针对MAGE-1基因RNAi在恶性胶质瘤SHG-44细胞中的作用研究

目的构建抑制黑色素瘤抗原-1(MAGE-1)的siRNA表达载体,鉴定其在人恶性胶质瘤细胞系SHG-44细胞中对MAGE-1基因表达的干涉作用。方法化学合成2对编码短发夹RNA序列的靶向MAGE-1基因寡核苷酸链,克隆到经BglⅡ、HindⅢ双酶切的pSUPER载体上,重组构建RNA干涉(RNAi)质粒载体。利用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)、流式细胞术和荧光显微镜,检测经稳定转染后SHG-44细胞中MAGE-1的表达,以了解siRNA的干扰效果。结果重组构建的pSUPER-MAGE-1载体经双酶切电泳及插入基因片段序列分析,表明寡核苷酸链成功插入到预计位点,并且序列与预期完全一致。稳定转染后G418筛选出的SHG-44多克隆细胞MAGE-1的表达经RT-PCR、流式细胞术和荧光显微镜检测,2对siRNA均有较明显的干涉作用。结论成功构建了针对MAGE-1基因的siRNA表达载体,抑制SHG-44细胞中的MAGE-1分子的表达。     

RNA干扰基因敲除MAGE-1在恶性胶质瘤U87细胞中的初步研究

目的：通过构建抑制MAGE-1的短片段双链核糖核酸（siRNA）表达载体，鉴定其在人恶性胶质瘤细胞系U87细胞中对MAGE．1基因表达的干涉作用。方法：化学合成2对编码短发夹RNA序列的靶向MAGE—1基因寡核苷酸链，克隆至经BglⅡ、HindⅢ双酶切的pSUPER载体上，重组构建核糖核酸干扰（RNAi）质粒载体。利用RT-PCR、流式细胞术和荧光显微镜，检测经稳定转染后胶质瘤U87细胞中MAGE-1的表达，以了解siRNA的干涉效果。结果：重组构建的pSUPER—MAGE—1载体经双酶切、电泳及插入基因片段序列分析，表明寡核苷酸链成功地插入至预计位点，且序列与预期完全一致。稳定转染后G418筛选出的U87多克隆细胞MAGE-1的表达经RT—PCR、流式细胞术和荧光显微镜检测，2对siRNA均有较明显的干扰作用。结论：载体的成功构建并能对U87细胞中的MAGE—1分子进行RNAi，为进一步研究MAGE—1在肿瘤中的作用，分析基因功能，展开肿瘤基因治疗奠定了基础。     

识别不同结构域的PTA1/CD226的mAb与活化血小板的关系

目的:研究识别不同PTA1/CD226分子结构域的mAb与刺激血小板活化的关系。方法:采用识别不同结构域的抗PTA1/CD226的mAb(FMU17),应用免疫荧光染色、流式细胞术和血小板凝集试验,研究识别不同结构域mAb对血小板的活化作用。结果:识别CD226第1个结构域的3株mAb(FMU1、2和3)可以与血小板结合,并可刺激血小板发生凝集,而识别CD226第2个结构域的mAbFMU6、FMU7以及识别两个结构域之间序列的FMU4和FMU5既不能与血小板表面天然的CD226分子结合,也不能刺激血小板活化。结论:抗PTA1/CD226mAb刺激血小板活化与抗体识别的结构域有关。     

人CD226分子胞膜外区D1和D2真核表达载体的构建、表达和鉴定

目的 构建含有人CD226分子胞膜外区结构域1(D1)和结构域2(D2)的真核表达载体,表达并纯化重组蛋白.方法用特异性引物分别扩增CD226 D1和D2的基因,定向插入真核表达载体pSecTag2B-Fc,进行酶切和DNA测序鉴定,重组质粒瞬时转染293T细胞,收集上清,纯化蛋白及SDS-PAGE和Western blot鉴定表达产物.结果利用PCR方法克隆出CD226胞膜外区D1和D2的基因,并正确插入pSecTag2B-Fc载体中,真核表达载体瞬时转染293T细胞,Western blot结果证实转染293T细胞的培养上清液中含有hCD226D1-Fc和hCD226D2-Fc融合蛋白,培养上清经亲和层析柱纯化,可获得较高纯度的重组蛋白.结论 成功的构建了分泌型融合蛋白hCD226D1-Fc和hCD226D2-Fc真核表达载体,获得纯度较高的融合蛋白,为进一步探讨其配受体的相互作用机制奠定了基础.     

高压氧对人重症牙周炎牙龈血流量、血流速度和血浓度作用及机理研究

目的 :探讨高压氧 (HBO)对人重症牙周炎牙龈血流量 (GBF)、血流速度 (BCV)和血浓度 (BC)的作用及HBO治疗牙周炎的机理。方法 :选自口腔中心门诊的 3 0例重症牙周炎患者 ,随机分为二组 ,即治疗组和对照组 ,治疗组用HBO治疗 ,对照组用漱口液漱口。用激光多普勒血流仪测定二组治疗前后的GBF、BCV和BC。结果 :HBO能使牙周炎患者GBF增加 2 .1倍 ,BCV增加 6.7倍 ,BC降低为治疗前的 5 8.2 % ,与对照组比均有非常显著性差异 (P <0 .0 1)。结论 :HBO能使牙周炎患者GBF和BCV增加 ,BC减少 ,能改善牙龈微循环 ,对治疗牙周炎有积极意义     

肝部分移植术围手术期营养管理

目的：探讨肝部分移植术围手术期营养管理。方法：通过１例１０岁女性肝部分移植病人,介绍围手术期能量代谢的特点及营养支持方法。结果：术 后１周内采用以葡萄糖和蛋白质为主的完全肠外营养,２－３周内采用肠内营养结合肠外营养,术后第４周始则采用肠内营养。病人顺利恢复,现已生存１年余。结论：肝部分主围手术期的营养管理应根据病人肝功能恢复程度和有无并发症,采取灵活多变的营养方式,营养来源应以人血白蛋白为主,可少     

肝移植术后出凝血功能的调控

目的：探讨肝移植术后出凝血功能的调控方法及意义。方法：通过１１ 例活体肝部分移植术病例,介绍术后出凝血功能的监测指标及调控方法。结果：肝移植术后出凝血功能调控的目标为维持血压、脉搏相对稳定,控制下列指标在一定范围内。 Ｈｂ ：９０ ～１１０ｇ／ Ｌ, Ｈｔ：２５ ％ 上下, Ｐ Ｌ Ｔ：３０ ～５０ ×１０９／ Ｌ, Ｐ Ｔ：１５ ～２０ｓ , Ａ Ｃ Ｔ：１５０ ～２００ｓ,调控手段是依据上述指标补充凝血因子或使用扩血管剂或抗凝剂。结论：本研究所介绍的方法能有效防止肝移植术后的出血和血栓形成。     

巨噬细胞诱发的实验性增生性玻璃体视网膜病变中的几种早期炎性细胞因子

目的观察在增生性玻璃体视网膜病变（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅｖｉｔｒｅｏｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ,ＰＶＲ）模型中几种早期炎性细胞因子的含量变化及其与ＰＶＲ形成时相的关系。方法采集巨噬细胞诱发的兔眼ＰＶＲ模型的玻璃体液用双抗体夹心法酶联免疫吸附测试（ｅｎｚｙｍｅｌｉｎｋｅｄｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔａｓａｙ,ＥＬＩＳＡ）试剂盒,检测样本中肿瘤坏死因子α（ｔｕｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒα,ＴＮＦα）、白细胞介素８（ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ８,ＩＬ８）和白细胞介素６（ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ６,ＩＬ６）的含量,并进行多元回归拟合曲线分析。结果ＴＮＦα在巨噬细胞注入后７天上升,２１天达高峰值,为３０９ｐｇ／ｍｌ;ＩＬ８与ＩＬ６在７～２１天也维持高水平,在１４天分别达高峰值１３２５ｐｇ／ｍｌ和９９８ｐｇ／ｍｌ。与对照组比较差异均有非常显著性。结论３种早期炎性细胞因子ＴＮＦα、ＩＬ８和ＩＬ６在本模型的炎症期和细胞增生期均呈明显的高水平,在瘢痕期水平降低,提示它们对眼内细胞增生具有重要的启动和调控作用。     

数字化便携式口腔综合医疗系统的研制与应用

目的：为满足野战救治、基层部队和巡回医疗中口腔医疗保健的需要,对数字化便携式多功能口腔医疗系统进行研制。方法：在调查、了解口腔颌面部创伤救治和基层部队、远航舰船与巡回医疗对便携口腔医疗装备多方面需求的基础上,将数字化口腔X线影像、口腔内窥镜和远程图像传输等技术应用到便携式多功能口腔医疗系统的开发中,与有关医疗器械公司合作,从系统组成、技术参数及多功能整合等方面对数字化便携口腔医疗系统进行研制。结果：数字化便携式口腔综合医疗系统研制成功,系统便于携带,操作简单,具备野战急救、基本口腔医疗及远程会诊等多方面的功能。结论：数字化便携式口腔综合医疗系统整合了多种先进口腔诊疗技术,功能较为全面,能满足野战救治和基层部队、远航舰船与巡回医疗中的口腔医疗和保健需求,能有效提高军队口腔卫勤保障水平,拓宽保障范围。     

耳聋左慈丸联合甲泼尼龙治疗突发性耳聋的临床研究

目的研究耳聋左慈丸联合注射用甲泼尼龙琥珀酸钠治疗突发性耳聋的临床疗效。方法选取2017年1月—2018年12月阜阳市人民医院收治的103例突发性耳聋患者为研究对象,将所有患者采用随机数字表法分为对照组(51例)和治疗组(52例)。对照组患者鼓室注射注射用甲泼尼龙琥珀酸钠,40 mg溶于适当生理盐水,1次/2 d;治疗组患者在对照组基础上口服耳聋左慈丸,1丸/次,2次/d。两组患者接受治疗10 d。观察两组的临床疗效,比较两组的听力阈值、血液流变学指标、血清炎症因子水平。结果治疗后,对照组和治疗组的总有效率分别为82.35%、96.15%,两组比较差异具有统计学意义(P0.05)。治疗后,两组患者1、2、4 kHz的听力阈值较治疗前均显著下降,同组治疗前后比较差异具有统计学意义(P0.05);且治疗后治疗组患者1、2、4kHz的听力阈值明显低于对照组,两组比较差异有统计学意义(P0.05)。治疗后,两组患者血浆黏度、纤维蛋白原和血小板聚集率均显著降低,同组治疗前后比较差异有统计学意义(P0.05);并且治疗组患者血浆黏度、纤维蛋白原和血小板聚集率明显低于对照组,两组比较差异有统计学意义(P0.05)。治疗后,两组患者超敏-C反应蛋白(hs-CRP)水平显著降低,白细胞介素-10(IL-10)水平显著升高,同组治疗前后比较差异有统计学意义(P0.05);并且治疗组患者hs-CRP、IL-10水平明显优于对照组,两组比较差异有统计学意义(P0.05)。结论耳聋左慈丸联合注射用甲泼尼龙琥珀酸钠治疗突发性耳聋具有较好的临床疗效,能降低听力阈值,改善患者血液流变学指标,降低血清炎性因子水平,具有一定的临床推广应用价值。