PARP抑制剂3-AB的辐射致敏作用及其机制

多聚（ADP-核糖）聚合酶[poly（ADP-ribose）polymerase，PARP]是广泛存在于细胞内的一种具有蛋白修饰和核苷酸聚合作用的聚合酶，在多种有害因素造成细胞DNA断裂损伤修复过程中发挥重要作用。3-氨基苯甲酰胺（3-aminobenzamide，3-AB）是一种PARP特异性抑制剂，有报道证实，通过3-AB对PARP的抑制作用可以改变细胞对辐射引起的双链断裂的修复，引起一系列生理生化改变，而细胞对于电离辐射的敏感性也可由于PARP的活性而被改变。     

重症急性胰腺炎13例的观察与护理

目的:减少重症急性胰腺炎并发症,提高护理质量。方法:对13例重症急性胰腺炎病人,运用整体护理程序有针对性地实施护理,密切观察病情变化;监测各种化验指标;营养支持的护理;加强基础护理;并发症的观察与护理;心理护理及健康教育。结果:12例病人好转治愈出院,1例死亡,无并发症发生。结论:重症急性胰腺炎病情变化快,病情复杂,护理难度大,需要高素质护士,护理既要全面周到又要重点突出和有针对性,以人为本,实施整体护理。     

非预防医学专业预防医学教学中TBL教学模式初探?

TBL(team-based learning)教学是PBL(problem-based learning)基础上改革创新并逐渐兴起的一种新型教学模式,强调以小组为单位进行集体性学习,可促进学生自主学习,培养创造性思维和团队协作能力等。为了解TBL教学法应用于预防医学教学中对学生学习态度和教学效果的影响,探讨其推广的可行性,通过构建学习团队、课前准备、课堂讨论、测试、问卷调查等,在非预防医学专业本科学生中采用TBL教学尝试。结果显示,TBL教学效果优于传统的LBL(lecture-based learning)授课,提高了学生的学习积极性,促进学生自主学习,也显示出一定的不足。围绕不足今后应有针对性地积极实践和完善、优化TBL教学模式,提高医学教育教学质量。     

小鼠分泌型内皮抑素原核表达载体pNZ44-ssEndostatin的构建及表达

目的：构建带有小鼠分泌型内皮抑素（ssEndostatin）的原核表达载体pNZ44-ssEndostatin并在双歧杆菌中表达Endostatin蛋白方法：利用引物设计软件oligo6．0设计引物，从pcDNA3.1-Egr1-ssEndostatin质粒上PCR扩增得到ssEndostatin基因。经测序证实获得的ssEndostatin基因序列正确后，进行粘端连接，将ssEndostatin基因链接到pNZ44原核表达载体上，构建成pNZ44-ssEndostatin重组载体，PCR、酶切鉴定正确后电转化到双歧杆菌中然后利用ELISA法检测Endostatin表达。结果：测序结果证实ssEndostatin基因序列与Genebank中所公布的一致，说明ssEndostatin基因扩增正确而且构建的质粒pNZ44-ssEndostatin的PCR、酶切鉴定结果与预测的一致，说明重组质粒pNZ44-ssEndostatin构建成功转化后挑取阳性克隆进行菌落PCR证实重组质粒pNZ44-ssEndostatin已戍功转入双歧杆菌中ELISA法检测到转化有重组质粒pNZ44-ssEndostatin的双歧杆菌的菌体内有较高水平的Endostatin表达，且培养48h的表达量较20h的高，有氧条件下表达较缺氧条件下高，但上清中未捡测到。结论：成功地构建了带有分泌信号的小鼠内皮抑素表达载体pNZ44－ssEndostalin，成功转入双歧杆菌中并在菌体中表达，为后续利用双歧杆菌作为工具进行Endostatin基因治疗奠定了实验基础。     

全长型人Smac基因真核表达载体构建及表达

目的 构建全长型(full length,FL)人Smac基因(hSmac)真核表达载体pcDNA3.1 -FL hSmac,并在肝癌细胞中表达.方法 应用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术从人宫颈癌细胞株Hela中扩增到Smac CDs基因片段,构建重组真核表达载体peDNA3.1 -FL hSmae.PCR、酶切鉴定重组质粒正确后,通过脂质体介导将其和作为阴性对照的空载体pcDNA3.1 分别转染人肝癌细胞株(SMMC-7721).同时转染含EGFP的质粒pcDNA3.1 -EGFP.利用荧光显微镜和流式细胞术检测转染效率.采用RT-PCR、western blot法检测外源基因Smac的表达.结果 PCR扩增片段与预期片段大小相符,插入片段测序结果与GenBank公布的一致,表明人Smac基因克隆成功.且鉴定证实真核表达载体pcDNA3.1 -FL hSmac构建成功.流式细胞术检测到转染效率高达48%,荧光显微镜下也可见非常明亮的绿色荧光.无论是在mRNA水平还是蛋白水平上,转染后的细胞中外源基因Smac表达均明显增加.结论 成功构建重组真核表达载体pcDNA3.1 -FL hSmac,并在肝癌细胞中明显表达,为研究Smac基因在细胞凋亡过程中的调控作用.以及探讨以Smac基因为基础的肿瘤基因治疗策略提代基础依据.     

运用心理护理对急性胰腺炎患者进行健康教育

急性胰腺炎起病急，病程长，尤其是出血坏死型胰腺炎。病情重，并发症多，死亡率高。2003年我科共收治急性胰腺炎患者152例，而2002年共收治98例，2001年共收治79例。由于一些人生活不规律，暴饮暴食，过度饮酒等原因，使急性胰腺炎的发病率逐年升高。所以。改变人们的不良生活行为主要依靠社区及媒体的健康宣传，而对住院病人更需要进行必要的健康教育。     

美国milestone住院医师胜任力评价系统及启示

基于胜任力的医学教育及人才培养成为全球趋势,美国已经开发出一套包括急诊、骨科、胸外科在内的26个专科的医师胜任力评价系统。在此介绍了该评价系统的开发背景、专科医师胜任力评价表的结构、内容及使用方法,并以急诊专科医师评价表为例进一步加以说明。美国医师胜任力评价系统为全国毕业后医学教育提供了统一的培养框架,能实现过程控制与结果评价相结合、自我评价与他人评价相结合,使评价更加客观、全面。为我国医师评价和培养提供新的借鉴。     

TRAIL和endostatin双基因-放射治疗对人血管内皮细胞增殖、周期和凋亡的影响

目的：观察重组质粒pshuttle-Egr1-shTRAIL-shES携带的双基因TRAIL和endostatin联合X射线照射后,对血管内皮细胞ECV304增殖、周期和凋亡的影响。方法：实验分为对照组、空载体pshuttle转染组、TRAIL单基因重组质粒pshuttle-Egr1-shTRAIL转染组、endostatin单基因重组质粒pshuttle-Egr1-shES转染组和TRAIL、endostatin双基因重组质粒pshuttle-Egr1-shTRAIL-shES转染组。细胞转染采用脂质体介导的方法进行,对照组不转染。细胞转染后给予X射线照射（照射剂量分别为0、0.1、0.5、1.0、2.0和5.0 Gy）,采用ELISA法检测转染细胞中TRAIL和endostatin蛋白的表达,并分别采用MTT及PI单染或/和Annexin Ⅴ双染流式细胞术（FCM）检测TRAIL、endostatin单/双基因治疗联合放射治疗对ECV304细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响。结果：2.0 Gy X射线照射后与0 h比较,各时间点转染pshuttle-Egr1-shTRAIL-shES的ECV304细胞上清中TRAIL和endostatin蛋白表达水平明显升高（P<0.01）,分别于12和24 h达峰值;不同剂量X射线照射可诱导TRAIL和endostatin蛋白表达,且蛋白表达水平随照射剂量的增加而明显升高（P<0.05或P<0.01）。MTT结果显示,X射线照射后, pshuttle-Egr1-shTRAIL、pshuttle-Egr1-shES和pshuttle-Egr1-shTRAIL-shES组ECV304细胞A490值均明显低于对照组和pshuttle组,并显示一定的时间-效应和剂量-效应关系,并伴有细胞凋亡率明显增加、G₂+M期细胞百分数明显上升和G₀/G₁期细胞百分数明显下降。上述细胞效应,尤以pshuttle-Egr1-shTRAIL-shES组变化最为明显,与pshuttle-Egr1-shTRAIL和pshuttle-Egr1-shES组比较差异有统计学意义（P<0.05 或 P<0.01）。结论： TRAIL和endostatin双基因联合放射治疗可抑制ECV304细胞生长,影响细胞周期进程,促进细胞凋亡,且其治疗效果优于单纯放射治疗或TRAIL/endostatin单基因-放射治疗。     

大鼠Smac基因的克隆及其在心肌细胞H9C2中的表达

目的：克隆大鼠促凋亡基因Smac,构建真核表达载体pcDNA3.1⁺-rSmac,并在心肌细胞中表达。方法：应用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）技术从大鼠肾组织中扩增到大鼠Smac基因的CDs片段,构建含Smac基因的真核表达载体pcDNA3.1⁺-rSmac并将此重组质粒、空载体pcDNA3.1⁺、pcDNA3.1⁺-EGFP通过脂质体介导转染大鼠心肌细胞H9C2,荧光显微镜、流式细胞术间接检测转染效率,RT-PCR法检测外源基因的表达。结果：经测序目的基因序列与GenBank（NM_001008292）公布的结果一致,所构建的重组质粒pcDNA3.1⁺-rSmac经PCR和酶切鉴定所释放的片段大小与预期结果相符。荧光显微镜和流式细胞术检测,细胞转染有效,转染效率达38.36%。转染重组载体pcDNA3.1⁺-rSmac 48 h后,H9C2细胞Smac的mRNA水平明显升高。其中,对照组Smac/β-actin为1.19,空载体组Smac/β-actin为1.31,二者之间差异无显著性（P>0.05）;转染pcDNA3.1⁺-rSmac组Smac/β-actin为1.67,与对照组比较差异具有显著性（P<0.01）。结论：克隆大鼠Smac基因成功,成功构建重组真核表达载体pcDNA3.1⁺-rSmac,并在转染后的心肌细胞中表达,为研究Smac基因在心肌细胞凋亡过程中的调控作用奠定基础。