人白细胞介素12双亚基共表达真核载体的构建

目的：为满足基因治疗的需要构建人白细胞介素12(hIL－12)双亚基共表达质粒。方法：先从人胚肾组织的逆转录产物中用PCR方法扩增出它的两个亚基P40和P35的cDNA全长，分别克隆入真核表达载体pcDNA3．1( ／-)中构建单亚基质粒——P( )／P40和P(-)／P35，然后再将二者串联克隆入真核表达载体poDNA3．1( )中得到P( )／IL-12质粒。脂质体转染HepG2后24，48h ELISA检测细胞培养上清内hIL-12蛋白质表达。结果：P( )／IL-12质粒经酶切和测序证明两亚基连接方向正确，序列无突变；ELISA检测细胞上清结果证实可表达hIL-12蛋白质。结论：成功构建P40和P35双亚基真核共表达质粒——P( )／IL-12，为模拟hIL-12生理表达方式，简化hIL-12基因治疗操作奠定了基础。     

人白细胞介素12双亚基共表达真核载体的构建

目的 :为满足基因治疗的需要构建人白细胞介素 12 (hIL 12 )双亚基共表达质粒。方法 :先从人胚肾组织的逆转录产物中用PCR方法扩增出它的两个亚基P4 0 和P3 5的cDNA全长 ,分别克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+/ )中构建单亚基质粒———P(+) /P4 0 和P( ) /P3 5,然后再将二者串联克隆入真核表达载体 pcDNA3.1(+)中得到P(+) /IL 12质粒。脂质体转染HepG2后 2 4,48hELISA检测细胞培养上清内hIL 12蛋白质表达。结果 :P(+) /IL 12质粒经酶切和测序证明两亚基连接方向正确 ,序列无突变 ;ELISA检测细胞上清结果证实可表达hIL 12蛋白质。结论 :成功构建P4 0 和P3 5双亚基真核共表达质粒———P(+) /IL 12 ,为模拟hIL 12生理表达方式 ,简化hIL 12基因治疗操作奠定了基础。     

LPS信号转导分子TLR4表达与小鼠肝损伤的关系

目的：探讨脂多糖(1ipopolysaccharide，LPS)信号转导分子，TLR4(Toil-like receptor 4,TLR4)与肝脏损伤的关系。方法：小鼠腹腔注射LPS后不同时间点取肝脏组织，HE染色观察病理改变，RT-PCR法检测肝组织，TLR4 mRNA的表达。结果：腹腔注射LPS后24h小鼠肝脏出现明显炎性浸润、坏死，肝组织TLR4 mRNA的表达在注射LPS后6，12h明显抑制，24h则基本恢复。结论：LPS致肝损伤呈时间依从性；LPS信号转导分子TLR4在介导LPS肝损伤中起重要作用。。     

小鼠甲胎蛋白/树突状细胞疫苗体外免疫活性检测及对小鼠皮下移植瘤的抑制作用

Vollmer等首次将转染有甲胎蛋白（AFP）基因的树突状细胞（DC）免疫C57BL／6小鼠，能有效诱导出AFP特异性的细胞毒性T淋巴细胞（CTL），显示出良好的免疫保护作用，只是作用稍弱。同时体内癌细胞能够分泌由全长cDNA表达的AFP，但自分泌型AFP不能诱发有效抗肝癌免疫作用㈦，因此，外源性转染很难达到满意疗效，是否与具有分泌性信号肽的AFP-cDNA分泌出胞。     

以小肠弥漫性淋巴管扩张为首发征象的不明来源腺癌一例

<正>患者,女,30岁,因“腹胀2月,双下肢水肿10天”于2015年11月3日入院。患者2个月前无明显诱因出现腹胀,为全腹饱胀感,无其他明显不适,未予诊治。10天前出现双下肢水肿,晨轻暮重,伴眼睑轻度浮肿,轻度活动后气促。于外院行腹部超声检查示腹腔积液。为求进一步诊治入住香港大学深圳医院消化及肝脏科。患者起病以来精神、食欲可,睡眠和二便正常,体重增加约5 kg。否认特殊家族史、肝脏疾病史、外伤手术史和输血史。月经正常,已婚未育。体格检查：     

原发性旁路性高胆红素血症1例

原发性旁路性高胆红素血症 (ｓｈｕｎｔｈｙｐｅｒｂｉｌｉｒｕｂｉｎｅｍｉａ)是一病因罕见的高非结合胆红素血症 ,临床罕见。从 195 9年Ｉｓｒａｅｌｓ首次报道 3例并命名以来 ,检索文献至今共 2 3例患者。本病临床特征为黄疸、贫血、脾大及骨髓红系增生活跃。治疗方法和效果以及预后方面的资料很少。容易误诊为溶血性贫血而切脾治疗。我院曾收治 1例 ,现报告如下。病　　例　患者文某 ,男 ,2 4岁 ,因间发性黄疸 4年于2 0 0 1年 10月 30日入院 (住院号 4 32 72 3)。患者于 4年前因发现尿黄 ,在当地医院检查发现巩膜黄染 ,脾大 ,血红蛋白 (Ｈｂ)90ｇ·Ｌ- 1 ,胆红     

肝癌细胞靶向基因药物分子构形与表达量关系的体外研究

目的　通过调整靶向基因药物分子构形来提高外源基因的表达量 ,以解决外源基因在靶细胞中表达效率低的难题。方法　应用PCR方法扩增出人白介素 1 2P4 0 、P35亚基的cDNA全长并克隆至真核表达载体pcDNA3 .1 (± )中 ,构建P(+) /IL 1 2、P(+) /P4 0 和P(- ) /P35三种质粒 ,分别与脱唾液酸黏蛋白 多聚左旋赖氨酸 (ASOR PLL)结合成两种靶向基因药物 [ASOR PLL P(+) /IL 1 2和ASOR PLL P(+) /P4 0 、ASOR PLL P(- ) /P35] ,透射电镜观察它们在不同辅料浓度中的分子构形 ;不同构形药物分子转染HepG2细胞 ,48h后用半定量RT PCR和ELISA法检测hIL 1 2的表达量。 结果　靶向基因药物分子构形为直径 2 5～ 1 50nm的颗粒状或圆环状时 ,hIL 1 2表达量最高 ;ASOR PLL P(+) /P4 0 、ASOR PLL P(- ) /P35共转染者较ASOR PLL P(+) /IL 1 2转染者hIL 1 2表达量普遍要高。结论　靶向基因药物分子构形对外源基因的表达有重要影响 ,以直径 2 5～ 1 50nm的颗粒状或圆环状构形为最佳分子构形 ,外源基因的大小及连接方式对其表达也有一定影响     

HBx蛋白及其羧基末端缺失35个氨基酸的突变体对正常肝细胞增殖的影响

目的构建野生型HBx(wild-type HBx,wt-HBx)和自然突变体HBx(truncated HBx,tHBx~Δ35)重组慢病毒表达载体,建立稳定转染细胞株,观察wt-HBx和tHBx~Δ35对肝细胞增殖和凋亡的影响.方法构建TOPO3.1-wt-HBx和TOPO3.1-tHBx~Δ35重组慢病毒载体;与3个质粒包装系统用磷酸钙方法共同转染到人293T细胞,包装成病毒颗粒,分别感染肝细胞LO2和MIHA,并进行荧光和Western blot法检验细胞中wt-HBx和tHBx~Δ35的表达情况.用细胞计数,细胞活力测定,集落形成实验,流式细胞仪等方法检测对肝细胞增殖和凋亡效应的影响.结果重组慢病毒载体及稳定转染细胞株构建成功,转染后wt-HBx和tHBx~Δ35在细胞中表达明显变化;tHBx~Δ35过表达细胞的增殖速度明显高于wt-HBx组和CTRL对照组,而感染wt-HBx组的肝细胞增殖速度比CTRL对照组和tHBx~Δ35组增殖速度慢(P0.05);tHBx~Δ35可能通过促进细胞S期的合成而刺激细胞增殖,而wt-HBx可能通过捕获细胞的G0/G1期而抑制细胞增殖.但tHBx~Δ35,wt-HBx在肝细胞的凋亡率是很低的.结论 HBx对肝细胞具有抑制增殖的作用,而tHBx~Δ35对肝细胞具有促进增殖的作用.     

体外大鼠肝卵圆细胞的长期培养方法

背景：肝卵圆细胞是目前公认的成体肝干/祖细胞,但其体外长期培养时会不可避免地丢失干细胞的活性。目的：探索大鼠肝卵圆细胞体外长期培养的方法。方法：构建2-乙酰胺基芴/部分肝切除肝再生大鼠模型,通过酶消化和Percoll梯度离心分离纯化大鼠异质卵圆细胞并进行免疫染色鉴定,用含表皮生长因子、白血病抑制因子的培养基体外长期培养,后撤去表皮生长因子、白血病抑制因子,通过形态学的观察和分子标志物的检测判断其能否保持干/祖细胞活性。结果与结论：采用含表皮生长因子、白血病抑制因子的培养基体外培养卵圆细胞4个月后,大鼠异质卵圆细胞仍能表达肝细胞标志物ALB、胆管上皮细胞标志物CK-19,经不含表皮生长因子、白血病抑制因子的培养液继续培养后,卵圆细胞胎肝标志AFP表达量迅速下降。该研究结果表明大鼠肝卵圆细胞在表皮生长因子、白血病抑制因子等培养条件下可长期增殖并保持干细胞活性。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程全文链接：