RNA干扰HIF-1α增强人肺腺癌SPCA-1细胞放射敏感性的研究

目的探讨RNA干扰乏氧诱导因子1（HIF-1）增强人肺腺癌SPCA-1细胞的放射敏感性。方法构建干扰HIF-1α质粒pSUPER-HIF-1α，采用荧光定量RT-PCR、Western blot方法观察有氧与乏氧状态下RNA干扰HIF-1α的变化，用成克隆实验观察乏氧时RNA干扰HIF-1α对放射的增敏作用。结果在常氧和乏氧的状态下，RNA干扰HIF-1α引起mRNA的表达水平分别下降64％和76％；在乏氧的状态下，蛋白的表达下降。转染pSUPER-HIF-1α后的细胞存活曲线的D0值为2．5Gy，转染空白质粒细胞和空白对照细胞的D0值分别为5、0Gy和5、1Gy，增敏比为2．1。结论RNA干扰HIF-1α可以增加SPCA-1细胞对放射的敏感性。     

18F-氟赤式硝基咪唑肿瘤乏氧显像实验研究

目的 探讨18F-氟赤式硝基咪唑(FETNIM)在肿瘤乏氧诊断中的应用价值.方法 30只SPCA-1人肺腺癌荷瘤BALB/c裸鼠采用随机数字表法分为A和B 2组(鼠数分别为16和14只).尾静脉注射37 MBq18F-FETNIM后A组分别于注射后0.5,1,2,3 h处死裸鼠,取血液、肺、心、肝、脾、肾、肿瘤等组织测量质量,用γ计数仪测定放射性计数,计算每克组织百分注射剂量率(%ID/g);B组用PO2微电极测量肿瘤组织内乏氧情况.结果 18F-FETNIM在肾中代谢最高,在脂肪和骨骼中代谢较低,肿瘤/正常组织的放射性比值较高,且随时间而增加,2 h达最高,肿瘤/血液放射性比值为1.69±0.37,肿瘤/肌肉放射性比值为1.57±0.47.HE染色显示瘤内有大量的乏氧坏死组织.组织内PO2微电极测量示肿瘤内均有乏氧,肿瘤内PO,1.1～27.7 mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa).结论 18F-FETNIM在荷瘤裸鼠体内具有较低的外周代谢,脂溶性较低,能被肿瘤乏氧组织摄取,可用于肿瘤乏氧诊断.     

日光疗法对老年痴呆患者激越行为影响的meta分析

目的 探讨日光疗法对老年痴呆患者激越行为的治疗效果。方法 检索Pubmed、Embase、Cochrane library、Web of science、中国生物医学数据库、中国知网、万方知识服务平台、维普数据库。利用RevMan5.4软件进行统计分析。结果 纳入6篇文献(英文5篇,中文1篇),日光疗法能够改善老年痴呆患者的激越行为[标准化均数差(standardized mean difference, SMD)=-0.43,95%CI(-0.80～-0.06),P=0.02];亚组分析结果显示,与对照组比较,光照周期>4周[SMD=-0.44,95%CI(-0.75～-0.13),P=0.006],每天光照2次[SMD=-0.47,95%CI(-0.92～-0.03),P=0.04],光照强度≤1 000 lux[SMD=-0.49,95%CI(-0.86～-0.12),P=0.01],差异均有统计学意义。光照时间亚组分析结果显示光照时间<2 h[SMD=-0.58,95%CI(-1.20～0.04),P=0.07],光照时间≥2 h[SMD=-0.27,95%CI(-...     

lncRNA ZFP36-AS1通过miR-221调控膀胱癌细胞增殖和免疫逃逸

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA) ZFP36-AS1在膀胱癌中的表达及ZFP36-AS1/miR-221轴对膀胱癌细胞增殖和免疫逃逸的影响。方法通过cBioPortal数据库分析ZFP36-AS1在膀胱癌组织中的表达差异。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)分析ZFP36-AS1在膀胱癌细胞系(J82、RT-4、MGH-U3、5637)中的表达差异。MGH-U3细胞随机分为阴性对照(NC)组和ZFP36-AS1组, 分别转染pcDNA3.1-NC质粒和pcDNA3.1-ZFP36-AS1质粒。集落形成实验、流式细胞术分别分析MGH-U3细胞增殖活力和细胞周期。T淋巴细胞与各组MGH-U3细胞共培养, 酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组上清液中白细胞介素-10(IL-10)、γ-干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-4(IL-4)水平。双荧光素酶报告基因实验验证ZFP36-AS1与miR-221的靶向关系。RT-qPCR检测ZFP36-AS1对MGH-U3细胞miR-221表达的影响。Western blotting法检测ZFP36-AS1/miR-221轴对MGH-U...     

二甲双胍预处理对大鼠肾缺血再灌注损伤模型的影响及机制研究

目的 探讨二甲双胍预处理对大鼠肾缺血再灌注损伤模型的影响及可能的机制。方法 健康清洁级成年雄性SD大鼠体重220~250g,共30只,采用数字表法将其随机分为3组（n=10）：假手术组（Sham组）,缺血再灌注组（I/R组）和二甲双胍组（metformin+I/R组）。metformin+I/R组在建立I/R模型前给予二甲双胍0.125mg/（kg·d）腹腔注射,共14天,Sham组和I/R组给予等容量生理盐水连续14天。给药结束后I/R组和metformin+I/R组采用切除右肾、夹闭左肾动静脉45min后恢复灌注的方法制备大鼠肾缺血再灌注模型,Sham组切除右肾、不夹闭左肾动静脉。分别于再灌注24h时抽取下腔静脉血测定血清肌酐（Cr）和尿素氮（BUN）浓度;然后处死大鼠取肾,光镜下观察肾组织形态学变化,免疫组化法测定Bcl-2、Bax、caspase-3表达,并行Tunel染色评估肾小管上皮细胞凋亡程度。结果 跟Sham组比较,I/R和metformin+I/R组的BUN、Cr均明显升高;同时,相比I/R组,metformin+I/R组的BUN和Cr均明显降低,且差异均有统计学意义（P<0.05）。免疫组化检测结果显示,跟Sham组比较,I/R组和metformin+I/R组Bcl-2、Bax、caspase-3表达明显增高;跟I/R组比较,metformin+I/R组Bax、caspase-3表达明显降低,同时Bcl-2的表达明显强于I/R组。Tunel结果显示,相比Sham组,I/R和metformin+I/R组肾小管上皮细胞凋亡数目明显增多;同时,metformin+I/R组肾小管上皮细胞凋亡数目明显少于I/R组,且差异有统计学意义（P<0.05）。结论 二甲双胍预处理能改善大鼠肾缺血再灌注损伤过程中肾功能损害,其机制可能与抑制肾小管上皮细胞凋亡有关。     

分子水平预测肿瘤放射敏感性研究进展

由于不同个体存在放射治疗敏感性差异，而传统放射治疗未能设计针对患者个体的治疗方式。随着人类基因组计划的完成和新技术的发展，设计针对个体更具合理的放疗方案，是医学发展的必然趋势。文章从DNA、RNA和蛋白三个水平预测肿瘤放射敏感性的进展作一综述。     

质粒载体系统介导的人肿瘤细胞RNA干扰作用

目的 研究质粒载体介导的肿瘤细胞RNA干扰效果。方法 构建以H1 RNA为启动子的针对GFP基因不同序列片段的RNAi质粒pLasRiGFP1／2／3。将其与pcdna3．1EGFP共转染HEK293、Hela和SPCA1细胞或单独转染SPCA1-GFP，用倒置荧光显微镜观察和流式细胞仪分析GFP表达。结果 pLasPdGFP1、pLasRiGFP2和pLasRiGFP3在HEK293中对GFP表达的抑制率分别为97．5％、97％和89％，Hela细胞中为83％、90％和90％，SPCA1细胞中为65％、55％和40％。pLasRiGFP1与plasRiGFP2在SPCA1-GFP细胞对GFP的抑制率分别为53％和58％。RNAi作用在48，96h最强，并随RNAi质粒增加抑制效果呈增强趋势，但到达一定量后作用趋势平缓。结论 H1 RNA为启动子的RNAi质粒能有效介导肿瘤细胞RNAi，其作用存在剂量和时间效应，受靶序列、细胞类型等因素的影响。     

RNA干扰下调拓扑异构酶Ⅰ在小细胞肺癌细胞株的表达及其与拓扑替康敏感性的关系

目的 检测拓扑异构酶Ⅰ(TopI)在小细胞肺癌(SCLC)细胞株中的表达,并探讨其表达水平对拓扑替康(TPT)敏感性的影响.方法 采用Western blot检测TopⅠ在SCLC细胞株H446蛋白水平的表达;应用人工合成并荧光标记的小干扰RNA(siRNA),通过脂质体瞬时转染H446细胞.流式细胞仪检测转染效率;应用定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测各干扰序列对TopI在mRNA及蛋白水平的干扰效果,筛选最佳干扰序列;对转染后的细胞株进行药物敏感性实验,观察TopI的表达对TPT敏感性的影响.结果 TOPI基因在H446中有较高表达;siRNA干扰效果满意,转染效率可达86.7%左右;siRNA oligo TopI-892、siRNA oligo TopI-1152、siRNA oHgo TopI-2084和siRNA oligo TOpI-2397等4个干扰序列均抑制H446细胞%pI mRNA的表达,抑制率分别为(95.7 ±1.6)%、(90.8 ±1.6)%、(96.1±2.7)%和(96.3±1.8)%.序列siRNA oligo TopI-2084和siRNA oligo TopI-239r7干扰后,H446细胞TopI蛋白表达明显降低.药物敏感性实验结果显示,相同浓度的TPT对实验组H446细胞的抑制率明显低于转染前及阴性对照的H446细胞(P<0.01).结论 脂质体介导的人工合成siRNA瞬时转染可有效抑制H446细胞的TOPI表达,明显降低细胞对TPT的敏感性.     

载体介导的哺乳动物细胞RNA干扰技术与基因治疗

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是生物在进化过程中,抵御病毒感染及由重复序列和突变引起基因组不稳定性的保护机制.RNAi是由双链RNA引发的靶基因mRNA降解而导致基因转录后沉默的现象,研究者利用这一现象对要研究的基因进行抑制,从而形成了RNAi技术.RNAi具有特异高效的特点,因此该技术已在研究基因功能和进行基因治疗中得到广泛应用.RNAi的实现途径有多种,每种方式都各有优缺点.     

黄芪对肝硬化患者NK活性和T细胞亚群的影响

众多研究发现各种类型的肝硬化尽管发生原因不同,但都表现出自然杀伤细胞(NK)活性下降和细胞免疫功能低下,使机体对各种病原的清除能力下降。免疫应答异常,是肝细胞损害加重,肝功能进行性下降的重要原因之一。目前认为,传统中药黄芪具有显著的免疫增强和免疫调节功效及抗肝细胞损伤和抗感染的作用。为此,我们检测了32例肝硬化患者在应用黄芪治疗前后的NK活性和T细胞亚群的变化,旨在明确黄芪对肝硬化患者NK活性和细胞免疫功能的影响,为临床应用提供参考依据。