慢性肾功能不全肾活检的风险与价值分析

慢性肾功能不全（CRI）患者行经皮肾穿刺活检（PRB）是否仍有临床价值，其效益安全比如何，目前仍有争议。我们通过回顾分析，探讨CRI患者行经皮肾穿刺活检的价值与风险。     

高脂饮食对慢性肾脏病进展的影响

目的:探讨高脂饮食对5/6肾切除大鼠的肾损害及机制。方法:30只SD大鼠随机分为三组,高脂饮食组:喂饲高胆固醇饲料;手术对照组:喂饲普通鼠饲料;假手术组:喂饲普通鼠饲料。5个月后取肾组织,观察肾小球硬化及肾间质损害程度。同时检测血脂、血清肌酐、尿素氮、24h尿蛋白定量丙二醛(MDA)、氧化修饰低密度脂蛋白(ox-LDL)水平。结果:与对照组相比,高脂饮食组大鼠血脂水平显著升高,肾功能明显下降,24h尿蛋白定量显著升高;肾小球硬化及肾间质损害半定量积分明显升高;同时血清丙二醛与氧化修饰低密度脂蛋白水平均也显著升高。结论高脂饮食加速5/6肾切除大鼠肾损害,其机制可能与增强氧化应激反应有关。     

SD大鼠羊水间充质干细胞向神经样细胞体外诱导分化

目的:探讨体外诱导羊水间充质干细胞(AF-MSCs)分化成神经干细胞.方法:10只SD怀孕大鼠,180-240 g,胎龄16d,过量腹腔麻醉致死,开腹全部切除子宫,在无菌的条件下抽取全羊水,采用贴壁法分离AF-MSCs,体外培养扩增,观察细胞生长特性,流式细胞仪检测AF-MSCs表面抗原表达及细胞周期.取第3代AF-MSCs,加入预诱导液(DMEM/F12、100 mL/L FBS、1 mmol/Lβ-MEM)诱导24 h,然后加入诱导液(DMEM/F12、100 mL/L FBS、5 mmol/L β-MEM)诱导24 h,最后在分化维持培养液(DMEM/F12、20μg/L EGF、20μg/L bFGF)中培养,行免疫荧光染色,检测NSE和GFAP的表达.结果:成功分离、培养和传代SD大鼠AF-MSCs,流式细胞术检测提示大鼠AF-MSCs的G0/G1期细胞比例约为87.5%、S+G2+M期比例为12.5%,表达CD44为98.3%、GD29为70%、和CD105为33.2%、不表达CD45为0.5%,CD34为1%,DLA-DR(MHC class Ⅱ)为0.1%.诱导后,AF-MSCs能表达神经细胞标示物NSE和GFAP,且可在体外继续存活2 wk左右.结论:羊水中也存在MSCs,与其他来源的MSCs特点相符:羊水可以作为一种新的胎儿MSCs来源,而且能在体外诱导分化为神经细胞.     

西藏胡黄连醇提取物延缓5/6肾切除大鼠肾脏病变进展

目的 研究西藏胡黄连醇提取物(ethanol extract of Picrorhiza scrophulariiflora, EPS)对5/6肾切除大鼠肾脏病变进展的影响及其机制.方法 选择SD大鼠行5/6肾切除制备慢性肾脏病模型,随机分成EPS处理组和手术对照组,另设假手术组为阴性对照.9周后测定各组大鼠血尿素氮、血肌酐和肌酐清除率、24h尿蛋白定量,取肾组织检测肾小球硬化、肾间质损害程度,以及血清和尿中氧化指标.结果 (1)与手术对照组比较,EPS处理组的尿蛋白排泄率、血清尿素氮、肌酐水平均明显降低(P均<0.01),内生肌酐清除率升高;(2)EPS处理组肾小球硬化和肾小管间质损害程度较手术对照组明显减轻(P均<0.01);(3)与假手术组比较,5/6肾切除大鼠血清硒谷胱甘肽过氧化物酶(SeGSHPx)活性显著降低,24小时尿丙二醛(MDA)含量和血清晚期氧化蛋白产物(AOPPs)、晚期糖基化终产物(AGEs)含量显著升高(P均<0.01).EPS处理能够明显提高5/6肾切除大鼠血清SeGSHPx活性,降低尿MDA排泄率,以及血清AOPPs和AGEs含量(P均<0.05).结论 EPS能明显延缓慢性肾脏病大鼠的肾脏病变和肾功能恶化,其机制可能与抑制慢性肾脏病的氧化应激有关.     

饮食中晚期糖基化终产物对健康SD大鼠肾脏的影响

目的:观察食物中蛋白质的氨基与糖的醛基之间非酶性糖化反应的终产物晚期糖基化终产物对健康SD大鼠肾脏的影响。方法:实验于2005-03/07在南方医科大学肾内科实验室和南方医科大学附属南方医院动物实验中心完成。①分组及干预:选用健康雄性SD大白鼠40只,使用数字表法随机将大鼠分为两组:高晚期糖基化终产物饲料组,喂饲高晚期糖基化终产物饲料;低晚期糖基化终产物饲料组,喂饲低晚期糖基化终产物饲料。②高、低晚期糖基化终产物大鼠饲料的制作:普通大鼠饲料由广东省实验动物中心提供。高晚期糖基化终产物大鼠饲料加工方法:新鲜烤制的面包,取面包皮在烤箱烤180℃,2h,90℃,22h后,与普通大鼠饲料1∶1混合压制成颗粒饲料;低晚期糖基化终产物大鼠饲料:新鲜烤制的面包,取面包芯室温自然风干后与普通大鼠饲料1∶1混合后压制成颗粒饲料。③标本收集:分两批分别于干预后第2,3个月处死,收集24h尿液、腹主动脉抽血、留取部分肾组织。④检测指标:考马斯亮蓝法检测24h尿蛋白含量;自动生化分析仪测定肾功能、血脂、血糖及白蛋白水平;肾组织经固定、脱水、石蜡包埋、切片后行苏木精-伊红和PAS染色,观察组织病理改变。结果:大鼠40只均进入结果分析。①高晚期糖基化终产物饲料组大鼠血清及肾组织匀浆羧甲基赖氨酸含量自高于后第2个月即开始增加,至第3个月显著高于低晚期糖基化终产物饲料组大鼠(血清:16.1,7.8μg/L;肾组织匀浆:31.3,14.2μg/g;P<0.01)②至干预后第3个月,高晚期糖基化终产物饲料组大鼠24h尿蛋白含量显著高于低晚期糖基化终产物饲料组(54.54,11.51mg/24h,P<0.01)。③干预后第3个月肾组织病理学观察显示,高晚期糖基化终产物饲料组大鼠肾小球体积增大,系膜基质增生,表现为肾小球PAS阳性染色面积占整个肾小球面积之比值增大,显著高于低晚期糖基化终产物饲料组(肾小球体积:1.59×106,1.02×106mm3,P<0.05;系膜基质:0.87,0.53,P<0.05)。结论:高晚期糖基化终产物食物加重健康SD大鼠血循环和肾组织晚期糖基化终产物的潴留程度,增加肾组织损害,在肾小球肥大和硬化中起着关键性作用。长期食用富含晚期糖基化终产物的食物可能会对肾脏造成一定的损害。     

饮食中晚期糖基化终产物对健康SD大鼠肾脏的影响

目的：观察食物中蛋白质的氨基与糖的醛基之间非酶性糖化反应的终产物晚期糖基化终产物对健康SD大鼠肾脏的影响。方法：实验于2005-03／07在南方医科大学肾内科实验室和南方医科大学附属南方医院动物实验中心完成。①分组及干预：选用健康雄性SD大白鼠40只，使用数字表法随机将大鼠分为两组：高晚期糖基化终产物饲料组，喂饲高晚期糖基化终产物饲料；低晚期糖基化终产物饲料组，喂饲低晚期糖基化终产物饲料。②高、低晚期糖基化终产物大鼠饲料的制作：普通大鼠饲料由广东省实验动物中心提供。高晚期糖基化终产物大鼠饲料加工方法：新鲜烤制的面包，取面包皮在烤箱烤180℃，2h，90℃，22h后，与普通大鼠饲料1：1混合压制成颗粒饲料；低晚期糖基化终产物大鼠饲料：新鲜烤制的面包，取面包芯室温自然风干后与普通大鼠饲料1：1混合后压制成颗粒饲料。③标本收集：分两批分别于干预后第2，3个月处死，收集24h尿液．腹主动脉抽血、留取部分肾组织。④检测指标：考马斯亮蓝法检测24h尿蛋白含量；自动生化分析仪测定肾功能、血脂、血糖及白蛋白水平；肾组织经固定、脱水、石蜡包埋、切片后行苏木精-伊红和PAS染色，观察组织病理改变。结果：大鼠40只均进入结果分析。①高晚期糖基化终产物饲料组大鼠血清及肾组织匀浆羧甲基赖氨酸含量自高于后第2个月即开始增加，至第3个月显著高于低晚期糖基化终产物饲料组大鼠（血清：16．1，7．8μg／L；肾组织匀浆：31.3，14．2μg／g；P〈0．01）②至干预后第3个月，高晚期糖基化终产物饲料组大鼠24h尿蛋白含量显著高于低晚期糖基化终产物饲料组（54．54，11．51mg／24h，P〈0．01）。③干预后第3个月肾组织病理学观察显示，高晚期糖基化终产物饲料组大鼠肾小球体积增大，系膜基质增生，表现为肾小球PAS阳性染色面积占整个肾小球面积之比值增大，显著高于低晚期糖基化终产物饲料组（肾小球体积：1．59&;#215;10^6，1．02&;#215;10^6mm^3，P〈0．05；系膜基质：0．87，0．53，P〈0．05）。结论：高晚期糖基化终产物食物加重健康SD大鼠血循环和肾组织晚期糖基化终产物的潴留程度，增加肾组织损害，在肾小球肥大和硬化中起着关键性作用。长期食用富含晚期糖基化终产物的食物可能会对肾脏造成一定的损害。     

葡糖醛酸基葡糖胺聚糖硫酸盐对糖尿病肾病的干预效果

目的观察葡糖醛酸基葡糖胺聚糖硫酸盐(舒洛地特)对糖尿病肾病(DN)患者的干预效果。方法选择早期DN患者40例作为研究对象,将患者随机分为观察组与对照组,每组20例。对照组给予糖尿病常规治疗,观察组在此基础上给予舒洛地特肌肉注射治疗,600 LSU/次,1次/d,5 d/周,3周为1个疗程,停药1周后开始第2个疗程,共2个疗程。比较2组患者治疗前与治疗1、2、3个月后的尿丙二醛、尿白蛋白/肌酐(UACR)、尿转化生长因子-β1(TGF-β1)、血清脂联素(ADPN)、糖化血红蛋白(HbA1c)、估算肾小球滤过率(eGFR)、空腹血糖(FBG)的变化。结果治疗前后,2组间FBG、HbA1c水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);治疗后,观察组eGFR、血清ADPN水平高于对照组,尿丙二醛、UACR、尿TGF-β1水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论舒洛地特对DN患者肾血管功能及肾小管功能均有保护作用,且可能在早期即可延缓肾脏损害进展。     

超低温冻存对人羊水间充质干细胞生物学特性的影响

目的 观察超低温冻存对人羊水间充质干细胞(AF-MSC)生物学特性的影响.方法 通过羊膜腔穿刺取得人孕16～23周羊水.分离培养出人AF-MSC.将第4代人AF-MSC经短期超低温冻存、复苏后,通过细胞活性率测定、形态学比较、细胞增殖功能测定、细胞周期分析及细胞表面抗原检测,观察超低温冻存对人AF-MSC生物学特性的影响.结果 第4代人AF-MSC冻存、复苏前后的两组细胞无论在细胞活性率、细胞形态、细胞增殖能力、细胞周期、细胞表面抗原的表达等方面均无显著性差异(P＞0.05).结论 短期的超低温冻存对人AF-MSC的生物活性无明显影响.     

两步法分离和培养人羊水来源胚胎间充质干细胞的生物学特征

背景:目前对干细胞的体外分离纯化技术大多是建立在对细胞表面标记识别的基础之上,包括单抗贴壁铺展法、流式细胞分选法、免疫磁珠分选法等,但操作复杂,价格昂贵.目的:观察两步法分离和培养人羊水来源胚胎间充质干细胞的生物学特征.设计、时间及地点:开放性实验,于2008-03/2009-03在新疆医科大学干细胞研究室完成.材料:10例羊水标本来自怀孕16～22周行产前诊断或自愿引产的孕妇,在超声引导下行羊膜腔穿刺取得20～40 mL羊水.方法:采用改进的两步培养法分离和培养人羊水间充质干细胞,首先同一步法将羊水标本离心、接种、培养至出现梭形细胞为主、类成纤维细胞的间充质干细胞集落.然后将上清培养液转移至新的25 cm~2培养瓶中继续培养,至出现梭形细胞为主、类成纤维细胞的间充质干细胞集落且达70%汇合后消化,改用α-MEM培养基,同样添加碱性成纤维细胞生长因子,接种培养,记为第1代.主要观察指标:①原代及传代羊水间充质干细胞形态学变化.②羊水间充质干细胞细胞核型、细胞周期、生长曲线和集落形成能力测定.③流式细胞仪、免疫荧光和RT-PCR检测表面抗原和细胞因子.结果:实验成功分离、培养和传代人羊水间充质干细胞.①孕中期羊水细胞原代培养平均7 d可见散在的梭形细胞为主、类成纤维细胞的间充质干细胞集落;传代细胞在12 h内完全贴壁,经过一两天潜伏期后增殖迅速,培养六七天可达90%融合,细胞排列有一定的方向性,呈漩涡状、辐射状排列,细胞为长梭形,相互之间界限不清.②两种方法得到的羊水间充质干细胞染色体核型为正常二倍体核型;生长曲线均呈S形,但两步法在第(6.1±0.5)天就达到高峰,显著快于一步法第(7.2±0.6)天(P=0.035).流式细胞仪检测结果显示两步法羊水P3细胞S期细胞占(14±2.3)%,显著多于一步法(9.0±1.4)%(P=0.031).两种方法获得的羊水间充质干细胞低密度种植7 d后,均可形成散在的细胞集落,但两步法集落形成率为(15.0±2.3)%,显著多于一步法(10.0±1.8)%(P=0.021).③流式细胞仪检测结果显示,羊水间充质干细胞表达CD44、CD29、CD105,而CD34、CD45、HLA-DR阴性;免疫荧光检测表明羊水中含有Oct-4阳性细胞,但两步法羊水间充质干细胞中Oct-4阳性细胞比例为(1.2±0.3)%,显著高于一步法(0.9±0.2)%(P=0.041);RT-PCR分析表明两种方法获得的羊水间充质干细胞均表达Oct-4.结论:人羊水中也存在间充质干细胞,两步培养法是一种高效、简便实用而且不干扰常规产前诊断程序的方法.