Cdh1小干扰RNA载体的构建及鉴定

目的:构建Cdh1小干扰RNA载体,并将其转染至Hela细胞进行鉴定.方法:根据pENTRTM/H1/TO中间载体要求,设计Cdh1小干扰RNA载体的干扰序列及无干扰作用的对照序列,合成相应的DNA单链,退火后连接到pENTRTM/H1/TO线性载体,形成完整载体,进行测序鉴定.分别将测序鉴定成功的Cdh1小干扰RNA载体及对照载体采用脂质体法转染Hela细胞,转染后48 h提取细胞总RNA及细胞总蛋白,采用实时定量PCR和Western Blot检测Cdh1的表达.结果:经测序鉴定成功构建Cdh1小干扰RNA载体和对照载体,分别命名为pENTR/shCdh1和pENTR/shcontrol.与未转染及转染pENTR/shcontrol的Hela细胞相比,转染pENTR/shCdh1的Hela细胞Cdh1表达降低(P《0.05).结论:成功构建Cdh1小干扰RNA载体,并能下调Hela细胞Cdh1的表达.     

经PAxpress导管盲探气管插管用于模拟颈项强直病人的可行性

PAxpress导管是一种新型的气道装置,可在保持头颈部不动的情况下不需任何辅助装置盲置进行通气,也可用来引导气管插管。本研究拟通过比较经PAxpress导管盲     

盛灿若教授运用咽四穴治疗咽喉病的经验

“咽四穴”是盛灿若教授根据中医理论和现代医学解剖学知识,结合多年临床经验总结的穴位。盛教授以其为主穴,配合辨证选穴,用于治疗声音嘶哑、声带麻痹、咽喉部肿瘤放疗所致的发音困难、声带小结、舌咽神经病、癔病性失语、急慢性咽喉炎等均收到满意的疗效     

盛灿若以“面三针”治疗面瘫的经验

盛灿若教授是江苏省中医院主任医师，从事针灸医、教、研工作数十年，医术精湛，治学严谨，积累了丰富的临床经验。余有幸拜盛为师，深受教益。盛教授自定“面三针”透刺，配合常规取穴治疗面瘫，疗效卓著。早期病人经治后病程明显缩短，即使是一些陈旧性、顽固性面瘫，也...     

永生化小鼠小胶质细胞P2X4siRNA靶点的筛选

目的 筛选永生化小鼠小胶质细胞特异性P2X4siRNA.方法 转染FAM-siRNA16 h后,激光扫描共聚焦显微镜检测永生化小鼠小胶质细胞转染效率;将3条特异性siRNA经lipofectamine 2000介导转染永生化小鼠小胶质细胞;72 h后半定量RT-PCR观察干扰前后P2X4 基因mRNA水平表达,比较对应不同位点的三对siRNA片段对P2X4基因的干扰效果,分析RNA干扰的特异性,从中筛选出特异性最高的一条siRNA;转染该序列72 h后Western blot检测P2X4基因蛋白表达.结果 激光扫描共聚焦显微镜显示转染效率达80%;三对siRNA片段中siRNA-F1的沉默效率最高,最大干扰效率达72.2%;Western blot显示转染siRNA-F1后P2X4基因蛋白表达下调.结论 siRNA-F1可有效下调永生化小鼠小胶质细胞中P2X4 基因mRNA表达水平,并且能明显下调P2X4蛋白表达.     

大鼠全脑缺血再灌注损伤后APC-Cdh1mRNA的表达变化

目的 研究大鼠全脑缺血再灌注损伤后APC-Cdh1的表达变化.方法 雄性SD大鼠60只,体重280-350 g,随机分成假手术组(SH组)、模型组(IR组).采用改良4-VO法建立SD大鼠全脑缺血模型,在损伤后不同时间点,免疫组化染色检测Cdh1的表达部位并且采用实时荧光定量PCR检测大鼠海马组织APC-Cdh1的表达.结果 与对照组相比,术后1d Cdh1 mRNA表达减少,术后3d显著升高,术后7d又降低.免疫组化检测显示APC-Cdh1在海马区及皮质区中均有大量表达.结论 APC-Cdh1可能与中枢神经系统的发育及损伤有着密切的关系.     

电针抗脑缺血再灌注后AQP4介导的血脑屏障损伤的作用研究

目的 探讨电针与水通道蛋白-4(AQP4)和血脑屏障(BBB)之间的内在联系,进一步阐明电针抗脑缺血再灌注后BBB损伤的作用机理.方法 选用健康SD雄性大鼠,阻塞大鼠大脑中动脉,制作脑缺血再灌注模型,分为正常对照组、模型组和电针组,电针组电针人中、百会穴30 min.采用神经功能缺损评分、脑水肿肿胀率测定和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分别观察大鼠神经功能缺损程度、AQP4和MMP-9mRNA在脑组织中的表达变化.结果 脑缺血再灌注6 h后,随着再灌注时间的延长,大鼠神经功能缺损及BBB破坏逐渐加重,AQP4和MMP-9mRNA的表达增加,在72 h均达到高峰;而电针组能够明显减轻大鼠神经功能缺损程度,减轻BBB的破坏,降低AQP4和MMP-9的表达(P<0.05,P<0.01);AQP4和MMP-9的变化有显著相关性.结论 电针可减轻脑缺血再灌注后血脑屏障损伤,减轻脑水肿,促进神经功能恢复.电针对脑缺血再灌注后BBB损伤的保护作用,可能是通过调节AQP4的表达实现的.     

APC-Cdh1在中枢神经系统中的表达分布特点

目的：探讨细胞周期末期促进复合物（APC）-Cdh1在中枢神经系统中的表达分布特点.方法：取健康成年雄性SD大鼠脑组织制作冰冻切片,免疫组化染色检测Cdh1的表达部位;免疫荧光双标检测Cdh1表达的细胞定位情况.取出生24h内乳鼠,原代培养神经元及神经干细胞,免疫组化检测NeuN进行神经元鉴定;Nestin染色进行神经干细胞初步鉴定;采用GFAP,MAP2免疫组化染色鉴定NSC分化特性.分别提取神经干细胞与神经元总RNA,采用实时定量PCR检测APC2个调节亚基Cdh1与CDC20的表达.结果：大鼠脑片免疫组化DAB染色显示Cdh1在海马、皮层均有大量表达,免疫荧光双标显示Cdh1表达主要定位于神经元中,星形胶质细胞表达较少.与神经干细胞相比,神经元中Cdh1 mRNA表达升高[（1.00±0.05）vs（2.10±0.07）,P〈0.05],但CDC20 mRNA几乎没有表达（1.00±0.04,0.02±0.01,P〈0.05）.结论：APC-Cdh1在大鼠脑组织中有大量表达,主要定位于神经元,且神经元中Cdh1表达高于神经干细胞.     

大鼠脊髓部分横切损伤后APC—Cdh1在损伤脊髓组织中的表达

目的 观察大鼠脊髓部分横切损伤后损伤脊髓组织中APC-Cdh1 mRNA的表达变化,探讨APC-Cdh1在脊髓损伤修复中的作用.方法 建立成年SD大鼠脊髓部分横切模型(T10～T11),将40只成年雄性SD大鼠随机分成对照组和模型组,于损伤后不同时间点按实验性脊髓损伤神经功能综合评分标准进行CBS评估,采用实时荧光定量PCR检测损伤区脊髓组织APC-Cdh1 mRNA的表达,并用免疫组化染色检测Cdh1表达的部位.结果 对照组和模型组术后不同时间点CBS评分差异有统计学意义(P＜0.05);与对照组比较,术后第1天Cdh1 mRNA表达减少(P＜0.05),术后第7天显著升高(P＜0.05),术后第14天又降低(P＜0.05).免疫组化检测结果显示在脊髓前角和后角中有大量APC-Cdh1表达.结论 APC-Cdh1在损伤脊髓组织中大量表达,表明其可能参与脊髓损伤修复的病理生理过程.