2014—2021年湖北省鄂州市职业暴露人群血清学和外环境禽流感病毒监测分析

目的 了解2014—2021年湖北省鄂州市外环境禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)分布情况及相关职业暴露人群感染状况,为鄂州市防控人感染禽流感疫情提供依据。方法 2014—2021年鄂州市3个区的4类场所,5种类型外环境标本,采用荧光定量PCR方法对标本进行A型、H5亚型、H7亚型、H9亚型流感病毒检测,同时采集禽流感职业暴露人群血清标本,使用红细胞凝集抑制实验法检测禽流感病毒H5N6、H7N9、H9N2抗体,采用描述性流行病学方法对检测结果进行统计分析。结果 2014—2021年鄂州市采集禽流感外环境标本2 187份,检出流感病毒A型(Influenza virus type A,FluA)阳性标本645份,阳性率为29.49%;以H9亚型和H5+H9混合型为主,分别占50.39%和17.36%。鄂城区禽流感病毒检出阳性率最高(38.41%),梁子湖区最低(11.92%)。4类场所中城乡活禽市场禽流感病毒检出阳性率最高(46.60%)。5种类型外环境标本中,清洗禽类污水禽流感病毒检出阳性率最高(46.09%)。时间分布,第1季度(39.09%)和第4季度...     

2016—2021年湖北省鄂州市流感监测结果分析

目的分析2016—2021年湖北省鄂州市流感监测结果,了解流感样病例（ILI）的流行病学特征以及病原学变化趋势,为流感防控和风险评估提供科学依据。方法收集2016—2021年湖北省鄂州市流感哨点医院报告的ILI监测数据和网络实验室的病原学检测数据,并进行分析。结果2016—2021年湖北省鄂州市ILI就诊百分比（ILI%）为2.81%,呈逐年上升趋势,报告ILI以0~4岁为主,占总数的55.55%。2016—2021年共检测7 716份ILI标本,其中核酸阳性标本1 467份,阳性率为19.01%;甲型H1N1流感主要集中在1月至4月,甲型H3N2流感主要集中在8月至12月,乙型Victoria系流感主要集中在4月至7月和12月至次年3月,乙型Yamagata系流感主要集中在12月至次年2月;流感网络实验室对1 467份核酸阳性标本分别用狗肾细胞（MDCK细胞）和无特定病原体（SPF）鸡胚2种方法进行流感病毒分离,毒株总分离率为32.78%,其中MDCK细胞分离率为26.93%,高于SPF鸡胚分离率（5.86%）。2016—2021年鄂州市共报告13起ILI暴发疫情,主要发生在冬春季的小学、中学和幼托机构人群密集场所。结论冬春季是鄂州市流感防控的重点时期,易暴发疫情,0~14岁儿童是防控的重点人群;不同监测年度流感病毒亚型交替流行,应持续加强监测,新冠肺炎疫情部分防控措施在预防流感中值得推荐。     

一起群体聚餐引起的O139型霍乱疫情分析

2012年10月湖北省内发生的一起群体聚餐引起的O139型霍乱疫情,经过流行病学调查、临床表现及实验室检查结果进行分析判断,共确诊26例霍乱感染者,无死亡病例。通过黄石、鄂州和武汉等地的联防联控,及时有效地控制了疫情。     

结核分枝杆菌Ag85B基因体外扩增、克隆及在耻垢分枝杆菌中的表达

目的体外扩增结核杆菌Ag85B基因,构建大肠埃希菌-分枝杆菌穿梭质粒ps3000-Ag85B,并重组耻垢分枝杆菌(Mycobacteriums megmatis mc2155)。方法采用聚合酶链式反应(PCR)方法,体外扩增结核杆菌Ag85B基因,克隆入pGEMT载体;构建亚克隆ps3000-Ag85B大肠埃希菌-分枝杆菌穿梭质粒,电转化方法将有Ag85B基因的穿梭质粒转化到耻垢分枝杆菌中。热诱导此重组耻垢分枝杆菌,用SDS-PAGE电泳观察Ag85B蛋白的表达,Western blot鉴定其生物学活性。结果PCR扩增结核杆菌Ag85B基因片段大小为990bp,构建的穿梭质粒ps3000-Ag85B酶切片段为990bp,与理论值相符。经Western blot检测,该重组耻垢杆菌表达蛋白能被结核病患者血清识别。结论Ag85B重组耻垢分枝杆菌构建成功,为下一步表达Ag85B蛋白的重组BCG(Bacilli Calmette-Guérin)疫苗的研究奠定了基础。     

结核分枝杆菌ESAT-6基因在毕赤酵母中的构建及其表达

目的在毕赤酵母（Pichia pastoris）表达系统中表达结核分枝杆菌ESAT-6基因。方法以重组质粒pET23a-ESAT-6为模板,亚克隆目的片段ESAT-6至酵母菌分泌表达载体pPICZaA,重组质粒经线性化后电转化转染至毕赤酵母菌GS115菌株,经抗生素Zeocin筛选得到高拷贝转化子。经甲醇诱导表达,取细胞裂解上清进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和蛋白质印迹法分析。结果成功构建了pPICZaA-ESAT-6毕赤酵母表达重组质粒。经甲醇诱导,在酵母细胞内表达分子质量单位为18kDa的蛋白。蛋白质印迹（Western blot）显示,18kDa蛋白被活动性肺结核病人血清抗体识别。结论在毕赤酵母菌中成功表达了带有信号肽ESAT-6基因,为进一步研究新型单位疫苗打下坚实的基础。     

鄂州市2014-2020年微生物实验室生物安全继续教育培训效果分析

2003年SARS突发疫情后,以及2019年末新冠肺炎疫情陆续在全球爆发,生物安全广受各级政府和公众的关注.我国先后出台了相关的法律法规和标准,特别是2021年4月15日《中华人民共和国生物安全法》的正式实施,其中第五章共11条明确病原微生物实验室生物安全管理标准,对实验室的实验活动提出相应要求,继续教育培训就是落实生物安全的重要措施之一.培训是国家法律的基本要求,也是实验室生物安全管理的基础性工作,培训的主要内容包括法律法规、国家标准、实验室设计建造、个体防护技能和实验操作技术及必要的安全知识等.鄂州市根据实际情况,从2014年开始陆续开展生物安全继续教育培训,取得非常好的效果,在全市率先采取了统一培训教材、统一培训要求、统一师资、统一发证的模式,确保了培训工作的规范性和培训效果.现将鄂州市2014-2020年实验室生物安全继续教育培训情况分析如下.     

2012-2013年鄂州市禽流感职业暴露人群及外环境监测结果分析

目的了解鄂州市禽流感职业暴露人群H5N1感染及外环境禽流感病毒H5、H7、H9亚型污染状况。方法2012-2013年采集鄂州市从事家禽养殖、屠宰等人群血清标本,用红细胞凝集抑制试验(HI)检测H5N1抗体;对在城乡活禽市场等外环境采集的污水、鸡粪和鸡笼标本用荧光定量PCR法检测禽流感病毒(甲型流感病毒,又称A型流感病毒,Flu A)H5、H7、H9核酸。结果共采集职业暴露人群160人份血清标本,H5N1抗体均为阴性;环境标本240份禽流感病毒核酸监测,阳性标本为36份,阳性率为15.00%。A型禽流感病毒核酸阳性标本分布于鄂州市3个区,阳性率差异有统计学意义(Fisher精确概率法,P=0.0 047),以华容区阳性率最高;各种类型标本阳性率差异有统计学意义(Fisher精确概率法,P=0.0 024),污水的阳性率最高;不同监测场所标本阳性率差异也有统计学意义(Fisher精确概率法,P<0.01),城乡活禽市场禽流感病毒检出率最高;各个季度采集的标本阳性率差异有统计学意义(Fisher精确概率法,P<0.01),第二季度禽流感病毒检出率最高。结论禽流感H5亚型在鄂州市职业暴露人群中未发现隐性感染,鄂州市监测点外环境存在H5、H9禽流感病毒,城乡活禽市场为人感染禽流感的高风险场所。     

结核分枝杆菌ESAT-6基因体外扩增、克隆及在耻垢分枝杆菌中的表达

目的体外扩增结核杆菌ESAT-6基因,并构建大肠杆菌-分枝杆菌穿梭质粒ps3000-ESAT-6和重组耻垢分枝杆菌。方法采用聚合酶链式反应(PCR)方法,体外扩增结核杆菌ESAT-6基因,克隆入pGEMT载体。然后,构建亚克隆ps3000-ESAT-6大肠杆菌-分枝杆菌穿梭质粒,经电转化方法,将ESAT-6基因的穿梭质粒转化到耻垢分枝杆菌(Mycobacteri-umsmegmatis mc~2155)中,热诱导此重组耻垢分枝杆菌,用SDS-PAGE电泳观察ESAT-6蛋白的表达,Western blotting鉴定其生物学活性。结果成功扩增了结核杆菌ESAT-6基因;正确构建穿梭质粒ps3000-ESAT-6,用pET表达系统ESAT-6纯化蛋白免疫小鼠的多抗血清通过Western blot证实了该重组耻垢杆菌中有表达并具有生物学活性。结论ESAT-6重组耻垢分枝杆菌构建成功,为下一步表达ESAT-6蛋白的重组BCG(BacilliCalmette-Guérin)疫苗的研究奠定了基础。     

弓形虫SAG2基因在毕赤酵母中的表达及免疫原性研究

目的 在毕赤酵母（Pichia pastoris）表达系统中表达弓形虫SAG2基因,探索一种新的有效活化机体抗弓形虫免疫反应的疫苗。方法 以重组质粒pET23a-SAG2为模板,亚克隆目的片段SAG2至酵母菌分泌表达载体pPICZαA,重组质粒经线性化后电转化转染至毕赤酵母菌GS115菌株,经抗生素Zeocin筛选得到高拷贝转化子。经甲醇诱导表达,取细胞裂解上清进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和蛋白质印迹法（Western blot）分析。以整体重组酵母菌作为疫苗腹腔免疫BALB/c小鼠,检测小鼠的免疫反应。结果 成功构建了pPICZαA-SAG2毕赤酵母表达重组质粒。经甲醇诱导,在酵母细胞内表达分子质量单位为22 ku的蛋白。Western blot显示,22 ku蛋白可被抗-His标签抗体识别。结论 在毕赤酵母菌中成功表达了SAG2基因。整体重组酵母活菌具有免疫原性。     

鄂州市首例人感染高致病性禽流感病毒（H5N1）病例报告

2010年05月31日鄂州市疾病预防控制中心接到鄂州市中心医院报告1例不明原因重症肺炎病例,患者女性,22岁,怀孕5个月。2010年05月20日左右出现畏寒、发热、体温39.2℃。发病前曾参与死鸡宰杀后的拔毛并食用了少量病死鸡肉。