细胞内游离Ca2+在发育中大鼠皮层神经元无镁诱导惊厥性损伤中的作用

目的: 观察细胞内游离Ca2+([Ca2+]i)在培养的不同发育阶段皮层神经元无镁诱导惊厥性损伤中的作用,探讨惊厥性脑损伤年龄依赖性的可能机制.方法:体外培养6 d、17 d的胚胎大鼠皮层神经元用无镁细胞外液处理3 h,或于无镁处理前用NMDA(N-甲基-D-门冬氨酸)受体拮抗剂或Ca2+通道阻滞剂预处理,用MTT代谢率测定的方法检测神经元损伤,以Fluo-3作标记用激光共聚焦显微镜扫描的方法检测[Ca2+]i.结果:体外培养6 d、17 d的神经元单纯无镁组MTT代谢率较同期对照组降低.应用MK-801 10 μmol*L-1、AP-5 50 μmol*L-1、尼莫地平10 μmol*L-1预处理后再给无镁处理,培养6 d、17 d的神经元MTT代谢率均不同程度高于同期单纯无镁组.培养6 d、17 d的神经元相对荧光强度之间差异有显著性,两者与基线荧光强度比较差异亦有显著性.应用上述各种拮抗剂后,[Ca2+]i改变的峰值均明显低于同期单纯无镁组.结论: 在体外不同发育阶段的神经元,短暂无镁处理诱导惊厥样放电所引起的神经元线粒体功能损伤以及[Ca2+]i改变程度不同.这种[Ca2+]i改变的年龄依赖性可能是惊厥导致神经元损伤的年龄依赖性的机制之一.NMDA受体-Ca2+通道激活是导致这种[Ca2+]i改变及神经元损伤的关键环节.     

残胃粘膜异型增生细胞核DNA含量分析及临床意义

采用自动化图像分析技术对47例残胃粘膜异型增生细胞核进行DNA含量测定,并与15例无异型增生和10例残胃癌标本进行比较。结果显示:其DNA含量及细胞核面积、周长、最大径和最小径均随异型增生程度的加重呈递增改变(P<0.01),而形状因子则呈递减改变(P<0.05);DNA含量直方图呈规律性改变,特别是重度异型增生与残胃癌在生物学特性方面具相似性。因此,测定细胞核DNA含量可为残胃粘膜异型增生的分级、随访及癌变预测提供客观依据。     

骨肿瘤穿刺活检的DNA含量图像法分析

应用图像分析仪检测４７例骨肿瘤穿刺组织的肿瘤细胞核ＤＮＡ含量。结果表明恶性骨肿瘤ＤＮＡ参数ＤＩ，２．５ＣＥＲ，５ＣＥＲ显著高于良性，骨巨细胞瘤介于良恶之间。两组预后不同骨巨细胞瘤的ＤＩ，２．５ＣＥＲ有显著性差异，提示ＤＮＡ含量与肿瘤生物学行为有密切关系。术前穿刺ＤＮＡ含量分析，有助于了解肿瘤的增殖能力，作为选择治疗方案，评估预后的参考。     

3种抗真菌生药活性成分对两种真菌细胞遗传物质的影响

目的　研究抗真菌生药活性成分对真菌细胞遗传物质的影响,以期发现其抗真菌的作用机理。方法　把对照组及用药组真菌细胞进行激光扫描共聚焦显微镜观察并作细胞扫描图像分析,从而定量描述细胞形状、面积和DNA,RNA含量。结果　用药组细胞形态及DNA,RNA含量发生不同变化。结论　澳洲茄胺、紫檀　和白鲜碱直接或间接影响了真菌细胞遗传物质的正常合成以至不能完成正常细胞周期,从而抑制真菌生长甚至导致死亡。     

KIAA0649多克隆抗体的制备及其细胞内定位

目的：制备抗KIAA0649多克隆抗体并鉴定抗体的特异性,同时初步鉴定KIAA0649蛋白在细胞内的定位及其功能结构域。方法：通过TMHMM和DNAstar等软件对KIAA0649的蛋白质序列进行分析,选取了3段序列合成多肽,将3段多肽混合后对新西兰兔进行免疫,通过酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immuno-sorbnent assay, ELISA)测定血清中抗多肽的滴度,当抗血清的滴度达到1∶10⁵（体积比）时取血清,通过免疫亲和层析柱对抗体进行纯化。在U2OS细胞中表达Flag-KIAA0649或通过小干扰RNA沉默内源的KIAA0649,提取细胞蛋白,电泳后转膜,通过Western blot分析上述制备的多克隆抗体的特异性;将表达Flag-KIAA0649的细胞在玻片上固定,用抗Flag抗体和抗KIAA0649抗体进行双色免疫荧光分析,通过免疫荧光对KIAA0649抗体进行鉴定。利用PCR克隆构建Flag-KIAA0649全长表达质粒和系列Flag-KIAA0649缺失突变体,转染细胞后通过免疫荧光对KIAA0649在细胞内的定位进行研究。 结果：得到的纯化KIAA0649多克隆抗体特异性地识别内源及外源KIAA0649蛋白,可用于免疫荧光和Western blot分析;全长KIAA0649蛋白在细胞核内显示特定的分布方式;KIAA0649的缺失突变体中,含有PENF motif 的突变体与全长KIAA0649蛋白在细胞核内的分布形式一致,推测该结构域可能为KIAA0649 的功能结构域。 结论：通过上述方法制备的KIAA0649 多克隆抗体具有较高的特异性,可应用于KIAA0649的功能研究,KIAA0649在细胞内定位的研究对于阐明KIAA0649的功能机制具有重要意义。     

钙信号在尾加压素-Ⅱ促血管平滑肌增殖中的作用

目的:探讨钙信号在尾加压素-Ⅱ(urotensin-Ⅱ,UⅡ)促血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell, VSMC)增殖中的作用.方法:在离体培养的VSMC上,用流式细胞仪和3H-TdR参入的方法探讨UⅡ的促增殖效应;在离体孵育的大鼠主动脉平滑肌组织上观察UⅡ对平滑肌45Ca2+摄入的影响;应用激光共聚焦显微镜检测UⅡ作用后细胞内游离钙的改变.结果:UⅡ(10-9～10-7molL-1)浓度依赖地刺激VSMC的DNA合成,并诱导细胞由静止向增殖状态转化.与对照组相比10-8 mol*L-1 UⅡ使细胞的增殖指数[(G2-M+S)%]增加192%(P<0.01).钙通道阻断剂尼卡地平和Ca2+螯合剂EDTA均可阻断UⅡ对VSMC的促增殖效应,其中UⅡ(10-8 mol*L-1)与尼卡地平(10-5 mol*L-1)共同孵育的VSMC DNA合成量仅为单纯UⅡ(10-8 mol*L-1)组的59.0%. UⅡ(10-10～10-8 mol*L-1)可浓度依赖地使胸主动脉对45Ca2+的摄入增加,尼卡地平(10-5 mol*L-1)也可显著对抗UⅡ(10-8 mol*L-1)对45Ca2+摄入的诱导作用(P值均小于0.01).用激光共聚焦显微镜观察发现UⅡ作用后细胞内Ca2+浓度迅速升高,持续约3 min,形成钙波.结论: UⅡ可通过促进细胞Ca2+摄取和增加细胞内Ca2+浓度,发挥其促进VSMC增殖的作用.     

巯基供体化合物NAC和S-8744对局灶性脑缺血/再灌损伤保护作用的比较

目的与方法　本文用插线法制作局灶性脑缺血 /再灌损伤模型 ,利用激光共聚焦扫描显微镜和fluo 3或DCF DA与PI荧光探剂双标技术检测了活体脑片细胞内脂质过氧化物、Ca2 + 含量及细胞的坏死程度。同时观察巯基供体NAC、S 8744对脑缺血 /再灌损伤的保护作用。结果　①缺血 /再灌时脑片细胞内脂质过氧化物、Ca2 + 含量增加 ,同时脑片细胞发生坏死 ;②巯基供体NAC、S 8744均可降低缺血 /再灌损伤引起的脑片细胞内脂质过氧化物、Ca2 + 的含量 ,减轻细胞坏死程度。结论　巯基供体NAC、S 8744可拮抗局灶性脑缺血 /再灌损伤     

以躯体症状表现的心理疾病900例

<正> 在综合医院门诊中,以躯体症状表现的心理疾病而反复就诊者颇为常见。有资料表明符合ICD—10精神疾病诊断标准的心理障碍患病率平均达24％。在我国基层综合医院中,上海调查显示医生对心理障碍的识别率仅为15.9％,而国外非专科医生对心理障碍的识别率为48.9～75％,可见我国综合医院医生的识别率明显为低,对此须引起高度关注。本文仅就900例表现为躯体症状的心理疾病进行临床分析。     

一种小鼠胸腺基质细胞和活化胸腺细胞共表达分子的研究

目的：研究抗小鼠胸腺基质细胞（ＭＴＳＣ）Ｐｆ１８－３单抗识别分子的表达特性。方法：采用流式细胞（ＦＡＣＳ）和激光扫描共焦显微镜（ＣＬＳＭ）分析ＴＳＣ单抗Ｐｆ１８－３染色特征。结果 ：ＦＡＣＳ分析发现Ｐｆ１８－３单抗识别分子可表达于胸腺、胎肝和骨髓等不同来源的基质细胞系和腹腔巨噬细胞表面。新鲜分离的胸腺细胞Ｐｆ１８－３识别分子表达阴性，但ＣｏｎＡ活化可诱导并上调其表达，随活化时间延长表达增高，且主要