低效价抗体致溶血性输血反应的相关分析

目的：建立低效价血型抗体在溶血性输血不良反应发生中的诊断流程。方法：应用酸放散试验、酶法和PEG法进行抗体鉴定试验，结合患者临床症状及相关检查指标，检测患者血浆中是否存在导致溶血的不规则抗体。结果：患者不规则抗体筛查阳性，血清中确定存在抗-Le^a抗体，发生输血反应后，使用增强试验检测到低效价抗-E抗体，患者Rh分型为Ccee，所输注红细胞为cc EE，患者新、旧标本用PEG方法与所输红细胞配血，主侧均不相合，找到溶血性输血反应发生的证据。结论：血清中低效价的抗体不易被检出，往往会导致患者发生严重的溶血性输血反应。     

1种全自动血型分析仪的临床应用与评价

<正>准确鉴定献血者及患者ABO、RhD血型是临床安全输血的最根本保证。献血者血液的ABO、RhD血型鉴定,及患者输血前3项检查(包括ABO及RhD血型鉴定、意外抗体筛查、交叉配血试验)均为保障其安全输血的前提。传统的试     

不规则抗体影响血型鉴定95例特异性分析

目的 通过对95例影响血型鉴定的不规则抗体特异性的分析,探讨不规则抗体影响患者血型鉴定的特点.方法 对2013年1月至2014年12月间45157例申请输血患者进行血型鉴定及不规则抗体筛查,对其中不规则抗体筛查结果阳性并干扰血型反定型的样本进行16系谱细胞抗体鉴定,明确抗体类型及其特异性.通过筛查献血员红细胞表面抗原选择与抗体对应抗原阴性的红细胞制备反定型细胞进行血型鉴定,以排除不规则抗体对血型反定型的干扰.以不规则抗体对应抗原阴性红细胞做交叉配血试验,进一步验证血型鉴定结果.结果 95例样本(男27例,女68例)因MNSs、RH、Lewis、P、Duffy、Kidd、Kell血型系统的不规则抗体干扰血型鉴定.其中不规则抗体产生最多的是MNS系统55例,占57.89％;其次为RH系统10例,占10.53％;Lewis系统8例,占8.42％;P系统2例,占2.11％;Duffy系统1例,占1.05％;Kidd系统1例,占1.05％;Kell血型系统1例,占1.05％;MNS系统与RH系统联合2例,占2.11％;未鉴定出抗体特异性15例,占15.79％.95例样本中IgM类76例,占80％,IgG类19例,占20％.结论 影响血型鉴定的不规则抗体以IgM类为主,少量高效价的IgG类抗体也可影响血型鉴定.     

头孢哌酮钠舒巴坦钠致药物溶血性贫血的分析

目的建立针对药物溶血性贫血的诊断流程。方法应用卡式抗人球蛋白法完成患者红细胞直接抗人球蛋白试验(DAT)及DAT分型检测,应用药物致敏红细胞方法检测患者血浆内的药物抗体,分析患者的溶血及凝血指标。结果患者DAT阳性,分型为IgG+C3型,血浆内存在针对头孢菌素类药物抗体;患者用药后Hb从122 g/L下降至80 g/L,PLT从90×10~9/L下降至17×10~9/L;LDH从用药前189.5μmol/L上升至347.2μmol/L,AST从25.7 U/L上升至63.5 U/L;患者用药后PT从用药前的13.4 s延长到20.9 s,APTT从35.8 s最长延长到56.6 s,INR从1.19延长到1.8。结论患者因使用头孢哌酮钠舒巴坦钠发生针对血液系统的不良反应,导致药物溶血性贫血。     

孕妇外周血胎儿ABO血型基因分型技术的建立

本研究目的是建立孕妇外周血胎儿ABO血型基因分型技术,用于ABO血型不合引起的新生儿溶血病的产前诊断。根据ABO血型基因DNA全序列和mRNA序列设计4对引物,选择20例健康供者血浆,提取血浆中DNA进行扩增,探索最佳的血浆DNA提取及PCR扩增条件,初步建立单人ABO血型基因分型技术。将O型血浆DNA与A型或B型血浆DNA按1：1、2：1、4：1、8：1、10：1、20：1、40：1、100：1进行混合,模拟孕妇外周血胎儿与孕妇自身ABO基因混合状态,建立混合ABO血型基因分型技术。选取14例孕30周以上的孕妇外周血标本,进行胎儿ABO血型基因型鉴定,并对孕妇进行追踪,尽量获取胎儿出生以后的外周血标本进行ABO血型鉴定,以评价孕妇外周血胎儿ABO血型基因分型技术的灵敏度与准确性。结果表明：单人血浆进行准确血型鉴定的最少模板DNA量约为0．625ng,500μl血浆提取的DNA量即可达到PCR扩增要求;当混合血浆中O型DNA所占比例≤10时,可以准确检测出非0基因的存在;14名O型孕妇外周血标本中9例标本扩增出非O型基因,5例未扩增出非0基因;通过血清学方法对5例胎儿出生后外周血进行ABO血型鉴定,其中A型3例,B型1例,O型1例,与其基因分型结果一致,符合率100％。结论：本研究建立的孕妇外周血胎儿ABO血型基因提取、分型技术,可以对妊娠中晚期胎儿ABO血型基因型进行准确鉴定,从而为新生儿溶血病的产前诊断与预防提供指导意见。     

基于低效价O型全血及A型血浆建立战备血库的可行性分析

目的:探索用低效价O型全血及A型血浆建立战备血库的可行性。方法:应用Galileo全自动血型分析仪检测O型献血者样本的IgM抗A、抗B抗体效价和A型献血者样本的IgM抗B效价,选取抗A、抗B效价同时低于128的O型献血者纳入战备流动血库,抗B效价低于128的A型血浆和抗A、抗B效价同时低于128的O型全血纳入战备实体血库。结果:共选取1 452个O型献血者,检测抗A/B抗体效价,两种抗体效价均分布于512以下,且样本分布峰值均处于效价4,两种抗体效价>128的样本比例均较低;两种抗体效价存在明显正相关(r=0.383),且IgM抗A效价高于IgM抗B效价的样本比例较高;同时满足IgM抗A和抗B抗体效价<128的献血者1 335人(91.94%),可纳入流动血库。检测512例A型献血者抗B效价,结果显示,随着抗体效价的增高,样本比例逐渐降低;抗B抗体效价<128的献血者占99.8%,仅有1例不符合纳入条件。结论:O型献血者全血符合低效价标准的比例较高,A型献血者血浆几乎均符合低效价标准,提高了突发情况下的血液供应率。     

滤除白细胞对保存期内红细胞功能变化的影响研究

目的 探讨白细胞滤除对红细胞功能的影响.方法 将30名健康献血员捐献的血液制备成悬浮红细胞,随机分为实验组怕细胞滤除组,使用BC.L400型去白细胞滤器(成都双流公司)]和对照组,常规保存.分别在第0、7、14、21、28、35天进行红细胞的血常规、Na+、K+、乳酸(LD)、葡萄糖(Glu)、血气、血流变、Na+-K+-ATP酶、游离血红蛋白(FHb)等指标检测.结果 红细胞悬液滤过后其中的白细胞显著减少(P＜0.01);随着保存时间的延长,两组红细胞的血常规、Na+、K+、LD、Glu各项指标间差异无统计学意义(P＞0.05);两组FHb含量明显增加,且在保存28 d时实验组明显高于对照组(P＜ 0.01);保存0～14 d时两组红细胞内Na+-K+-ATP酶逐渐减少,实验组显著高于对照组(P＜0.01);血气指标中保存液pH值随保存时间延长而下降,保存第35天时实验组高于对照组(P＜0.01),氧分压(PO2)、二氧化碳分压(PCO2)、血氧饱和度为50％时的氧分压(P50)等检测结果两组间差异无统计学意义(P＞0.05);两组红细胞高切黏度和低切黏度值均随保存时间延长而不断升高,21 d时两组间比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论 此种国产白细胞滤器滤除白细胞可能对维持体外保存红细胞的理化性质和功能有一定影响.     

输血相容性检测室内质控品的临床应用评价

目的评价解放军总医院输血科自主研发的输血相容性检测室内质控品临床应用效果。方法回顾性分析2009年10月～2011年10月全国31家输血相容性检测实验室应用该室内质控品对ABO及RhD血型鉴定试验、不规则抗体筛查试验和交叉配血试验开展室内质量控制工作情况,分析该室内质控品检测结果的重复性和稳定性;根据各实验室应用的试验方法、试剂、耗材及试验结果,分析室内质控品在各种检测条件下的实际应用效果。结果 31家输血相容性检测实验室共完成室内质控试验14 271次,包括ABO及RhD血型鉴定试验4 552次、不规则抗体筛查试验4 539次及交叉配血试验5 180次,失控7次。ABO及RhD血型鉴定试验A、B、D抗原检测结果变异系数(CV)为0;ABO血型鉴定反定型试验、不规则抗体筛查试验及交叉配血试验抗原、抗体反应阴性结果的CV为0,抗原、抗体反应阳性结果均为CV<10.0%;质控品不同保存时间试验结果比较差异甚小(P>0.05)。结论研发的自制室内质控品在重复性、稳定性方面可以满足输血相容性检测室内质量控制的基本要求。     

重组人血小板CD36基因真核表达载体的构建及蛋白表达

目的制备具有功能活性的重组人血小板表面CD36抗原的纯化表达蛋白胞外区30～439氨基酸残基段。方法提取人肝细胞组织总RNA,经RT-PCR扩增编码人血小板CD36抗原胞外区(Gly30～Asn439)氨基酸残基cDNA,构建于原核表达载体pMD18并转化大肠杆菌DH5α,筛选获得阳性重组子pMD18-CD36,提取质粒。经序列测定后,将该基因插入到真核细胞瞬时表达载体pTE2上,构建成为pTE2-s-CD36-10 his真核瞬时表达载体。采用lipofectamine 2000(invitrogen)转染法,将重组质粒转染HEK-293细胞,表达产物经Ni2+2NTA柱层析纯化。结果 RT-PCR扩增获得了1.4 kb的片段。invitrogen测序,该序列分析结果与Genebank中的NM_001001547.2完全一致。SDS-PAGE证实转染的HEK-293细胞表达了人CD36抗原胞外区蛋白片段。结论利用构建的真核载体pTE2-s-CD36转染人胚肾细胞(HEK293)可高效表达CD36 Gly30～Asn439,得到纯化蛋白,为人血小板CD36表面抗原对血小板输注无效影响的深入研究奠定基础。