辐射损伤后小鼠外周血一氧化氮变化

一氧化氮(NO)是一种第一和第二信使分子,在体内NO是由L-精氨酸(L-Arg)与O2在一氧化氮合酶(NOS)的作用下合成的.机体受到一定的应激因素作用后,体内诱导型NOS的合成增加,进一步导致NO的含量增加.电离辐射作用于机体时,导致NOS的增加,诱导NO的合成[1].本研究探讨辐射损伤后外周血NO浓度的变化规律,以期为辐射事故后确定机体受照剂量提供科学依据.     

含结核分枝杆菌Ag85A基因的2型重组腺相关病毒的构建和免疫原性

目的构建含结核分枝杆菌Ag85A基因的2型重组腺相关病毒并初步研究其免疫原性。方法采用PCR法从结核杆菌H37Rv株扩增Ag85A基因，将PCR扩增产物克隆于2型腺相关病毒（AAV-2）表达质粒pSNAV中，构建重组质粒pSNAV-Ag85A；用脂质体转染的方法将重组质粒转入BHK-21细胞中，G418筛选得到能表达目的基因混合细胞系BHK—Ag85A；用具有rAAV-2包装功能的辅助病毒感染BHK-Ag85A，纯化后得到rAAV-2-Ag85A：Western blotting检测重组病毒Ag85A基因在BHK-21细胞中的表达；rAAV-2-Ag85A免疫Balb／c小鼠．ELISA法检测血清中抗-Ag85A抗体，^51Cr释放分析检测细胞毒性T淋巴细胞（CTL）活性。结果PCR扩增的Ag85A基因序列与GenBank公布的序列一致，纯化后得到的rAAV-2-Ag85A滴度为1×10^12 virus particles／ml；Western blotting检测到rAAV-2-AgSSA在BHK-21细胞中能够表达出一相对分子质量为32000的多肽；rAAV-2-Ag85A免疫的Balb／c小鼠．抗-Ag85A抗体的滴度可达1：1024，同时还可激发Ag85A特异性的CTL产生。结论rAAV-2-Ag85A构建成功．rAAV-2-Ag85A免疫小鼠可以同时诱导体液和细胞免疫反应的出现。rAAV-2-Ag85A对于防止结核分枝杆菌感染．尤其是作为结核病的治疗性疫苗可能具有潜在的应用价值，值得进一步深入研究。     

放射医学教案准备的几点体会

教案是课堂教学的基础和关键环节。放射医学涉及的知识面比较广,因此对教案的要求就更高。要切实提高教师教学水平、确保课堂教学质量、保证教学效果,放射医学教案的准备就要从教学对象、教材内容和教案布局等几方面入手。     

AIF重组质粒的构建、表达和功能的研究

目的构建人凋亡诱导因子(AIF)基因功能片段的真核表达载体pcDNA3.1( )AIF,并初步研究AIF在细胞凋亡中的作用。方法从人细胞中提取总RNA,RTPCR扩增AIF基因片段;克隆到pMD18T载体上,通过酶切和测序进行鉴定;将AIF基因片段插入pcDNA3.1( ),构建真核表达载体;电转化淋巴母细胞Raji细胞,观察AIF的表达水平和功能。结果成熟AIF蛋白分子在真核细胞中表达,并转移到细胞核中,诱导Caspase非依赖性细胞凋亡。结论成功构建了pcDNA3.1( )AIF真核表达载体,AIF在Caspase非依赖性细胞凋亡中发挥重要作用。     

乙型肝炎表面抗原基因重组2型腺相关病毒的免疫原性研究

目的观察含乙型肝炎表面抗原(HBsAg)基因的2型重组腺相关病毒(rAAV-2-HBsAg)在Balb/c小鼠体内的免疫原性。方法以5×1011的重组病毒颗粒单次注射Balb/c小鼠,RT-PCR扩增肝脏组织中HBsAg基因cD-NA:ELISA检测肝组织中HBsAg的表达;RIA法检测血清中表面抗体(抗一HBs)滴度;51Cr释放分析检测细胞毒性T淋巴细胞(CTL)活性。结果外源性HBsAg基因己整合到肝细胞染色体DNA并有效地转录和翻译,表达水平最高可达33.8pg/(mglivertissue),rAAV-HBsAg免疫小鼠后可以诱导机体产生表面抗体并激发特异性CTL。结论外源性HBsAg基因可以转移到小鼠肝细胞并稳定表达;rAAV-2-HBsAg免疫小鼠可以同时诱导体液和细胞免疫反应的出现。提示基于rAAV-2载体的乙型肝炎(HBV)疫苗,对于防止HBV感染,尤其是作为慢性乙型肝炎的治疗性疫苗可能只有潜在的应用价值,值得做进一步的系统研究。     

给医学生开设非专业选修课的探索

当代大学生不但要注重专业知识和技能教育,更要培养文学、社会、历史、伦理、美学等各方面的综合素质。本研究针对我校的医学生展开非医学类的选修课《中国传统手工艺术》,通过让学生自己探讨的教学方式提高他们分析和解决问题的能力,培养创造性思维,收到了较好的教学效果。     

含hTERT片段的重组逆转录病毒感染对树突状细胞功能的影响

目的观察含人端粒酶逆转录酶（hTERT）片段的重组逆转录病毒感染对树突状细胞（DCs）功能的影响。方法ELISA试剂盒检测DCs培养液中IL-12水平;混合白细胞（MLR）反应检测含hTERT片段的重组逆转录病毒感染的DCs（hTERT-DCs）和未感染的DCs（N-DCs）刺激同种异体淋巴细胞增殖能力;流式细胞术检测DCs表面分子CD80、CD83、CD86和HLA-DR的变化;CytoTox96非放射性细胞毒性检测试剂盒检测细胞毒性T淋巴细胞（CTL）反应。结果hTERT-DCs和N-DCs在分泌IL-12的水平、刺激同种异体淋巴细胞增殖的能力方面无明显差异;hTERT-DCs的CD83表达水平低于N-DCs,同时,hTERT-DCs激发的CTL对端粒酶阳性的靶细胞杀伤率明显高于端粒酶阴性的靶细胞（P〈0．05）。结论hTERT-DCs尽管有可能阻止DCs自身的成熟,但在活化淋巴细胞、刺激淋巴细胞分化增殖的能力方面并没发生明显改变,并且还能激发hTERT特异性CTL。     

给医学生开设非专业选修课的探索

当代大学生不但要注重专业知识和技能教育,更要培养文学、社会、历史、伦理、美学等各方面的综合素质。本研究针对我校的医学生展开非医学类的选修课《中国传统手工艺术》,通过让学生自己探讨的教学方式提高他们分析和解决问题的能力,培养创造性思维,收到了较好的教学效果。     

p53,miR-365在紫外线诱导小鼠胚胎成纤维细胞S期阻滞中作用

目的探讨中波紫外线(UV-B)应激下p53调控细胞周期阻滞过程中miR-365的作用。方法用50 J/m2的UV-B分别照射p53正常表达的小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)和p53低表达的MEF,分别在照前和照后不同时间点用流式细胞术检测细胞周期分布情况;用逆转录聚合酶链反应和蛋白质印迹(Western blot)分别检测p53在mRNA和蛋白表达水平的改变;用实时荧光定量聚合酶链反应检测miR-365的表达情况。结果 50 J/m2的UV-B照射后18 h,p53正常表达的MEF出现S期阻滞,并在照后24 h出现明显的凋亡峰,而在p53低表达的MEF中未观察到此变化;2种细胞其p53的mRNA表达水平在照后未见明显改变;p53正常表达的MEF的p53蛋白在照后1 h开始升高,至12 h达到峰值,24 h开始下降;而在p53低表达的MEF中p53蛋白未见明显改变;UV-B照射后p53正常表达的MEF中miR-365在照后4 h升高(P<0.05),并持续到照后8 h,照后12 h恢复到照前水平;而在p53低表达的MEF中miR-365无明显变化。结论UV-B照射可能通过转录后调控作用提高细胞p53蛋白水平进而发挥其诱导细胞S期阻滞的作用;miR-365参与了p53蛋白诱导S期阻滞的过程。     

致死剂量γ射线照射后动物肝脏一氧化氮的变化

目的 研究致死剂量的γ射线照射健康NIH小鼠后,其肝脏组织中一氧化氮（NO）水平的变化及其诱导型一氧化氮合酶（iNOS）和p53蛋白表达的相关性。方法 实验动物于室温环境下饲养,给予小鼠致死剂量,即9.0 Gy的⁶⁰Co γ射线一次全身均匀照射。分别于照射前和照射后1、3、6、9、12、24 h用NO检测试剂盒检测肝脏组织中NO水平的变化,并用免疫组织化学法检测肝脏组织中iNOS和p53蛋白的表达情况。结果 致死剂量照射后,小鼠肝脏组织中NO水平呈现先升高后降低并趋于正常参考值的趋势;照射后6 h开始升高并维持至照射后9 h,与照射前比较,差异有统计学意义（P<0.05）;照射后12 h开始恢复,并降至正常参考值范围（P>0.05）。致死剂量照射后,小鼠肝脏组织中有iNOS和p53蛋白的阳性表达,两者的相关系数为0.797（P<0.01）。结论 致死剂量γ射线照射后,动物肝脏组织中NO水平变化呈先升高后降低的趋势,且与p53蛋白的表达呈正相关。