高分化直肠神经内分泌肿瘤的临床病理特征及预后分析

目的 探讨高分化直肠神经内分泌肿瘤(RNET)的临床病理特征及预后。方法 回顾性分析2017年8月-2021年12月在该院住院治疗的83例高分化RNET患者的临床资料,包括：临床表现、内镜检查、内镜下治疗、术后并发症、术后病理、随访情况和预后。以2019年世界卫生组织(WHO)确定的消化系统肿瘤分类为标准,根据病理分期,将83例患者分为G₁期组(72例)和G₂期组(11例);根据患者瘤体数,将83例患者分为单发RNET组(77例)和多发RNET组(6例);比较两种分组之间嗜铬粒蛋白A(CgA)、突触素(Syn)和CD56的表达情况。结果 根据病理结果分组时,G₁期组CgA阳性率明显高于G₂期组,差异有统计学意义(χ²=4.23,P=0.040);根据瘤体数分组时,多发RNET组CgA阳性率明显高于单发RNET组,差异有统计学意义(χ²=5.74,P=0.017);Syn和CD56在以上两种分组中比较,差异均无统计学意义(P> 0.05)。结论 高分化...     

人源干扰素基因刺激因子激动剂G10抑制HBV复制

目的观察人源干扰素基因刺激因子(stimulator of interferon genes,STING)激动剂G10抗乙肝病毒(hepatitis B virus,HBV)作用。方法采用Ficoll-Hypaque密度梯度离心法从健康志愿者全血分离外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMCs),采用不同浓度的G10处理,qRT-PCR法检测PBMCs、细胞IFN-β、TNF-α、IL-28A、IL-29mRNA表达和人单核细胞(THP1) IFN-βmRNA表达。用不同浓度G10处理过的THP1上清液刺激HepAD38细胞,采用qRT-PCR法检测HBV DNA表达水平。结果 G10处理的PBMCs IFN-β、TNF-α、IL-28A、IL-29mRNA表达水平显著高于对照组(P0.05),以诱导IFN-β表达作用最强,可上调达678倍,并呈剂量依赖性。与对照组相比,G10显著上调THP1细胞表达INF-βmRNA(P0.05),在G10 50μmol/L时达峰值。与对照组相比,G10明显抑制HepAD38细胞HBV DNA,最高抑制率可达14.8%。而G10直接刺激HepAD38细胞却无类似效应。结论人源STING激动剂G10能够诱导PBMCs和THP1分泌IFN-β为主的细胞因子。该研究证实了激活STING通路能够诱导细胞因子表达发挥抗HBV作用,同时也证实开发人源小分子STING激动剂作为治疗慢性乙型肝炎的免疫治疗是可行的。     

肿瘤干细胞表面标志物CD133单链抗体基因的分离与鉴定

Objective To identify,construct and express scFv CD133,verify its biological function.Methods VL and VH were isolated from hybridoma of mAb CD133 by using antibody engineering technology.Its DNA sequencing and CDR were determined.scFv CD133 was then cloned into pET32a,transformed into Origami,induced by IPTG,purified by Ni2+-NTA His resin.Its affinity and specificity were tested by NH4SCN elution and ELISA.Results The size of VL and VH of scFv CD133 was 339 bp and 342 bp,which coded 113 and 114 amino acid separately.Its VL belonged to mouse Igκ chain and VH belonged to mouse IgG heavy chain subtype I.The molecular weight of scFv CD133 was about 27 × 103 which was testified by SDSPAGE and Western blot.Its affinity and specificity were also verified.Conclusion scFv CD133 has been successfully constructed and expressed in Origami,which could supply basis for target therapy of CD+133 cancer stem cell.     

经口内镜下肌切开术与经胸Heller术治疗贲门失弛缓症的临床疗效对比

目的对比分析贲门失弛缓患者经口内镜下肌切开术(POEM)与经胸食管贲门部黏膜外肌层切开手术(即Heller术)的临床疗效及安全性。方法回顾性研究2012年1月-2014年10月该院78例确诊为贲门失弛缓症患者。其中,接受POEM术患者为42例,接受Heller术患者36例,观察并对比两组患者术后症状缓解情况、食管下段括约肌(LES)静息压力、Eckardt评分、术中和术后并发症发生率、手术时长、住院时间及住院费用等。结果两组患者术后均获得明显的临床缓解,POEM组患者的并发症发生率、Eckardt评分及LES静息压力和Heller术组相比差异无统计学意义(P0.05)。而POEM组患者的手术耗时、住院时长及住院费用均明显低于Heller术组(P0.05)。结论 POEM作为一种近期疗效显著的内镜微创手术方式,与外科手术疗效相当,对患者造成的创伤小,痛苦小,使患者耐受性好,住院时间及住院费用减少,值得推广。     

靶向表皮生长因子受体Ⅲ型突变体的第三代嵌合抗原受体的构建与表达

目的：构建第三代靶向表皮生长因子受体Ⅲ型突变体（EGFRvⅢ）的嵌合抗原受体表达载体,为肿瘤过继免疫治疗提供实验基础。方法：运用分子克隆方法将嵌合抗原受体的胞外抗原结合区（EGFRvⅢ单克隆抗体的轻链和重链可变区,EGFRvⅢscFv,726 bp）、铰链区/穿膜区（213 bp）、共刺激分子（CD28和CD137的胞内信号区,123 bp和126 bp）和免疫受体酪氨酸活化基序（CD3ζ链,336 bp）连接成EGFRvⅢscFv-CD28-CD137-CD3ζ（EGFRvⅢ/3CAR）,克隆入真核表达载体pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP的EcoRⅠ和BamHⅠ位点,转染293T细胞48 h后提取蛋白,采用SDS-PAGE和Western blotting检测EGFRvⅢ/3CAR的表达。结果： EGFRvⅢscFv和基因合成的CD28-CD137-CD3ζ表达框通过重叠延伸PCR拼接成EGFRvⅢ/3CAR,限制性内切酶片段分析和DNA测序均验证了重组载体序列完全正确,Western blotting应用抗人-CD3ζ抗体检测到EGFRvⅢ/3CAR在293T细胞中的完整表达（相对分子质量约58 kD）。结论：成功构建嵌合抗原受体EGFRvⅢ/3CAR表达载体,为嵌合抗原受体修饰T细胞靶向治疗肿瘤提供研究基础。     

Bac-to-Bac杆状病毒昆虫表达系统介导的重组腺相关病毒制备

目的 建立高效的临床级重组腺相关病毒( rAAV)制备方法.方法 将rAAV的反向末端重复序列( ITR)及目的基因表达框(2053 bp)从pAAV-MCS剪切引入杆状病毒载体中构建顺式载体,rAAV血清型2的衣壳和复制蛋白基因在反式载体pFastBacDual中利用真核基因遗漏扫描原理表达,两者分别制备成杆状病毒,共感染昆虫细胞sf9包装rAAV.增强绿色荧光蛋白(EGFP)作为报告基因验证其可行性.结果 顺式和反式杆状病毒载体分别在DH 10BacTM中转座形成杆粒bacmid、昆虫细胞sf9中制备成杆状病毒,病毒滴度可达1×108～3 ×108 v.g./ml.二杆状病毒共感染昆虫细胞sf9,完成rAAV拯救、复制和包装过程,经rAAV-EGFP感染293T细胞测试具有良好的生物学活性.结论 该系统具有高效、安全、简便等特点,为临床级rAAV制备和基因治疗奠定了基础.     

肿瘤坏死因子α对人肺腺癌细胞耐顺铂的逆转作用

目的 观察肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对人肺腺癌细胞株A549/DDP耐顺铂(DDP)的逆转作用,探讨其逆转耐药的机制.方法 以噻唑蓝(MTT)法检测TNF-α 250、1000 U/ml与DDP联用对A549/DDP细胞的细胞毒性作用,以膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)/碘化丙锭(PI)双染法检测TNF-α 250、1000 U/ml与DDP联用对A549/DDP细胞的凋亡.结果 250、1000 U/ml TNF-α可使DDP对A549/DDP细胞的半数抑制浓度(IC50)从7.12 mg/L分别降至5.02、4.28 mg/L,能够逆转A549/DDP对DDP的耐药,逆转倍数分别为1.418、1.663(P＜0.01).细胞凋亡试验中250、1000 U/ml TNF-α+DDP(7.12 mg/L)两组细胞凋亡率同无药组和DDP组比较,明显增高,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 TNF-α能够逆转A549/DDP对DDP的耐药,其机制可能与诱导肿瘤细胞凋亡有关.     

对炎症性肠病中骨质代谢认识的新进展

慢性炎症性疾病如炎症性肠病（ IBDs）等,影响患者骨质代谢并与患者骨质疏松及骨折风险的增加相关联。骨质疏松症在IBD患者中有很高的发病率。骨质丢失是一种早期的系统过程,甚至在临床疾病出现之前就已发生。虽然造成骨骼异常的机制可能有数种,如维生素D缺乏、类固醇激素应用或系统性炎症,但其中炎症及炎症因子机制如肿瘤坏死因子（TNF）,白细胞介素-1（IL-1）及白细胞介素-6（IL-6）可能最为关键。本研究讨论了由炎症细胞因子和其他介质介导的骨质丢失中的分子通路,从而有助于阐明IBD患者中炎症介导骨质丢失的机制,并指导新型的有效治疗方式。     

GADD45β在肝癌中的异常表达

目的:探讨生长抑制DNA损伤诱导因子β(GADD45β)与肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)发生、发展的关系.方法:应用寡核苷酸基因芯片、反转录PCR(RT-PCR)、免疫组织化学技术检测GADD45β在人正常肝组织、肝硬化组织和肝癌组织中的异常表达,分析GADD45β与临床病理学特征的关系及其异常表达的可能分子生物学机制.结果:正常肝组织、肝硬化组织和肝癌组织中GADD45β mRNA的阳性表达率分别为80％、60％和26％,肝癌组织与正常肝组织间有非常统计学差异(x2=15.128,P<0.01); GADD45β在肝癌组织中的表达缺失与病理学分级显著相关(P<0.01).结论:GADD45β作为抑癌基因在肝癌的发生发展中起到相当重要的作用,且与肿瘤分化程度密切相关.