正常生育男性成熟精子mRNA的种类和特征

目的:剖析具有正常生育能力男性成熟精子mRNA的种类和丰度。方法:健康并育有后代的成年男性10例,禁欲1周后取精液,上游法优化精子,Trizol试剂提取精子总RNA。混合所有总RNA进行基因表达系列分析(SAGE)。结果:所建SAGE文库共获877个克隆,测序得到21 052个标签,出现两次以上的独特性标签有2 712种。经与SAGEm ap数据库比对,19.7%的独特性标签没有基因匹配,代表新基因;其余能匹配的基因中,67%具有蛋白质结合或核酸结合能力,41%具有催化活性,13%与信号转导有关,与细胞运输、精子结构、转录调节相关者分别达到10%左右。结论:人成熟精子中存在数量庞大、种类繁多的mRNA。     

癌基因bcl-2及抑癌基因p53在宫颈癌组织中的表达及临床意义

目的　探讨宫颈癌 bcl- 2和 p5 3基因表达的改变与其临床意义。方法　对 2 4例宫颈癌组织及对照组宫颈组织采用半定量反转录聚合酶链反应 (RT- PCR)法检测 bcl- 2和 p5 3基因蛋白的表达 ,结合临床资料分析基因改变的临床意义。结果　宫颈癌中 bcl- 2基因蛋白表达高于对照组 ,p5 3基因蛋白表达低于对照组 ,其中二者均为 期高于 期 , 期均低于 期和 期 ,P<0 .0 1。结论　 bcl- 2和 p5 3基因的表达在宫颈癌的发生发展中起重要作用 ,在宫颈癌早期 ,bcl- 2主要抑制细胞凋亡 ,而 p5 3则在癌组织中促进细胞凋亡     

Bcl-2和Bax在宫颈癌组织中的表达

目的：探讨宫颈癌中Bcl-2和Bax基因表达的改变及其临床意义。方法：对24例宫颈癌组织及对照组宫颈组织采用半定量逆转录聚合酶链反应（RT－PCR）法检测Bcl-2和Bax基因蛋白的表达，结合临床资料分析基因改变的临床意义。结果：宫颈癌中Bcl-2和Bax基因蛋白表达高于对照组，其中I期高于Ⅱ期，Ⅲ期均高于I期和Ⅱ期，P＜0．01。结论：Bal-2和Bax基因的表达在宫颈癌的发生发展中起重要作用，在宫颈癌早期，Bcl-2主要抑制细胞凋亡，而Bax则在癌组织中促进细胞凋亡。     

双龙胶囊对哮喘大鼠肺组织白三烯类化合物含量的影响

目的研究哮喘大鼠肺组织中白三烯B_4(LTB_4)、白三烯C_4(LTC_4)及白三烯D_4(LTD_4)含量的变化及中药复方双龙胶囊对其的影响。方法将SD大鼠随机分成空白组、哮喘模型组、对照组(地塞米松组)、高、中、低3个中药剂量组。用卵蛋白致敏大鼠,以抗原攻击后建立哮喘模型,并用反向高效液相色谱法(RP-HPLC)测定各组大鼠肺组织匀浆中LTB_4、LTC_4、LTD_4含量,并进行比较。结果哮喘大鼠肺组织中LTB_4、LTC_4、LTD_4含量较正常对照组比均有显著升高,地塞米松和双龙胶囊8．27 g/kg,4．13 g/kg均可明显抑制哮喘大鼠肺组织中白三烯的生成(P＜0．05)。结论双龙胶囊可明显抑制哮喘大鼠肺组织中炎性介质白三烯的生成,这可能是双龙胶囊用于治疗支气管哮喘的抗炎平喘作用机制之一。     

来沪境外人员乙型肝炎病毒基因定量分析与血清标志、肝功能指标的关系

〔目的〕探讨乙型肝炎病毒（HBV）感染者血清HBV-DNA拷贝数、HBV血清标志与肝功能指标丙氨酸转氨酶（ALT）和天冬氨酸氨酶（AST）的相互关系及意义,综合判定乙型肝炎患者受HBV感染的程度。〔方法〕从11006名来沪境外旅行者中发现484例HBsAg阳性,选取其中的88例采用实时荧光定量聚合酶链反应（Real-time Polymerase Chain Reaction,PCR）技术和酶联免疫吸附试验（ELISA）检测HBV-DNA拷贝数及HBV血清标志;采用全自动生化分析仪测定肝功能指标ALT、AST。运用SPSS13.0软件对数据进行分析。〔结果〕HBV各血清标志均与HBV-DNA拷贝数存在相关性,多元回归分析显示HBV-DNA检测的表达量与HBeAg存在明显的依从性（回归系数B=2.850,P=0.001）。HBV-DNA阳性组和阴性组的血清酶定量检测,ALT p=0.047,AST p=0.01,HBV-DNA阳性组和HBV-DNA阴性组间血清酶指标存在差异,而血清酶正常组与异常组的定性检测,ALT p=5.27,AST p=0.16,血清酶正常组与异常组间HBV-DNA拷贝数无差异。HBV-DNA拷贝数与血清酶无相关性（相关系数ALT r=0.048,ASTr=0.143）。〔结论〕HBeAg的表达与HBV-DNA拷贝数有很好的依从性。HBV-DNA存在与否与肝脏损伤有关,但肝脏损伤程度与血清中HBV-DNA数量无直接关系。     

内毒素对体外培养的肝细胞凋亡相关基因表达的影响

内毒素（ｌｉｐｏｐｐｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ，ＬＰＳ）在体外可以诱导肝细胞发生凋亡［１］。细胞凋亡的发生发展与许多凋亡相关基因表达的改变有密切的关系。１．材料与方法：采用Ｓｅｇｌｅｎ将雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠的肝细胞分离后培养２４ｈ。在培养基中直接加入ＬＰＳ１０ｍｇ／Ｌ，分别在３ｈ、６ｈ、１２ｈ、和２４ｈ收集肝细胞，同时设正常对照组。用Ｍｏｏｒｅ等［２］的方法提取培养细胞的ＤＮＡ片段。一步法提取ＲＮＡ。半定量ＲＴ－ＰＣＲ法检测在不同时间点基因ＰＣＲ产物的含量。２．结果：肝细胞的凋亡随着ＬＰＳ作用时间…     

用RAPD技术对利什曼原虫kDNA、nDNA的分析

目的用RAPD技术分析利什曼原虫的kDNA及nDNA.方法用7种随机引物扩增L.infantum和L.donovani GS2的kDNA和nDNA,分析扩增结果并计算两虫种间kDNA和nDNA共享度F值.结果7种随机引物对两虫种的kDNA、nDNA均扩增出各自特有带型.L.infantum和L.donovani GS2两虫种间kDNA、nDNA扩增片段的F值分别为0.227和0.2.结论kDNA和nDNA均可作为利什曼原虫的RAPD扩增模板,这7种引物均可用于对L.infantum和L.donovani GS2进行RAPD分析.该两虫种kDNA、nDNA的共享度较低,说明二者遗传距离较远.在进行RAPD分析时,提取全DNA(包括kDNA和nDNA)进行扩增即可.     

大鼠寡霉素敏感相关蛋白(OSCP)基因的体外扩增及克隆

目的：构建大鼠寡霉素敏感相关蛋白(OSCP)基因重组质粒。方法：从雌性SD大鼠脑组织中提取总RNA，根据OSCP基因已知序列，设计合成1对引物，用PCR方法扩增编码OSCP的基因片段，插入pGEM-T easy质粒，转化大肠杆菌JMl09感受态细胞，经酶切鉴定，而后进行测序。结果：OSCP基因体外扩增产物大小为700bp，重组质粒经酶切鉴定表明获得正确重组子，测序结果与已知序列基本吻合。结论：在国内初次克隆了大鼠OSCP基因，为下一步OSCP的表达及功能研究奠定了基础。     

夏氏疟原虫感染的红细胞膜表面抗原Pc90的cDNA特征 I．cDNA文库的构建及阳性克隆的筛选

目的：构建夏氏疟原虫早期滋养体的ｃＤＮＡ文库，并从中筛选出表达Ｐｃ９０的阳性克隆。方法：采用ＧＴＣ／ＣｓＣｌ法提取ＲＮＡ，ｃＤＮＡ克隆入λ－ＺＡＰ噬菌体，用抗Ｐｃ－ＨＣＰＭ血清３次筛选并经抗Ｐｃ９０单克隆抗体复筛，阳性克隆经体内剪接后行限制性内切酶酶切分析。结果：该ｃＤＮＡ文库有１．９×１０６个重组体。用抗Ｐｃ９０－ＨＣＰＭ的多克隆抗体筛选后，得到１６个阳性克隆，其长度分别为：０．６ｋｂｐ，１．４ｋｂｐ，１．６ｋｂｐ，２．２ｋｂｐ以及２．５ｋｂｐ。其中仅２．２ｋｂｐ和２．５ｋｂｐ克隆与抗Ｐｃ９０单克隆抗体反应呈阳性。限制性内切酶酶切分析表明，２．２ｋｂｐ，２．５ｋｂｐ和１．６ｋｂｐ的克隆具有不同的特征。结论：２．２ｋｂｐ和２．５ｋｂｐ的克隆极有可能表达Ｐｃ９０蛋白。