯雄性健康Wistar大鼠共 4 0只 ,体重 2 2 0～ 2 5 0g,随机分成两组 :假手术对照组 (Sham ,n =10 ) ;SAP模型组(SAP ,n =30 ) ,分别于造模后 2 4h活杀。测定动脉血气 ,血清淀粉酶的含量 ,血清内毒素及血清和肺组织匀浆中的TNF α、IL 6、MDA、SOD的含量 ,肺湿 /干系数以及肺组织病理学改变。结果　SAP组血清内毒素 ,血淀粉酶 ,血清及肺组织匀浆中TNF α、IL 6、OFR均较Sham组明显升高 (P <0 0 1) ;动脉血气显示肺损伤严重 ,肺湿 /干比值较Sham组明显升高 ,肺通透性明显升高 ,肺病理学形态改变加重。结论　ET、TNF、IL 6、OFR在SAP时ALI发生发展中起了重要作用     

多发性骨髓瘤免疫表型特征及其意义

本研究探讨多发性骨髓瘤细胞的免疫表型特征及其意义。采用流式细胞仪多参数直接免疫荧光技术、CD45/SSC设门,对31例多发性骨髓瘤患者骨髓瘤细胞标记CD138、CD38、CD56、CD117、HLA-DR、CD3、CD7、CD13、CD33、CD19、CD20、CD22、CD34进行检测,并辅以瘤细胞的形态学检查。结果表明:形态学检查观察到瘤细胞比例为10%-68%,CD45/SSC设门证实可疑瘤细胞比例为9.72%-67.77%;抗原阳性表达比例分别为CD13861.29%,CD38 100%,CD56 46.15%,CD13 70.00%,CD33 29.03%,HLA-DR74.19%,CD117 33.33%,其余抗原均为阴性表达。结论:CD45/SSC设门技术可以较准确地设定需要分析的多发性骨髓瘤细胞群,与形态学分类瘤细胞的比例相接近;瘤细胞以表达CD138、CD38、CD56抗原为主,部分患者可伴有髓系抗原CD13、CD33、CD117表达,有关这些抗原表达的生物学意义尚待进一步研究。     

慢性淋巴细胞白血病免疫表型及凋亡相关蛋白分析

目的 探讨慢性淋巴细胞白血病(CLL)免疫表型和凋亡相关蛋白表达特征及其临床意义.方法 应用CD45/SSC设门方案,通过三色流式细胞术对150例CLL患者、105例急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)患者骨髓或外周血进行免疫分型.结果 150例CLL患者均高表达CD19;HLA-DR、CD20、CD5、CD22、CD38、CD23阳性率依次为96.67％、95.33％、84.67％、86.67％、40.67％、60.66％;CD10、cCD79a、CD3、CD25、CD34、ZAP70、FMC7阳性率较低,依次为3.33％、15.33％、4.67％、1.33％、3.33％、11.43％、8.67％.其他抗体均无表达;与B-ALL患者相比,CLL患者CD5、CD20阳性率升高(P＜0.05),CD10、CD34、CD22、Ccd79a阳性率降低(P＜0.05),CD19、HLA-DR表达率无统计学差异(P＞0.05).CLL患者凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax阳性率分别为74.67％和7.33％.结论 CD5、CD20、CD19是CLL特异性免疫表型,ZAP70、CD38可作为预后判断指标,CLL细胞Bcl-2高表达、Bax低表达,在疾病发生、发展中意义重大.     

TIMP-1抑制大鼠肾小球系膜细胞凋亡与磷脂酰肌醇3激酶/丝/苏氨酸激酶通路的研究

目的探讨磷脂酰肌醇3激酶(phosphoinositide-3-kinase,PI3K)/丝/苏氨酸激酶(serine thre-onine kinase,AKT)通路在基质金属蛋白酶组织抑制剂1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1)抑制高糖诱导大鼠肾小球系膜细胞(rat mesangial cells,RMC)凋亡中的作用和机制。方法(1)脂质体法将正、反义人TIMP-1(hTIMP-1)及空载体转染到大鼠肾小球系膜细胞。(2)Annexin V/PI双染法流式检测系膜细胞凋亡率。(3)Caspase9/Mch6Colorimetric Assay试剂盒检测Caspase9活性。(4)Western blot检测BAD、phospho-BAD、AKT、phospho-AKT蛋白水平。结果与对照组(1·06±0·08)%相比,正义转染组细胞凋亡率降低[(4·51±0·50)%,P<0·05],反义转染组凋亡率显著提高[(24·97±3·64)%,P<0·05],LY294002的加入可部分抵消TIMP-1的抗凋亡作用。TIMP-1的高表达可下调Caspase9活性(0·111±0·064,P<0·05),低表达可上调Caspase9活性(0·461±0·012,P<0·05)。正义TIMP-1能提高细胞phos-pho-BAD、phospho-AKT的蛋白水平,而反义TIMP-1的两种蛋白水平明显减少,且该作用可被LY294002阻断。结论(1)PI3K/AKT通路参与TIMP-1抑制高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞凋亡过程。(2)BAD在其中起重要作用。(3)AKT对Caspase9的抑制亦起主要作用。     

糖尿病患者血清GAD-Ab、ICA、IAA联合检测的临床意义

[目的 ]探讨糖尿病患者血清谷氨酸脱羧酶抗体 (GAD -Ab)、胰岛细胞抗体 (ICA)和胰岛素自身抗体 (IAA)的联合检测在临床中的重要意义。 [方法 ]用ELISA法测定 4 3例 1型糖尿病 (ID DM )患者、5 5例 2型糖尿病 (NIDDM )患者和 5 0例正常人血清中的GAD -Ab、ICA、IAA。 [结果 ]1型糖尿病组中GAD -Ab、ICA、IAA的阳性率分别为 76 .7%、37.2 %、2 5 .6 % ;2型糖尿病组中 3种抗体的阳性率分别为 9.1 %、1 0 .9%、1 0 .9% ;正常对照组中GAD -Ab、ICA、IAA均为阴性。 1型糖尿病患者的GAD -Ab、ICA、IAA阳性率都高于 2型糖尿病患者 (P <0 .0 5 )及正常对照组 (P<0 .0 5 )。 [结论 ](1 )测定GAD -Ab在糖尿病分型及预测中优于ICA和IAA。 (2 )GAD -Ab、ICA、IAA的联合检测是鉴别 1型糖尿病和 2型糖尿病的重要血清学指标。 (3)在预测 1型糖尿病发病及早期诊断中 ,GAD -Ab、ICA、IAA的联合检测可提高检出阳性率 ,避免漏诊 ,也提高了诊断的特异性及敏感性     

流式细胞术检测多发性骨髓瘤免疫表型的研究

目的 探讨多发性骨髓瘤(MM)细胞的免疫表型特征,为临床提供早期诊断、治疗及预后判断的依据.方法 采用多色流式细胞术,通过CD45/SSC设门的方法.分析118例MM骨髓标本的免疫表型,并选取15例正常人浆细胞作为对照组.结果 118例MM患者中CD138、CD38、CD117、CD56、CD33、CD13、CD9、Lambda、Kappa、HLA-DR的阳性率依次为91.53％、94.92％、44.07％、72.03％、25.42％、17.80％、29.66％、39.83％、30.51％和62.71％,其他抗体阳性率极低或均不表达.结论 流式细胞术免疫分型是检测MM细胞的有效方法,MM细胞的免疫分型有助于MM的准确诊断及预后监测.